EVOOと代謝性肝臓健康におけるMASLD (EvoLiveR)

代謝機能障害関連脂肪性肝疾患（MASLD）は、世界中で最も広く蔓延している非感染性慢性疾患の一つであり、肝臓関連の死亡率および罹患率の主要な原因です。 現在、世界の成人人口の約38％、小児人口の7％から14％に影響を及ぼしており、その有病率は上昇を続け、2040年までに44％を超えると予測されています。

MASLDという用語は、脂肪性肝疾患の従来の命名法（非アルコール性脂肪性肝疾患、NAFLD）を置き換え、「脂肪肝」とメタボリックシンドロームの密接な関係を強調するために、2023年の多学会Delphiコンセンサス声明で報告されたように最近導入されました。

MASLDは、有意なアルコール摂取または他の脂肪症の原因がない状態での肝臓内トリグリセリドの蓄積と、以下の心血管代謝リスク因子の少なくとも1つを伴うことで定義されます：肥満、2型糖尿病、脂質異常症、または動脈性高血圧。 その病態生理学は多因子性であり、修正可能因子と非修正可能因子の両方が関与します：肝障害は、代謝機能障害、不健康な食事、身体活動不足、および遺伝的素因の複合的な影響から生じます。

現在、MASLDの管理に関する薬物療法について強いコンセンサスはありません。 このため、食事と身体活動に焦点を当てた生活習慣の変更が、依然としてMASLDの予防と管理の第一選択介入となっています。 最近の研究では、食事がMASLDの臨床的アプローチにおける主要な修正可能因子として特定されており、食事の質と食習慣が様々な代謝プロセスを調節する上で重要な役割を果たすことが強調されています。 科学的研究の大部分は、地中海食を、いくつかの非感染性慢性疾患に対する保護効果を持つ、健康上の利点と最も強く関連する食事パターンとして特定することに同意しています。

地中海食は、地中海に面する国々に住む人々が従う伝統的な食事パターンです。 その利点は主に、栄養素、抗酸化化合物、食物繊維が豊富な特徴的な食品を含むことに起因します。 地中海食は、果物、野菜、全粒穀物、豆類、ナッツ、エキストラバージンオリーブオイルの高摂取、魚と鶏肉の適度な摂取、赤身肉と加工製品の低摂取に基づいています。

エキストラバージンオリーブオイル（EVOO）は、地中海食で使用される主要な調理用脂肪です。 それは97-99％のトリグリセリドと、その生物学的活性および官能特性を担う少量の生物活性成分で構成されています。 EVOOの健康効果は、主にオレイン酸を含む一価不飽和脂肪酸の高含有量と、ポリフェノール、フィトステロール、トコフェロール、スクアレン、フェノール化合物などの一連の微量ではあるが貴重な成分によるものであり、これらはすべて抗炎症および抗酸化作用で知られています。

多くの臨床研究および介入研究により、特に地中海食療法に含まれる場合のEVOO補給が、MASLDを有する被験者の肝脂肪症を減少させることが示されています。 その肝保護効果は、炎症、酸化ストレス、およびインスリン抵抗性の改善に関連しており、これらはすべてMASLDの病態形成における重要なメカニズムです。 EVOOポリフェノールは、インターロイキン-6（IL-6）およびC反応性タンパク質（CRP）のレベルを低下させ、それにより抗炎症効果を発揮することが示されています。 EVOOの辛味を担う化合物であるオレオカンタールは、シクロオキシゲナーゼ-1および-2（COX-1/COX-2）を阻害することによりイブプロフェン様の作用を発揮し、炎症をさらに減少させます。

抗炎症特性に加えて、EVOOは強力な抗酸化物質としても認識されています。 EVOOを強化した地中海食は、8-ヒドロキシ-2-デオキシグアノシン（酸化DNA損傷の既知のマーカー）のレベルを減少させ、脂質過酸化を低下させ、腫瘍壊死因子-α（TNF-α）およびミエロペルオキシダーゼレベルを低下させ、肥満および正常体重の成人の両方でアディポネクチンおよびインターロイキン-10（IL-10）レベルを増加させることが示されています。 いくつかの研究では、食事後の血漿脂質過酸化物レベルの減少に関連するEVOOの食後抗酸化活性も報告されています。

