Криоконсервация тромбоцитов (PLT-CRIO)

Тромбоциты являются важнейшими компонентами крови, играющими ключевую роль как в гемостазе, так и в воспалении. Тромбоцитопения, определяемая как снижение количества циркулирующих тромбоцитов, может быть результатом нарушения костномозгового производства, повышенного потребления, секвестрации в селезёнке или эпизодов кровотечения, и обычно лечится с помощью трансфузий тромбоцитов, направленных на восстановление адекватного количества и, при необходимости, контроль кровотечения. В клинической практике большинство трансфузий тромбоцитов проводится онкологическим пациентам с тромбоцитопенией с профилактической целью, где основным требованием является устойчивое выживание тромбоцитов для минимизации количества трансфузий. Напротив, у активно кровоточащих пациентов от трансфузий тромбоцитов ожидается быстрое и эффективное обеспечение гемостаза, в то время как время их циркуляции имеет меньшее значение. В настоящее время концентраты тромбоцитов хранятся при комнатной температуре (22-24 °C) при постоянном перемешивании до пяти дней, после чего, если не использованы, утилизируются. Этот метод хранения несёт риск бактериальной контаминации и вызывает метаболические и структурные изменения, которые нарушают функцию тромбоцитов — явление, известное как поражение тромбоцитов при хранении (PSL). Кроме того, короткий срок хранения ограничивает доступность тромбоцитов в чрезвычайных ситуациях, как это наблюдалось во время пандемии SARS-CoV-2, когда спрос на профилактические трансфузии тромбоцитов оставался постоянным, а поставки были severely ограничены. В ответ на это Отдел трансфузионной медицины в Реджо-Эмилии внедрил криоконсервацию концентратов тромбоцитов для предотвращения будущих дефицитов. Криоконсервация позволяет хранить тромбоциты до двух лет, предлагая привлекательную альтернативу традиционным методам, не только продлевая срок хранения, но и снижая риск бактериальной контаминации. Хотя недавние исследования продемонстрировали безопасность и эффективность криоконсервированных тромбоцитов у кровоточащих пациентов, ограниченные данные существуют относительно их использования для профилактики у онко-гематологических пациентов. Основные опасения включают потенциальное обострение тромботического риска у пациентов с хронической гиперкоагуляцией и высвобождение биологически активных молекул, таких как факторы роста и провоспалительные цитокины, во время оттаивания, что может оказывать протуморогенные эффекты. Известно, что взаимодействия тромбоцитов с опухолью сложны, оказывая как про-, так и противоопухолевое влияние, причём баланс часто смещён в сторону прогрессирования опухоли. Таким образом, настоящее исследование направлено на оценку влияния криоконсервации на функциональность, структуру и морфологию тромбоцитов, а также на оценку потенциальных протуморогенных эффектов после оттаивания. Используя сравнительный подход, криоконсервированные тромбоциты, полученные методом афереза, анализировались параллельно со стандартными тромбоцитами, хранящимися при комнатной температуре, которые в настоящее время считаются золотым стандартом для профилактической трансфузии. Протокол включает набор доноров в Отделе трансфузионной медицины AUSL-IRCCS Реджо-Эмилии, с приготовлением концентратов тромбоцитов и их криоконсервацией с использованием 6% диметилсульфоксида (ДМСО), а также альтернативных подходов с применением внутри- и внеклеточных криопротекторов, по отдельности или в комбинации, с меньшей цитотоксичностью, о которой сообщалось в других условиях трансфузиологии и криобиологии. Образцы тромбоцитов оценивались до замораживания и после оттаивания в несколько временных точек (1, 3 и 6 часов после восстановления). Анализы включали процент восстановления, изменения pH, высвобождение биологически активных факторов, маркеры активации, гемостатический потенциал (с помощью тромбоэластографии) и морфологические изменения, оцененные с помощью проточной цитометрии, микроскопии и синхротронной Фурье-трансформационной инфракрасной (FTIR) микроспектроскопии. Кроме того, потенциальная протуморогенная активность криоконсервированных по сравнению со свежими тромбоцитами исследовалась in vitro с использованием систем кокультивирования с клеточными линиями рака молочной железы и лейкемии, с фокусом на пролиферацию и тесты взаимодействия тромбоцитов с клетками. Основной целью данного проекта является определение эффектов криогенного хранения на функцию тромбоцитов. Вторичной целью является идентификация криоконсервированного тромбоцитарного продукта с наиболее подходящим профилем безопасности для профилактической трансфузии у онко-гематологических пациентов. Исследование проводится BioMetLab в Отделе трансфузионной медицины AUSL-IRCCS Реджо-Эмилии в соответствии с Хельсинкской декларацией, после получения информированного согласия от всех доноров.