Criopreservación de Plaquetas (PLT-CRIO)

Las plaquetas son componentes sanguíneos esenciales con roles fundamentales tanto en la hemostasia como en la inflamación. La trombocitopenia, definida como una reducción en el recuento de plaquetas circulantes, puede resultar de una producción deficiente en la médula ósea, un aumento del consumo, una secuestración esplénica o episodios hemorrágicos, y comúnmente se maneja mediante transfusiones de plaquetas destinadas a restaurar recuentos adecuados y, cuando es necesario, controlar la hemorragia. En la práctica clínica, la mayoría de las transfusiones de plaquetas se administran a pacientes oncológicos trombocitopénicos con intención profiláctica, donde el requisito principal es una supervivencia plaquetaria sostenida para minimizar el número de transfusiones. Por el contrario, en pacientes con hemorragia activa, se espera que las transfusiones de plaquetas proporcionen una hemostasia rápida y eficiente, mientras que su tiempo de circulación es de menor relevancia. Actualmente, los concentrados de plaquetas se almacenan a temperatura ambiente (22-24 °C) bajo agitación continua hasta por cinco días, después de lo cual se desechan si no se utilizan. Este método de almacenamiento conlleva el riesgo de contaminación bacteriana e induce cambios metabólicos y estructurales que comprometen la función plaquetaria, un fenómeno conocido como lesión por almacenamiento de plaquetas (PSL). Además, la corta vida útil limita la disponibilidad de plaquetas en situaciones de emergencia, como se observó durante la pandemia de SARS-CoV-2, cuando la demanda de transfusiones profilácticas de plaquetas se mantuvo constante mientras que el suministro estaba severamente limitado. En respuesta, la Unidad de Medicina Transfusional de Reggio Emilia introdujo la criopreservación de concentrados de plaquetas para prevenir futuras escaseces. La criopreservación permite el almacenamiento de plaquetas hasta por dos años, ofreciendo una alternativa atractiva a los métodos convencionales, no solo extendiendo la duración del almacenamiento sino también reduciendo el riesgo de contaminación bacteriana. Aunque estudios recientes han demostrado la seguridad y eficacia de las plaquetas criopreservadas en pacientes con hemorragia, existe evidencia limitada sobre su uso en profilaxis entre pacientes onco-hematológicos. Las principales preocupaciones incluyen el potencial de exacerbar el riesgo trombótico en pacientes con hipercoagulabilidad crónica y la liberación de moléculas bioactivas como factores de crecimiento y citoquinas proinflamatorias durante la descongelación, lo que podría tener efectos protumorigénicos. Se sabe que las interacciones plaqueta-tumor son complejas, ejerciendo influencias tanto pro como antitumorales, con un equilibrio que a menudo favorece la progresión tumoral. Por lo tanto, el presente estudio tiene como objetivo evaluar el impacto de la criopreservación en la funcionalidad, estructura y morfología plaquetaria, así como evaluar los posibles efectos protumorales después de la descongelación. Utilizando un enfoque comparativo, se analizaron plaquetas criopreservadas obtenidas por aféresis junto con plaquetas estándar almacenadas a temperatura ambiente, actualmente consideradas el estándar de oro para la transfusión profiláctica. El protocolo implica el reclutamiento de donantes en la Unidad de Medicina Transfusional de la AUSL-IRCCS de Reggio Emilia, con concentrados de plaquetas preparados y criopreservados usando dimetil sulfóxido (DMSO) al 6%, así como enfoques alternativos que emplean crioprotectores intracelulares y extracelulares, individualmente o en combinación, con menor citotoxicidad reportada en otros entornos de transfusión y criobiología. Las muestras de plaquetas se evaluaron antes de la congelación y después de la descongelación en múltiples puntos temporales (1, 3 y 6 horas post-reconstitución). Los análisis incluyeron tasa de recuperación, cambios de pH, liberación de factores bioactivos, marcadores de activación, potencial hemostático (via tromboelastografía) y alteraciones morfológicas evaluadas mediante citometría de flujo, microscopía y microespectroscopía infrarroja por transformada de Fourier (FTIR) basada en sincrotrón. Además, la posible actividad protumoral de las plaquetas criopreservadas versus las frescas se investigó in vitro utilizando sistemas de cocultivo con líneas celulares de cáncer de mama y leucemia, centrándose en pruebas de proliferación e interacción plaqueta-célula. El objetivo principal de este proyecto es determinar los efectos del almacenamiento criogénico en la función plaquetaria. El objetivo secundario es identificar el producto de plaquetas criopreservadas con el perfil de seguridad más adecuado para la transfusión profiláctica en pacientes onco-hematológicos. El estudio es realizado por el BioMetLab en la Unidad de Medicina Transfusional de AUSL-IRCCS de Reggio Emilia en cumplimiento de la Declaración de Helsinki, tras el consentimiento informado de todos los donantes.