EVOO og metabolisk leverhelse ved MASLD (EvoLiveR)

Metabolisk dysfunksjon-assosiert steatotisk leversykdom (MASLD) er en av de mest utbredte ikke-smittsomme kroniske sykdommene globalt og den ledende årsaken til leverrelatert dødelighet og sykdomsbyrde.
Den rammer for tiden omtrent 38% av den voksne verdensbefolkningen og mellom 7% og 14% av den pediatriske befolkningen, og prognoser indikerer at forekomsten vil fortsette å øke, og overstige 44% innen 2040.

Begrepet MASLD ble nylig introdusert for å erstatte den tidligere nomenklaturen for steatotisk leversykdom (ikke-alkoholisk fettleversykdom, NAFLD) og for å understrege det nære forholdet mellom "fettlever" og metabolsk syndrom, som rapportert i 2023 multisamfunn Delphi-konsensusuttalelsen.

MASLD defineres av akkumulering av triglyserider i leveren i fravær av betydelig alkoholintak eller andre årsaker til steatose, sammen med minst en av følgende kardiometaboliske risikofaktorer: fedme, type 2 diabetes mellitus, dyslipidemi eller arteriell hypertensjon.
Dens patofysiologi er multifaktoriell og involverer både modifiserbare og ikke-modifiserbare faktorer: leverskade skyldes den kombinerte effekten av metabolsk dysfunksjon, usunn kosthold, fysisk inaktivitet og genetisk disposisjon.

For øyeblikket er det ingen sterk konsensus om farmakologisk terapi for behandling av MASLD.
Av denne grunn representerer livsstilsendring, med fokus på kosthold og fysisk aktivitet, fortsatt førstevalgsintervensjon for forebygging og behandling av MASLD.
Nylige studier identifiserer kosthold som en primær modifiserbar faktor i den kliniske tilnærmingen til MASLD, og fremhever den sentrale rollen til kostholdskvalitet og spisevaner i modulering av ulike metabolske prosesser.
Mesteparten av den vitenskapelige evidensen er enige om å identifisere middelhavskostholdet som det kostholdsmønsteret som er sterkest assosiert med helsefordeler, med beskyttende effekter mot flere ikke-smittsomme kroniske sykdommer.

Middelhavskostholdet er et tradisjonelt kostholdsmønster fulgt av befolkninger som lever i land som grenser til Middelhavet.
Dets fordeler skyldes hovedsakelig de karakteristiske matvarene det inkluderer, som er rike på næringsstoffer, antioksidantforbindelser og kostfiber.
Middelhavskostholdet er basert på høyt inntak av frukt, grønnsaker, fullkorn, belgfrukter, nøtter og ekstra jomfru olivenolje, moderat inntak av fisk og fjærfe, og lavt inntak av rødt kjøtt og bearbeidede produkter.

Ekstra jomfru olivenolje (EVOO) er det viktigste kulinariske fettet som brukes i middelhavskostholdet.
Den består av 97-99% triglyserider og en liten fraksjon av bioaktive komponenter som er ansvarlige for dens biologiske aktivitet og organoleptiske egenskaper.
Helseeffektene til EVOO skyldes dens høye innhold av enkeltumettede fettsyrer, hovedsakelig oljesyre, og en rekke mindre men verdifulle komponenter som polyfenoler, fytosteroler, tokofoler, skvalen og fenoliske forbindelser, alle kjent for sine antiinflammatoriske og antioksidative effekter.

Tallrike kliniske og intervensjonsstudier har vist at EVOO-tilskudd, spesielt når inkludert innenfor et middelhavskosthold-regime, kan redusere hepatisk steatose hos individer med MASLD.
Dens hepatoprotektive effekt er relatert til forbedringer i inflammasjon, oksidativt stress og insulinresistens, som alle er nøkkelmekanismer i patogenesen til MASLD.
EVOO-polyfenoler har vist seg å redusere nivåer av interleukin-6 (IL-6) og C-reaktivt protein (CRP), og utøver dermed en antiinflammatorisk effekt.
Oleocanthal, forbindelsen som er ansvarlig for den skarpe smaken til EVOO, utøver en ibuprofen-lignende virkning ved å hemme syklooxygenase-1 og -2 (COX-1/COX-2), og reduserer ytterligere inflammasjon.

I tillegg til sine antiinflammatoriske egenskaper, er EVOO også anerkjent som et kraftig antioksidant.
Et middelhavskosthold beriket med EVOO har vist seg å redusere nivåer av 8-hydroksi-2-deoksyguanosin (en kjent markør for oksidativ DNA-skade), redusere lipidperoksidasjon, senke tumornekrosefaktor-α (TNF-α) og myeloperoksidasenivåer, og øke adiponektin og interleukin-10 (IL-10) nivåer hos både overvektige og normalvektige voksne.
Flere studier har også rapportert postprandial antioksidantaktivitet av EVOO, knyttet til reduserte plasmalipidperoksidnivåer etter måltider.

