成人における生物学的年齢への季節性の影響の評価 (SeasonAGE)

品質対策：研究者は、参加者の個人データの保護を確保し、法律で要求される場合を除き、すべての報告書、出版物、参加者サンプル、およびその他の開示を保護します。 個人データおよび医療データの処理は、スイスのデータプライバシーに関する規制に従い、かつORH（人間研究条例）規制の第5条に準拠して行われます。参加者は、参加者識別番号と施設識別番号のみで識別され、参加者の機密性が維持されます。 CRFおよびその他のプロジェクト固有の文書では、参加者は一意の参加者番号のみで識別されます。 すべての参加者研究記録は、アクセス制御されたエリアに安全に保管されます。 参加者名と参加者識別番号をリンクする識別コードリストは、参加者記録とは別に保管されます。 データはコード化されます。 参加者識別リストはサイトチームのみがアクセス可能であり、識別可能な情報は研究者ファイルにのみ保管されます。 研究者ファイルは、不正または偶発的な開示、改ざん、削除、複製、盗難からその研究情報を保護するために設計された安全で認証された電子システム（Veeva Vault）です。

コード化されたデータは電子データキャプチャ（EDC）に取り込まれ、Medidata RAVEは追跡可能性（監査証跡）を確保します。 EDCに記録されたデータは、データマネージャー、サイト担当者、および研究メンバーのみがアクセス可能です。

生物学的サンプルの分析後、結果はLabKeyという別のシステムにパスワード保護された方法で取り込まれ、分析を担当する実験室技術者のみがアクセス可能です。 最終的な実験室データは、LabKeyから監査証跡を含む安全なSharePointを介して割り当てられたデータマネージャーに送信されます。 RAVEとLabKey、および外部結果は、統計分析専用のソフトウェアであるLSAFに統合され、これはパスワード制御され、統計学者とデータマネージャーのみがアクセス可能です。 各ソフトウェアのサーバーとそのバックアップサーバーは、米国（Medidata RAVE）、ドイツ（LSAF）、スイス（LabKey）にホストされています。 このプロジェクトにおける生物学的材料は、参加者名ではなく一意の参加者番号で識別されます。 生物学的材料は、許可された担当者のみがアクセス可能な制限エリアに適切に保管されます。

データ転送の場合、Société des Produits Nestlé S.A.は、参加者の個人データの機密性と保護の高い基準を維持します。 臨床情報は、規制当局または研究スポンサーによる監視を除き、参加者の書面による許可なしに開示されません。 主任研究者または指定者は、研究期間中に収集された個人データと生物学的分析の結果への参加者のアクセス性を確保するために、適切な技術的および組織的対策を実施および維持します。 要求に応じて、主任研究者または指定者は、参加者に個人データの抽出を提供することを確保します。 主任研究者または指定者は、研究期間中に参加者が個人データまたは生物学的サンプルの修正または削除を要求した場合、直ちにスポンサーに通知するための適切な手順を実施します。 研究チームは、候補者が研究プロジェクトに含まれていない場合でも、コードリストを含む調査サイトファイルを、データプライバシーに関するネスレの方針に準拠した安全なリポジトリに25年間別々に保管およびアーカイブします。 治験マスターファイルは、ネスレの方針に従って25年間別々に保管されます。

現在の研究に加えて、参加者はネスレ生物資源センター（NCBR）のより広範な範囲での生物学的サンプルとデータの「さらなる再利用」に同意することを検討するよう提案されます。これに同意した場合、サンプルと健康関連データはバイオバンク規制（CERVD意見 - Req. 2020-00307）に記載されているように扱われます。

同意しない場合、データはこの研究の枠組みでのみ使用されます。 倫理委員会の承認と参加者の同意なしに、データがさらに使用されることはありません。

サンプルサイズ計算：

この研究のサンプルサイズは、3つの情報源に基づいています。 Koncevičius（2024）は、生物学的年齢時計の加速が、1年の振幅の概日リズム関連の変動（1日を通して）の対象であることを示しました。 Reed（2022）は、被験者内のエピジェネティック時計の相関が、最大15年離れた繰り返し間で高い（最大0.93の相関）ことを示しました。 Jokai（2023）は、男女両方の運動習慣のある健康な個人におけるPhenoAge時計加速の変動性が約5.4年（男性と女性の間で観察された平均）であることを示しました。

生物学的年齢における冬と夏の間の1年の変動を、5.4年の変動性（標準偏差）および0.93の被験者内相関を仮定して、対のあるt検定アプローチを使用し、3つの時計（PhenoAge、GrimAge、DuneDinPace）にわたる繰り返しによって誘発される多重性を考慮するために80%の検出力と0.0166（0.05/3）に設定されたアルファで実証するためには、完全解析セット（FAS）に46名の被験者が必要です。 20%の脱落率（登録されたが、任意の時点で生物学的年齢が計算されていない被験者）を考慮すると、46/0.8=58名の被験者（60名に切り上げ）を募集する必要があります。

計算にはSAS 9.4（LSAF v5.2.1）PROC POWERが使用されました。

統計分析計画：

主要エンドポイントの主分析は、完全解析セット母集団で評価されます。 感度分析は、プロトコル順守セットで主分析を複製して実施されます。

PhenoAgeおよびGrimAgeについて、生物学的年齢加速は、応答として生物学的年齢（年）、交絡因子として暦年齢（年）を使用した線形混合モデルを使用して個々のレベルで計算されます。 被験者識別子は、被験者内の連続する生物学的年齢測定間の相関を説明するためのランダム効果として含まれます。 自由度の計算にはKenward-Roger法が使用されます。 特定の個人において、特定の暦年齢での生物学的年齢加速は、固定回帰残差となります。

DuneDinPaceはすでに年齢加速を測定しているため、上記の変換は適用できません。

生物学的年齢加速は正規分布に従うと仮定されます。 季節間の生物学的年齢加速の差は、データの縦断的性質と被験者内相関を説明するために線形混合モデルで評価されます。 生物学的年齢加速が結果変数として使用され、サンプリングに関連する季節、BMI、性別、身体活動、喫煙状況、および民族性が固定交絡因子として使用されます。 被験者の識別子は、結果の被験者内相関を説明するためのランダム効果として使用されます。 自由度の計算にはKenward-Roger法が使用されます。

無作為化がないため、季節効果のモデル推定値は、身体活動など季節と強く相関する交絡因子の存在によって偏る可能性があります。 潜在的なバイアスを軽減するために、変数選択法（elastic net）が線形混合モデルに適用されます。 ランダム5分割交差検証が、縮小モデルとリッジ回帰パラメータの適切な値を選択するために使用されます。

季節固定効果が保持される場合、各季節での生物学的年齢加速の最小二乗平均が上記の縮小モデルから導出され、最小二乗平均の対差（冬 - 夏）が計算されます。

0.05/3（Bonferroni補正）未満の対差に関連するP値は、使用された時計について冬と夏の間の生物学的年齢加速の差を示すものとして解釈されます。

季節固定効果が縮小モデルに保持されない場合、これは使用された時計について季節関連の生物学的年齢加速の差がないことを示すものとして解釈されます。

各段階で、混合線形モデルは制限付き最尤アルゴリズムを使用して適合され、部分的な情報（不完全な軌跡を持つ被験者、例えば必要な2つの季節のうち1つの季節のみ利用可能）の使用を可能にします。 この方法は、欠測データが無作為欠測である場合に不偏です。

外れ値が存在する場合、それらの観測値を除外した感度分析が実施されます。 この感度分析と主要エンドポイントの主分析の間の結論の一貫性は、外れ値が結論に影響を与えないことの指標となります。