EVOO摂取に関連する改善された肝機能は、肝臓炎症および損傷の重要なマーカーである肝臓酵素アラニンアミノトランスフェラーゼ（AST）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ALT）、およびγ-グルタミルトランスフェラーゼ（GGT）のレベルの減少にも反映されています。 研究では、2ヶ月から12ヶ月続くEVOO補給後に肝臓酵素レベルが減少することが報告されています。

その代謝的利点と一致して、特に地中海食の文脈でのEVOO消費は、血糖コントロールおよびインスリン感受性の有意な改善を示しています。 研究では、空腹時血糖、インスリン、およびHOMA-IR値の低下が報告されており、エキストラバージンオリーブオイルがインスリン抵抗性に密接に関連するMASLDの重要な構成要素であるグルコース代謝の改善に寄与することを示唆しています。

EVOO消費の肯定的な効果は、脂質プロファイルにも観察されています。 研究では、LDLコレステロールおよびトリグリセリドレベルの減少、ならびに高密度リポタンパク質（HDL）の活性および組成の改善が実証されています。

一部の著者は、代謝疾患および健康全般に対するEVOOの有益な効果が、腸内細菌叢の変化によって媒介される可能性があると示唆しています。 ラットでは、EVOOを強化した食事が腸内細菌叢プロファイルを変化させ、その生物多様性を増加させ、その後インスリン抵抗性および体重などの代謝パラメータを改善しました。 さらに、EVOOのフェノール成分の一つであるチロソールが、腸内細菌叢を調節し、脱共役タンパク質1（UCP1）などの因子の遺伝子発現増加を通じて脂肪組織の熱産生を引き起こすことにより、マウスで体重減少を誘発する可能性があると仮定されています。

エキストラバージンオリーブオイルの毎日の消費を含む食事は、体重減少および体重維持のための有効かつ効果的な選択肢とも見なされています。 1日あたり3杯または4杯のEVOOを含む食事は、低脂肪食よりも大きな体重減少をもたらすことが観察されています。 さらに、同じ量の体重減少に対して、毎日のEVOO消費は、毎日の一般的な種子油摂取と比較してより大きな脂肪量減少を生み出すことができます。 in vitroおよび動物研究によると、この追加的な脂肪量減少の根底にある潜在的なメカニズムは、脂肪細胞増殖を減少させ、褐色脂肪組織の活性化を介して熱産生を増加させるEVOOフェノールに起因します。

現在、欧州食品安全機関（EFSA）は、エキストラバージンオリーブオイルの保護効果は、少なくとも20gのEVOOまたは5.0mgのヒドロキシチロソールの毎日の摂取で得られると述べています。 しかしながら、これらの量が、特に過体重または肥満のMASLDを有する個人において同様に効果的であるかどうかはまだ不明です。

問題の研究は介入デザインであり、2つの介入群を含みます：当研究所の「Centro di Nutrizione Clinica per la Ricerca e la Cura dell'Obesità e delle Malattie del Metabolismo」から、MASLDを有し、20 ≤ BMI < 30の60人の連続した被験者が募集されます。

募集は、一般開業医による支援、自発的な参加、および既に進行中のコホート研究を利用して行われます。

介入は栄養学的なものになります：両群に登録された被験者は、年齢、性別、およびライフスタイルを考慮して設計された等カロリーの地中海式食事を、LARN第5版に従って受け取ります。

スクリーニング訪問（V0）中に評価された研究参加基準を満たす被験者は、選択バイアスを減らすために、最初の14日間、事前に定義された量のEVOO（3杯 - 約30g）を消費するよう招待されます。

