Cryoconservation des plaquettes (PLT-CRIO)

Les plaquettes sont des composants sanguins essentiels jouant des rôles pivots dans l'hémostase et l'inflammation. La thrombocytopénie, définie comme une réduction du nombre de plaquettes circulantes, peut résulter d'une production médullaire altérée, d'une consommation accrue, d'une séquestration splénique ou d'épisodes hémorragiques, et est généralement prise en charge par des transfusions plaquettaires visant à rétablir des taux adéquats et, si nécessaire, à contrôler l'hémorragie. En pratique clinique, la majorité des transfusions plaquettaires sont administrées à des patients cancéreux thrombocytopéniques à titre prophylactique, où l'exigence principale est une survie plaquettaire soutenue pour minimiser le nombre de transfusions. Inversement, chez les patients présentant une hémorragie active, les transfusions plaquettaires sont censées fournir une hémostase rapide et efficace, tandis que leur temps de circulation est moins pertinent. Actuellement, les concentrés plaquettaires sont stockés à température ambiante (22-24 °C) sous agitation continue pendant jusqu'à cinq jours, après quoi ils sont jetés s'ils ne sont pas utilisés. Cette méthode de stockage comporte un risque de contamination bactérienne et induit des changements métaboliques et structurels qui compromettent la fonction plaquettaire, un phénomène connu sous le nom de lésion de stockage des plaquettes (LSP). En outre, la courte durée de conservation limite la disponibilité des plaquettes dans les situations d'urgence, comme observé pendant la pandémie de SARS-CoV-2, lorsque la demande de transfusions plaquettaires prophylactiques est restée constante tandis que l'approvisionnement était gravement tendu. En réponse, l'Unité de Médecine Transfusionnelle de Reggio Emilia a introduit la cryoconservation des concentrés plaquettaires pour prévenir les pénuries futures. La cryoconservation permet le stockage des plaquettes jusqu'à deux ans, offrant une alternative attrayante aux méthodes conventionnelles, non seulement en prolongeant la durée de stockage mais aussi en réduisant le risque de contamination bactérienne. Bien que des études récentes aient démontré la sécurité et l'efficacité des plaquettes cryoconservées chez les patients hémorragiques, les preuves de leur utilisation en prophylaxie chez les patients onco-hématologiques sont limitées. Les principales préoccupations incluent le potentiel d'exacerbation du risque thrombotique chez les patients présentant une hypercoagulabilité chronique et la libération de molécules bioactives telles que les facteurs de croissance et les cytokines pro-inflammatoires lors de la décongélation, qui pourraient avoir des effets pro-tumorigènes. Les interactions plaquettes-tumeur sont connues pour être complexes, exerçant des influences à la fois pro- et anti-tumorales, l'équilibre favorisant souvent la progression tumorale. La présente étude vise donc à évaluer l'impact de la cryoconservation sur la fonctionnalité, la structure et la morphologie des plaquettes, ainsi qu'à évaluer les effets pro-tumoraux potentiels après décongélation. En utilisant une approche comparative, les plaquettes cryoconservées obtenues par aphérèse ont été analysées parallèlement aux plaquettes standard stockées à température ambiante, actuellement considérées comme l'étalon-or pour la transfusion prophylactique. Le protocole implique le recrutement de donneurs à l'Unité de Médecine Transfusionnelle de l'AUSL-IRCCS de Reggio Emilia, avec des concentrés plaquettaires préparés et cryoconservés en utilisant 6% de diméthylsulfoxyde (DMSO) ainsi que des approches alternatives employant des cryoprotecteurs intracellulaires et extracellulaires, individuellement ou en combinaison, avec une cytotoxicité plus faible rapportée dans d'autres contextes transfusionnels et cryobiologiques. Les échantillons de plaquettes ont été évalués avant congélation et après décongélation à plusieurs moments (1, 3 et 6 heures après reconstitution). Les analyses incluaient le taux de récupération, les changements de pH, la libération de facteurs bioactifs, les marqueurs d'activation, le potentiel hémostatique (via thromboélastographie) et les altérations morphologiques évaluées par cytométrie en flux, microscopie et microspectroscopie infrarouge à transformée de Fourier (FTIR) basée sur le synchrotron. En outre, l'activité pro-tumorale potentielle des plaquettes cryoconservées par rapport aux plaquettes fraîches a été étudiée in vitro en utilisant des systèmes de co-culture avec des lignées cellulaires de cancer du sein et de leucémie, en se concentrant sur la prolifération et les tests d'interaction plaquettes-cellules. L'objectif principal de ce projet est de déterminer les effets du stockage cryogénique sur la fonction plaquettaire. L'objectif secondaire est d'identifier le produit plaquettaire cryoconservé présentant le profil de sécurité le plus approprié pour la transfusion prophylactique chez les patients onco-hématologiques. L'étude est menée par le BioMetLab à l'Unité de Médecine Transfusionnelle de l'AUSL-IRCCS de Reggio Emilia conformément à la Déclaration d'Helsinki, après consentement éclairé de tous les donneurs.