Krioprezerwacja Płytek Krwi (PLT-CRIO)

Trombocyty są niezbędnymi składnikami krwi, które odgrywają kluczową rolę zarówno w hemostazie, jak i stanach zapalnych. Trombocytopenia, zdefiniowana jako zmniejszenie liczby krążących płytek krwi, może wynikać z upośledzonej produkcji szpiku kostnego, zwiększonego zużycia, sekwestracji śledzionowej lub epizodów krwotocznych i jest powszechnie leczona poprzez przetoczenia płytek krwi, mające na celu przywrócenie odpowiedniej liczby płytek oraz, w razie potrzeby, kontrolowanie krwawień. W praktyce klinicznej większość przetoczeń płytek krwi podaje się trombocytopenicznym pacjentom onkologicznym w celach profilaktycznych, gdzie głównym wymogiem jest utrzymanie przeżywalności płytek w celu minimalizacji liczby transfuzji. I odwrotnie, u pacjentów z aktywnym krwawieniem oczekuje się, że przetoczenia płytek krwi zapewnią szybką i efektywną hemostazę, podczas gdy czas ich krążenia ma mniejsze znaczenie. Obecnie koncentraty płytek krwi przechowuje się w temperaturze pokojowej (22-24 °C) przy ciągłym mieszaniu przez okres do pięciu dni, po czym są one utylizowane, jeśli nie zostały użyte. Ta metoda przechowywania niesie ze sobą ryzyko zanieczyszczenia bakteryjnego i wywołuje zmiany metaboliczne oraz strukturalne, które upośledzają funkcję płytek, zjawisko znane jako uszkodzenie płytek podczas przechowywania (PSL). Ponadto krótki okres przydatności do użycia ogranicza dostępność płytek krwi w sytuacjach nagłych, co zaobserwowano podczas pandemii SARS-CoV-2, gdy zapotrzebowanie na profilaktyczne przetoczenia płytek krwi utrzymywało się na stałym poziomie, podczas gdy podaż była poważnie ograniczona. W odpowiedzi na to, Jednostka Medycyny Transfuzyjnej w Reggio Emilia wprowadziła kriokonserwację koncentratów płytek krwi, aby zapobiec przyszłym niedoborom. Kriokonserwacja umożliwia przechowywanie płytek krwi do dwóch lat, oferując atrakcyjną alternatywę dla konwencjonalnych metod, nie tylko wydłużając czas przechowywania, ale także zmniejszając ryzyko zanieczyszczenia bakteryjnego. Chociaż ostatnie badania wykazały bezpieczeństwo i skuteczność kriokonserwowanych płytek krwi u pacjentów z krwawieniem, istnieją ograniczone dowody na ich stosowanie w profilaktyce u pacjentów onko-hematologicznych. Główne obawy obejmują potencjał zaostrzenia ryzyka zakrzepowego u pacjentów z przewlekłą hiperkoagulacją oraz uwalnianie podczas rozmrażania bioaktywnych cząsteczek, takich jak czynniki wzrostu i prozapalne cytokiny, co mogłoby mieć działanie pro-tumorogenne. Wiadomo, że interakcje między płytkami krwi a nowotworem są złożone, wywierając zarówno pro-, jak i antynowotworowy wpływ, przy czym równowaga często sprzyja progresji guza. Niniejsze badanie ma zatem na celu ocenę wpływu kriokonserwacji na funkcjonalność, strukturę i morfologię płytek krwi, a także ocenę potencjalnych efektów pro-nowotworowych po rozmrożeniu. Stosując podejście porównawcze, kriokonserwowane płytki krwi uzyskane przez aferezę analizowano obok standardowych płytek przechowywanych w temperaturze pokojowej, obecnie uważanych za złoty standard w transfuzji profilaktycznej. Protokół obejmuje rekrutację dawców w Jednostce Medycyny Transfuzyjnej AUSL-IRCCS w Reggio Emilia, z koncentratami płytek krwi przygotowanymi i kriokonserwowanymi przy użyciu 6% dimetylosulfotlenku (DMSO) oraz alternatywnych podejść wykorzystujących krioprotektanty wewnątrz- i zewnątrzkomórkowe, indywidualnie lub w kombinacji, przy czym w innych warunkach transfuzyjnych i kriobiologicznych odnotowano niższą cytotoksyczność. Próbki płytek krwi oceniano przed zamrożeniem i po rozmrożeniu w wielu punktach czasowych (1, 3 i 6 godzin po rekonstytucji). Analizy obejmowały wskaźnik odzysku, zmiany pH, uwalnianie czynników bioaktywnych, markery aktywacji, potencjał hemostatyczny (poprzez thromboelastografię) oraz zmiany morfologiczne oceniane za pomocą cytometrii przepływowej, mikroskopii i mikrospektroskopii fourierowskiej transformacji podczerwieni (FTIR) z wykorzystaniem synchrotronu. Ponadto, potencjalną aktywność pro-nowotworową kriokonserwowanych płytek krwi w porównaniu ze świeżymi badano in vitro przy użyciu układów współhodowli z liniami komórkowymi raka piersi i białaczki, koncentrując się na testach proliferacji i interakcji płytka-komórka. Głównym celem tego projektu jest określenie wpływu przechowywania kriogenicznego na funkcję płytek krwi. Celem drugorzędnym jest identyfikacja kriokonserwowanego produktu płytkowego o najbardziej odpowiednim profilu bezpieczeństwa do transfuzji profilaktycznej u pacjentów onko-hematologicznych. Badanie jest prowadzone przez BioMetLab w Jednostce Medycyny Transfuzyjnej AUSL-IRCCS w Reggio Emilia zgodnie z Deklaracją Helsińską, po uzyskaniu świadomej zgody wszystkich dawców.