Avaliação do Efeito da Sazonalidade na Idade Biológica em Adultos (SeasonAGE)

Medidas de qualidade: o investigador garantirá a proteção dos dados pessoais dos participantes e que todos os relatórios, publicações, amostras dos participantes e quaisquer outras divulgações, exceto quando exigido por lei. O processamento de dados pessoais e médicos seguirá a regulamentação suíça em matéria de privacidade de dados e em conformidade com a regulamentação ORH (Ordinância de Investigação Humana), Art. 5. Os participantes são identificados apenas por um número de identificação do participante e número de identificação do local para manter a confidencialidade do participante. Nos CRFs e outros documentos específicos do projeto, os participantes são identificados apenas pelo seu número único de participante. Todos os registos do estudo dos participantes serão mantidos com segurança numa área de acesso controlado. As listas de códigos de identificação que ligam os nomes dos participantes aos números de identificação dos participantes serão armazenadas separadamente dos registos dos participantes. Os dados serão codificados. A lista de identificação dos participantes só será acessível pela equipa do local e as informações identificáveis serão mantidas apenas no ficheiro do investigador. O ficheiro do investigador é um sistema eletrónico seguro e certificado (Veeva Vault) dedicado a proteger essas informações do estudo de divulgação não autorizada ou acidental, de alteração, eliminação, cópia e roubo.

Os dados codificados são capturados no Electronic Data Capture (EDC), o Medidata RAVE garante a rastreabilidade (audit trail). Os dados registados no EDC são acessíveis apenas ao Gestor de Dados, pessoal do local e membros do estudo.

Após as análises das amostras biológicas, os resultados são capturados noutro sistema denominado LabKey de forma protegida por palavra-passe e acessível apenas pelos técnicos de laboratório responsáveis pelas análises. Os dados laboratoriais finais serão então enviados do LabKey para o gestor de dados atribuído através de um SharePoint seguro contendo audit trail. RAVE e LabKey, bem como os resultados externos, são integrados no LSAF, um software dedicado à análise estatística, que é controlado por palavra-passe e acessível apenas ao estatístico e ao Gestor de Dados. Os servidores de cada software e os seus servidores de backup estão alojados, por exemplo, nos Estados Unidos (Medidata RAVE), Alemanha (LSAF) e Suíça (LabKey). O material biológico neste projeto não é identificado pelo nome do participante, mas por um número único de participante. O material biológico é adequadamente armazenado numa área restrita, acessível apenas a pessoal autorizado.

Em caso de transferência de dados, a Société des Produits Nestlé S.A. manterá elevados padrões de confidencialidade e proteção dos dados pessoais dos participantes. As informações clínicas não serão divulgadas sem a permissão por escrito do participante, exceto para monitorização pelas Autoridades Reguladoras ou pelo promotor do estudo. O Investigador Principal ou representante implementará e manterá medidas técnicas e organizacionais apropriadas para garantir a acessibilidade dos participantes aos seus dados pessoais e aos seus resultados da análise biológica recolhidos durante o estudo. Sob pedido, o Investigador Principal ou representante garantirá fornecer extratos de dados pessoais aos participantes. O Investigador Principal ou representante implementará procedimentos apropriados para informar imediatamente o promotor sobre qualquer pedido do participante para retificar ou eliminar os seus dados pessoais ou amostras biológicas durante o estudo. Os ficheiros do local de investigação, incluindo a lista de códigos, serão mantidos e arquivados separadamente num repositório seguro em conformidade com as políticas da Nestlé relativamente à privacidade de dados pela equipa de investigação durante 25 anos, mesmo que o candidato não seja incluído no projeto de investigação. O Trial Master File será mantido separadamente durante 25 anos de acordo com a política da Nestlé.

Para além do estudo atual, será proposto aos participantes que considerem dar consentimento para a "reutilização futura" das suas amostras biológicas e dados no âmbito mais amplo do Nestlé Center of Biological Resources (NCBR); se consentirem com isto, as amostras e dados relacionados com a saúde serão tratados conforme descrito nas regulamentações da biobanco (parecer CERVD - Req. 2020-00307).

Se não consentirem, os dados serão utilizados apenas no âmbito desta investigação. Nenhum dado será utilizado posteriormente sem a aprovação da Comissão de Ética e o consentimento dos participantes.

