血小板凍結保存 (PLT-CRIO)

血小板は、止血と炎症の両方において重要な役割を果たす必須の血液成分である。 血小板減少症は、循環血小板数の減少と定義され、骨髄での産生障害、消費の増加、脾臓での捕捉、または出血エピソードに起因する可能性があり、適切な血小板数を回復し、必要に応じて出血を制御することを目的とした血小板輸注によって一般的に管理される。 臨床現場では、血小板輸注の大部分は予防的意図で血小板減少症を有する癌患者に投与され、主要な要件は輸注回数を最小限に抑えるための持続的な血小板生存である。 逆に、活動性出血患者では、血小板輸注は迅速かつ効率的な止血を提供することが期待され、その循環時間は重要度が低い。 現在、血小板濃厚液は室温（22-24℃）で連続撹拌しながら最大5日間保存され、未使用の場合は破棄される。 この保存方法は細菌汚染のリスクを伴い、血小板機能を損なう代謝的および構造的変化を誘導する。これは血小板保存障害（PSL）として知られる現象である。 さらに、短い保存期間は緊急時の血小板の利用可能性を制限する。SARS-CoV-2パンデミック時に観察されたように、予防的血小板輸注の需要は一定である一方、供給は深刻な逼迫状態にあった。 これに対応するため、レッジョ・エミリアの輸血医療ユニットは将来の不足を防ぐために血小板濃厚液の凍結保存を導入した。 凍結保存により最大2年間の血小板保存が可能となり、従来法に比べて魅力的な代替手段を提供する。保存期間の延長だけでなく、細菌汚染のリスク低減ももたらす。 近年の研究では、出血患者における凍結保存血小板の安全性と有効性が実証されているが、血液腫瘍患者における予防的使用に関するエビデンスは限られている。 主な懸念事項には、慢性凝固亢進状態の患者における血栓リスク悪化の可能性、および解凍時の増殖因子や炎症性サイトカインなどの生物活性分子の放出による発腫瘍促進効果が含まれる。 血小板と腫瘍の相互作用は複雑で、腫瘍促進と腫瘍抑制の両方の影響を及ぼし、そのバランスはしばしば腫瘍進行に傾くことが知られている。 したがって、本研究は凍結保存が血小板の機能、構造、形態に及ぼす影響を評価するとともに、解凍後の潜在的発腫瘍効果を評価することを目的とする。 比較アプローチを用いて、アフェレーシスにより得られた凍結保存血小板を、現在予防的輸注のゴールドスタンダードとされる標準的な室温保存血小板と並行して分析した。 プロトコルには、レッジョ・エミリアAUSL-IRCCS輸血医療ユニットでのドナー募集を含み、血小板濃厚液は6％ジメチルスルホキシド（DMSO）を使用して調製・凍結保存されたほか、他の輸血および凍結生物学分野で報告されている細胞毒性の低い細胞内・細胞外凍結保護剤を単独または組み合わせて用いた代替アプローチも検討された。 血小板サンプルは、凍結前および解凍後（再構成後1、3、6時間）の複数の時点で評価された。解析項目には、回収率、pH変化、生物活性因子の放出、活性化マーカー、止血能（血栓弾力性測定法による）、およびフローサイトメトリー、顕微鏡、シンクロトロンベースのフーリエ変換赤外（FTIR）顕微分光法による形態変化の評価が含まれた。 さらに、凍結保存血小板と新鮮血小板の潜在的发腫瘍活性を、乳癌および白血病細胞株を用いた共培養系による増殖試験と血小板-細胞相互作用試験に焦点を当ててin vitroで調査した。 本プロジェクトの主目的は、凍結保存が血小板機能に及ぼす影響を明らかにすることである。 副次目的は、血液腫瘍患者への予防的輸注に最も適した安全性プロファイルを有する凍結保存血小板製剤を同定することである。 本研究は、レッジョ・エミリアAUSL-IRCCS輸血医療ユニットのBioMetLabにより、すべてのドナーからのインフォームドコンセントを得た上で、ヘルシンキ宣言に準拠して実施された。