Criopreservação de Plaquetas (PLT-CRIO)

As plaquetas são componentes sanguíneos essenciais com papéis fundamentais tanto na hemostasia como na inflamação. A trombocitopenia, definida como uma redução na contagem de plaquetas em circulação, pode resultar de uma produção comprometida na medula óssea, consumo aumentado, sequestro esplénico ou episódios hemorrágicos, e é geralmente tratada através de transfusões de plaquetas que visam restaurar contagens adequadas e, quando necessário, controlar a hemorragia. Na prática clínica, a maioria das transfusões de plaquetas são administradas a doentes oncológicos trombocitopênicos com intenção profilática, onde o principal requisito é a sobrevivência sustentada das plaquetas para minimizar o número de transfusões. Por outro lado, em doentes com hemorragia ativa, espera-se que as transfusões de plaquetas proporcionem uma hemostasia rápida e eficiente, enquanto o seu tempo de circulação é menos relevante. Atualmente, os concentrados de plaquetas são armazenados à temperatura ambiente (22-24 °C) sob agitação contínua por até cinco dias, após os quais são descartados se não utilizados. Este método de armazenamento acarreta o risco de contaminação bacteriana e induz alterações metabólicas e estruturais que comprometem a função plaquetária, um fenómeno conhecido como lesão de armazenamento das plaquetas (PSL). Além disso, a curta vida útil limita a disponibilidade de plaquetas em situações de emergência, como observado durante a pandemia de SARS-CoV-2, quando a procura por transfusões profiláticas de plaquetas permaneceu constante enquanto o fornecimento estava severamente limitado. Em resposta, a Unidade de Medicina Transfusional de Reggio Emilia introduziu a criopreservação de concentrados de plaquetas para prevenir futuras escassezes. A criopreservação permite o armazenamento de plaquetas por até dois anos, oferecendo uma alternativa atrativa aos métodos convencionais, não apenas estendendo a duração do armazenamento, mas também reduzindo o risco de contaminação bacteriana. Embora estudos recentes tenham demonstrado a segurança e eficácia das plaquetas criopreservadas em doentes hemorrágicos, existem evidências limitadas para o seu uso em profilaxia entre doentes onco-hematológicos. As principais preocupações incluem o potencial de exacerbar o risco trombótico em doentes com hipercoagulabilidade crónica e a libertação de moléculas bioativas como fatores de crescimento e citocinas pró-inflamatórias durante o descongelamento, que poderão ter efeitos protumorigénicos. Sabe-se que as interações plaqueta-tumor são complexas, exercendo influências tanto pró como anti-tumorais, com o equilíbrio frequentemente a favorecer a progressão tumoral. O presente estudo visa, portanto, avaliar o impacto da criopreservação na funcionalidade, estrutura e morfologia das plaquetas, bem como avaliar potenciais efeitos protumorais após o descongelamento. Usando uma abordagem comparativa, plaquetas criopreservadas obtidas por aférese foram analisadas em conjunto com plaquetas armazenadas à temperatura ambiente padrão, atualmente consideradas o padrão-ouro para transfusão profilática. O protocolo envolve o recrutamento de dadores na Unidade de Medicina Transfusional da AUSL-IRCCS de Reggio Emilia, com concentrados de plaquetas preparados e criopreservados usando 6% de dimetil sulfóxido (DMSO), bem como abordagens alternativas empregando crioprotetores intracelulares e extracelulares, individualmente ou em combinação, com menor citotoxicidade reportada noutros contextos de transfusão e criobiologia. As amostras de plaquetas foram avaliadas antes do congelamento e após o descongelamento em múltiplos pontos temporais (1, 3 e 6 horas pós-reconstituição). As análises incluíram taxa de recuperação, alterações de pH, libertação de fatores bioativos, marcadores de ativação, potencial hemostático (via tromboelastografia) e alterações morfológicas avaliadas por citometria de fluxo, microscopia e microespectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) baseada em sincrotrão. Além disso, a potencial atividade protumoral das plaquetas criopreservadas versus plaquetas frescas foi investigada in vitro usando sistemas de co-cultura com linhas celulares de cancro da mama e leucemia, focando-se em testes de proliferação e interação plaqueta-célula. O objetivo principal deste projeto é determinar os efeitos do armazenamento criogénico na função plaquetária. O objetivo secundário é identificar o produto de plaquetas criopreservadas com o perfil de segurança mais adequado para transfusão profilática em doentes onco-hematológicos. O estudo é conduzido pelo BioMetLab na Unidade de Medicina Transfusional da AUSL-IRCCS de Reggio Emilia em conformidade com a Declaração de Helsínquia, após consentimento informado de todos os dadores.