Cálculo do tamanho da amostra:

O tamanho da amostra para este estudo baseia-se em três fontes de informação. Koncevičius (2024) mostrou que a aceleração do relógio de idade biológica está sujeita a variação relacionada com o ritmo circadiano (ao longo de um dia) de 1 ano de amplitude. Reed (2022) mostrou que a correlação intra-sujeito do relógio epigenético é elevada (até uma correlação de 0,93) entre repetições espaçadas até 15 anos. Jokai (2023) mostrou que a variabilidade da aceleração do relógio PhenoAge em indivíduos saudáveis de meia-idade de ambos os sexos foi de cerca de 5,4 anos (média observada entre Masculino e Feminino).

Para demonstrar uma variação de 1 ano entre Inverno e Verão na idade biológica, assumindo uma variabilidade (desvio padrão) de 5,4 anos e uma correlação intra-participantes de 0,93, utilizando uma abordagem de teste t emparelhado, 80% de poder e alfa definido para 0,0166 (0,05/3) para contabilizar a multiplicidade induzida pela repetição em 3 relógios (PhenoAge, GrimAge e DuneDinPace -- correção de Bonferroni), é necessário terminar com 46 sujeitos no conjunto de análise completo (FAS). Contabilizando uma taxa de desistência de 20% (sujeitos inscritos mas sem idade biológica calculada em qualquer ponto no tempo), é necessário recrutar 46/0,8=58 sujeitos (arredondado para 60 sujeitos).

Foi utilizado SAS 9.4 (LSAF v5.2.1) PROC POWER para os cálculos.

Plano de análises estatísticas:

A análise principal do endpoint primário será avaliada na população do Conjunto de Análise Completo. Uma análise de sensibilidade será conduzida replicando a análise principal no conjunto Por Protocolo.

Para PhenoAge e GrimAge, a aceleração da idade biológica será calculada a nível individual utilizando um modelo linear misto com idade biológica (anos) como resposta e idade cronológica (anos) como confundidor. O identificador do sujeito será incluído como efeito aleatório para contabilizar a correlação entre medidas consecutivas de idade biológica dentro do sujeito. O método Kenward-Roger será utilizado para o cálculo dos graus de liberdade. Para um determinado indivíduo, numa determinada idade cronológica, a aceleração da idade biológica será o resíduo de regressão fixo.

DuneDinPace já mede uma aceleração da idade, portanto a transformação acima mencionada não é aplicável.

Assume-se que a aceleração da idade biológica segue uma distribuição normal. A diferença na aceleração da idade biológica entre estações será avaliada com um modelo linear misto para contabilizar a natureza longitudinal dos dados e a correlação intra-sujeito. A aceleração da idade biológica será utilizada como variável de resultado, e a estação associada à amostragem, IMC, sexo, atividade física, estado de tabagismo e etnia utilizados como confundidores fixos. O identificador do sujeito será utilizado como efeito aleatório para contabilizar a correlação intra-sujeito do resultado. O método Kenward-Roger será utilizado para o cálculo dos graus de liberdade.

Na ausência de randomização, as estimativas do modelo do efeito sazonal podem ser enviesadas pela presença de confundidores altamente correlacionados com a estação, como a atividade física. Para mitigar o potencial enviesamento, um método de seleção de variáveis (elastic net) será aplicado ao modelo linear misto. Validação cruzada aleatória de 5-fold será utilizada para selecionar o modelo reduzido e o valor apropriado para o parâmetro de regressão ridge.

Se o efeito fixo da estação for retido, as médias dos mínimos quadrados da aceleração da idade biológica em cada estação serão derivadas do modelo reduzido acima, e as diferenças pareadas da média dos mínimos quadrados (inverno - verão) serão calculadas.

Valores de p associados com a diferença pareada inferiores a 0,05/3 (correção de Bonferroni) serão interpretados como indicativos de uma diferença na aceleração da idade biológica entre inverno e verão para o relógio utilizado.

Se o efeito fixo da estação não for retido no modelo reduzido, isto será interpretado como uma ausência de diferença associada à estação na aceleração da idade biológica para o relógio utilizado.

Em cada fase, o modelo linear misto será ajustado utilizando o algoritmo de máxima verosimilhança restrita, permitindo a utilização de informação parcial (sujeitos com trajetória incompleta, por exemplo, 1 estação disponível das duas necessárias). Este método é não enviesado se os dados em falta estiverem em falta ao acaso.

Na presença de valores atípicos extremos, uma análise de sensibilidade será conduzida excluindo a(s) observação(ões). A consistência nas conclusões entre esta análise de sensibilidade e a análise principal do endpoint primário será indicativa da ausência de impacto dos valores atípicos nas conclusões.