Trombosyyttien kryopreservointi (PLT-CRIO)

Trombosyytit ovat tärkeitä veren osia, joilla on keskeinen rooli sekä hemostaasissa että tulehduksessa. Trombosytopenia, joka määritellään kiertävän trombosyytitason alenemaksi, voi johtua luuytimen vähentyneestä tuotannosta, lisääntyneestä kulutuksesta, pernan varastointiin tai verenvuodoista, ja sitä hoidetaan yleisesti trombosyyttien transfuusion avulla, joiden tavoitteena on palauttaa riittävät trombosyytit ja tarvittaessa hallita verenvuotoa. Kliinisessä käytännössä suurin osa trombosyyttien transfuusioista annetaan trombosytopenisia syöpäpotilaille profylaktisena toimenpiteenä, jolloin ensisijainen vaatimus on kestävä trombosyytin elinikä transfuusioiden määrän minimoimiseksi. Vastaavasti aktiivisesti vuotaville potilaille trombosyyttien transfuusioiden odotetaan tarjoavan nopean ja tehokkaan hemostaasin, kun taas niiden kiertoaika on vähemmän merkityksellinen. Tällä hetkellä trombosyyttikonsentraatit säilytetään huoneenlämmössä (22–24 °C) jatkuvassa ravistelussa enintään viisi päivää, minkä jälkeen ne hävitetään, jos niitä ei ole käytetty. Tämä säilytysmenetelmä sisältää riskin bakteerisaastumiselle ja aiheuttaa aineenvaihdunta- ja rakennemuutoksia, jotka heikentävät trombosyytin toimintaa, ilmiö, joka tunnetaan nimellä trombosyytin varastointivaurio (PSL). Lisäksi lyhyt säilyvyysaika rajoittaa trombosyyttien saatavuutta hätätilanteissa, kuten havaittiin SARS-CoV-2-pandemian aikana, kun profylaattisten trombosyyttien transfuusioiden kysyntä pysyi vakiona, mutta tarjonta oli vakavasti heikentynyt. Vastauksena tähän Reggio Emilian verensiirtolääketieteen yksikkö otti käyttöön trombosyyttikonsentraattien jäädytyksen estämään tulevia pula-aikoja. Jäädyttäminen mahdollistaa trombosyyttien säilyttämisen jopa kahdeksi vuodeksi, tarjoten houkuttelevan vaihtoehdon perinteisille menetelmille, sillä se ei vain pidentä säilytysaikaa vaan myös vähentää bakteerisaastumisen riskiä. Vaikka tuoreet tutkimukset ovat osoittaneet jäädytettyjen trombosyyttien turvallisuuden ja tehon vuotavissa potilaissa, niiden käytöstä profylaksissa onko-hematologisissa potilaissa on vain vähän näyttöä. Suurimpia huolenaiheita ovat mahdollisuus pahentaa tromboottista riskiä kroonisesti hyperkoagulabilisissa potilaissa sekä bioaktiivisten molekyylien, kuten kasvutekijöiden ja pro-inflammatoristen sytokiinien, vapautuminen sulamisen aikana, mikä voisi edistää kasvainten muodostumista. Trombosyytin ja kasvaimen väliset vuorovaikutukset tunnetaan monimutkaisiksi, ja niillä on sekä kasvainten edistäviä että estäviä vaikutuksia, tasapaino usein suosien kasvainten etenemistä. Tämän tutkimuksen tarkoituksena on siis arvioida jäädytyksen vaikutusta trombosyytin toimintaan, rakenteeseen ja morfologiaan sekä arvioida mahdollisia kasvainten edistäviä vaikutuksia sulamisen jälkeen. Vertailumenetelmää käyttäen aferesillä saatuja jäädytettyjä trombosyyttejä analysoitiin rinnakkain standardihuoneenlämpöisesti säilytettyjen trombosyyttien kanssa, joita pidetään tällä hetkellä profylaattisen transfuusion kulta-standardina. Menettely sisältää luovuttajien rekrytoinnin Reggio Emilian AUSL-IRCCS:n verensiirtolääketieteen yksikössä, jossa trombosyyttikonsentraatit valmistetaan ja jäädytetään käyttäen 6-prosenttista dimetyylisulfoksidia (DMSO) sekä vaihtoehtoisia menetelmiä, joissa käytetään solunsisäisiä ja solunulkoisia kryoprotektantteja joko yksinään tai yhdistelminä, ja joilla on raportoitu alhaisempaa sytotoksisuutta muissa transfuusio- ja kryobiologisissa ympäristöissä. Trombosyytteinäytteitä arvioitiin ennen jäädyttämistä ja sulamisen jälkeen useina aikapisteinä (1, 3 ja 6 tuntia palautuksen jälkeen). Analyysit sisälsivät palautumisprosentin, pH-muutokset, bioaktiivisten tekijöiden vapautumisen, aktivaatiomarkkerit, hemostaattisen potentiaalin (tromboplastografian kautta) sekä morfologiset muutokset, joita arvioitiin virtaussytometrialla, mikroskopialla ja synkrotronipohjaisella Fourier-muunnosinfrapuna (FTIR) -mikrospektroskopialla. Lisäksi jäädytettyjen ja tuoreiden trombosyyttien mahdollista kasvainten edistävää aktiivisuutta tutkittiin in vitro käyttäen ko-kulttuurijärjestelmiä rintasyöpä- ja leukemia-solulinjojen kanssa, keskittyen kasvuun ja trombosyytin ja solun vuorovaikutustesteihin. Tämän projektin ensisijainen tavoite on määrittää kryogeenisen säilytyksen vaikutukset trombosyytin toimintaan. Toissijainen tavoite on tunnistaa jäädytetty trombosyytituote, jolla on sopivin turvallisuusprofiili profylaattista transfuusiota varten onko-hematologisissa potilaissa. Tutkimuksen suorittaa BioMetLab Reggio Emilian AUSL-IRCCS:n verensiirtolääketieteen yksikössä Helsingin julistuksen mukaisesti, kaikkien luovuttajien antaman tietoon perustuvan suostumuksen jälkeen.