14日間の終了時に、登録された被験者は2つの介入群に無作為化されます。

• グループA：このグループに登録された被験者は、食事で示された食品に加えて、1日あたり3杯（約30g）のEVOOを、処方された食事の総カロリーに含まれる270kcalとして消費するよう求められます。 オイルは一日のいつでも生で使用する必要があります。
• グループB：このグループに登録された被験者は、食事で示された食品に加えて、1日あたり9杯（約90g）のEVOOを、処方された食事の総カロリーに含まれる810kcalとして消費するよう求められます。 オイルは一日のいつでも生で使用する必要があります。

治療は約74日間続き、V0（スクリーニング訪問）に加えて、さらに3回の訪問が計画されています：

• V1：V0 + 14日
• V2：食事提供後30日
• V3：V2 + 30日

V0では、潜在的に適格な被験者は、インフォームドコンセントフォームに署名した後、以下を受けます：

• 肝脂肪症の程度を評価するためのFibroscan
• 人体測定特性の測定（身長、体重、およびBMI）

参加基準が満たされた場合、募集された被験者は、選択バイアスを減らすために、事前に定義された量のEVOO（3杯 - 約30g）を消費するよう求められます。

募集された被験者は、14日後（V0 + 14日）にV1のために戻るよう招待され、少なくとも12時間絶食して、参加基準を確認するためのFibroscanを受けます。

参加基準が確認された場合、被験者は研究に登録され、以下を受けます：

• 病歴（家族歴、生理学的、過去および最近の病理学的、および薬理学的）
• 人体測定特性の測定（体重およびBMI、ウエスト周囲長および首周囲長）
• 生体インピーダンス分析
• DEXA
• 静脈穿刺による採血
• オンライン食事質問票

被験者は以下を持参するよう求められます：

• 便サンプル
• 尿サンプル

（注：被験者がもはや参加基準を満たさない場合、生物学的サンプルは直ちに廃棄されます。）

V1で参加基準を満たす被験者は、2つの介入群のいずれかに無作為化されます。

被験者は、研究所の栄養士によって作成された等カロリーの食事をメールで受け取ります。

食事を受け取ってから30日後、彼らはV2のために戻り、少なくとも12時間絶食して、以下を受けます：

• 人体測定特性の測定（体重およびBMI、ウエスト周囲長および首周囲長）
• 生体インピーダンス分析
• 静脈穿刺による採血
• V2から30日後、被験者は最終訪問（V3）のために戻り、少なくとも12時間絶食して、以下を受けます：
• Fibroscan
• 人体測定特性の測定（体重およびBMI、ウエスト周囲長および首周囲長）
• 生体インピーダンス分析
• DEXA
• 静脈穿刺による採血

被験者は以下を持参するよう求められます：

• 便サンプル
• 尿サンプル

研究の目的の一つがMASLDに対するEVOO消費の効果を排他的に評価することであることを考慮すると、募集された被験者に有意な体重変化がないことが必要です。

したがって、参加者は週に一度自分の体重を報告するよう求められます。

有意な体重変動がある場合、栄養計画は調整されます。

得られた全血および血清サンプルは、中央検査室に送られ、ルーチンおよび栄養的、代謝的、心血管リスクパラメータ（空腹時血糖、インスリン、グリコヘモグロビン、トリグリセリド、総コレステロール、HDLおよびLDL、トランスアミナーゼ（ASTおよびALT）、γGT、クレアチニン、尿酸、完全血算、フェリチン、25-OH-ビタミンD、カルシウム、IGF-I、TSH、FT3、FT4、proBNP）の測定が行われます。

結果に基づいて、インスリン抵抗性の程度（HOMA指数）および肝脂肪症の程度FLI（fatty liver index）、人体測定（BMI、ウエスト周囲長）および生化学的パラメータ（トリグリセリドおよびγGT）に基づく、および肝線維症（FIB-4）が計算されます。

FIB-4は、被験者の年齢、ASTレベル、および血小板数を関連付けることにより、肝線維症のレベルを確立することを可能にします。

FIB-4の式は：（年齢[年] × AST [U/L]） / （（PLT [10(9)/L]） × （ALT [U/L]^(1/2)））です。

FIB-4スコア＜1.45は、高度線維症に対して90％の陰性的中率を持ち、一方FIB-4＞3.25は、高度線維症に対して97％の特異度と65％の陽性的中率を持ちます。

主要なアディポカイン（レプチン、アディポネクチン、RBP-4、レジスチン、ビスファチン、ケメリン）、主要な肝成長因子（HGF、フェツイン-A、FGF21、FGF19、PAI-1）、主要な炎症促進性サイトカイン（高感度C反応性タンパク質、IL-6、IL-8、およびTNF-α）および抗炎症性サイトカインIL-4も測定されます；他の分注は、脂質代謝および生化学的分析に使用されます。

脂質代謝分析は、募集された被験者の赤血球膜で行われます。

脂肪酸は抽出され、誘導体化され、60mの極性毛細管カラムとFID検出器を備えたガスクロマトグラフで分析されます。 脂質プロファイルは、標準として使用される脂肪酸メチルエステルのクロマトグラムと比較することで同定されます。

すべての訪問で収集された血清サンプルでは、抗酸化活性、炎症状態、および脱糖化酵素の血清レベルが、SOD1およびSOD2、および酵素フルクトサミン3-キナーゼおよびグリオキサラーゼを研究することで評価されます。

研究の被験者はまた、各訪問で、腸内細菌叢および糞便メタボロームの評価のために1つの便サンプル、および1つの尿サンプルを持参するよう求められます。

腸内細菌叢の評価のために、便サンプルからQIAamp FAST DNA Stool Mini Kit（Qiagen, Hilden, Germany）を使用して全細菌メタゲノムDNAが抽出されます。

マイクロバイオームの特徴付けは、DNAメタバーコーディングおよびショットガンメタトランスクリプトミクスアプローチを使用して行われます。

DNAメタバーコーディング分析は、細菌の16S rRNAの高変動V5-V6領域（MiSeq-Illuminaプラットフォーム）を使用して実施されます。

DNAメタバーコーディング分析で有意なサンプルは、メタトランスクリプトミクス分析（NextSeq 500 - Illuminaプラットフォーム）を受けます。

メタゲノミクスおよびメタトランスクリプトミクスデータは、バイオインフォマティクスパイプラインを使用して分析されます。

代謝産物分析は、便および尿サンプルで行われます；サンプルは揮発性有機化合物（VOC）について分析され、熱脱着され、直ちにRtx-WAXカラム（30 m × 0.25 mm i.d., 0.25 µm film thickness）（Restek）を備え、Clarus SQ8MS（Perkin Elmer）に結合されたClarus 680ガスクロマトグラフ（Perkin Elmer, Beaconsfield, UK）の加熱注入ポート（220 °C）に転送され、ソースおよび転送ライン温度はそれぞれ250および210 °Cに維持されます。

オプション訪問

登録された被験者は、研究への参加に影響を与えない完全に任意かつ自発的な基礎で、2回の外来S状結腸鏡検査（生検）を受けることに同意するかどうか尋ねられます。

1回のS状結腸鏡検査は、スクリーニング訪問後および研究開始前に行われます；2回目は治療終了時に行われます。

柔軟S状結腸鏡検査は、内視鏡を直腸に通し、S状結腸に進めることで行われます。 小さな組織サンプル（1-2 mm）を得るために、生検鉗子が使用されます。

生検サンプルは研究目的でドライアイス上に置かれます。 結腸粘膜サンプルの分析は、参加者またはその家族にとって追加の臨床的に関連する情報を提供しません。

研究に登録された被験者は、S状結腸鏡検査および関連する生検を受けることを拒否することができます。

S状結腸鏡検査および結腸粘膜生検は、いくつかのリスクと関連しています：

可能性は低い：

生検からの出血

柔軟S状結腸鏡検査中に使用される空気による腹部痙攣

稀ではあるが深刻：

結腸穿孔

被験者は、ルーチン血液検査、Fibroscan、生体インピーダンス分析、DEXA、および行われた場合はS状結腸鏡検査の報告を受け取ります

[1](comet://newtab/)