Forbedret leverfunksjon assosiert med EVOO-inntak reflekteres også av reduserte nivåer av leverenzymer alaninaminotransferase (AST), aspartataminotransferase (ALT) og gamma-glutamyltransferase (GGT), som er viktige markører for leverinflammasjon og -skade.
Studier har rapportert reduksjoner i leverenzymnivåer etter EVOO-tilskudd som varer 2 til 12 måneder.

Konsistent med dens metabolske fordeler, har EVOO-forbruk, spesielt i sammenheng med middelhavskostholdet, vist signifikante forbedringer i glykemisk kontroll og insulinsensitivitet.
Studier har rapportert lavere fastende glukose, insulin og HOMA-IR-verdier, noe som tyder på at ekstra jomfru olivenolje bidrar til forbedret glukosemetabolisme, som er en nøkkelkomponent i MASLD og nært knyttet til insulinresistens.

Positive effekter av EVOO-forbruk har også blitt observert på lipidprofilen.
Studier har demonstrert reduksjoner i LDL-kolesterol og triglyseridnivåer, samt forbedringer i aktiviteten og sammensetningen av høydensitetslipoproteiner (HDL).

Noen forfattere foreslår at de gunstige effektene av EVOO på metabolske sykdommer og helse generelt kan være formidlet av endringer i tarmmikrobiotaen.
Hos rotter endret et kosthold beriket med EVOO tarmmikrobiota-profilen, økte dens biodiversitet og forbedret deretter metabolske parametere som insulinresistens og kroppsvekt.
I tillegg er det blitt hypotetisert at tyrosol, en av de fenoliske komponentene i EVOO, kan indusere vekttap hos mus ved å modulere tarmmikrobiotaen og utløse fettvevstermogenese gjennom økt genuttrykk av faktorer som avkoblingsprotein 1 (UCP1).

Et kosthold som inkluderer daglig forbruk av ekstra jomfru olivenolje anses også som et gyldig og effektivt alternativ for vekttap og vektopprettholdelse.
Det er blitt observert at kosthold som inkluderer tre eller fire spiseskjeer EVOO per dag fører til større vektreduksjon enn lavfettkosthold.
Videre, for samme mengde vekttap, kan daglig EVOO-forbruk produsere større reduksjon i fettmasse sammenlignet med daglig inntak av generiske frøoljer.
Ifølge in vitro- og dyrestudier er de potensielle mekanismene som ligger til grunn for denne ytterligere reduksjonen i fettmasse tilskrives EVOO-fenoler, som reduserer adipocytproliferasjon og øker termogenese via aktivering av brunt fettvev.

For øyeblikket sier det europeiske næringsmiddeltrygghetsbyrået (EFSA) at de beskyttende effektene av ekstra jomfru olivenolje kan oppnås med et daglig inntak på minst 20 g EVOO eller 5,0 mg hydroksytyrosol.
Det er imidlertid fortsatt uklart om disse mengdene er like effektive hos individer med MASLD, spesielt de som er overvektige eller har fedme.

Den aktuelle studien vil være intervensjonell i design og vil inkludere to intervensjonsgrupper: 60 påfølgende individer med MASLD og med 20 ≤ BMI < 30 vil bli rekruttert fra "Centro di Nutrizione Clinica per la Ricerca e la Cura dell'Obesità e delle Malattie del Metabolismo" ved vårt institutt.

Rekruttering vil bli støttet av allmennleger, gjennom frivillig deltakelse og ved å trekke på allerede pågående kohortstudier.

Intervensjonen vil være ernæringsmessig: deltakere i begge grupper vil motta en isokalorisk middelhavskosthold-stil diett, designet med hensyn til alder, kjønn og livsstil, i samsvar med LARN, 5. revisjon.

Deltakere som oppfyller studiens inklusjonskriterier, vurdert under et screeningsbesøk (V0), vil bli invitert, de første 14 dagene, til å konsumere en forhåndsdefinert mengde EVOO (3 spiseskjeer - omtrent 30 g), for å redusere seleksjonsbias.

Ved slutten av de 14 dagene vil innmeldte deltakere bli randomisert inn i to intervensjonsgrupper.

• Gruppe A: Deltakere i denne gruppen vil bli bedt om å konsumere, i tillegg til matvarene angitt i dietten, 3 spiseskjeer (omtrent 30 g) EVOO per dag, tilsvarende 270 kcal, inkludert i de totale kaloriene i den foreskrevne dietten.
  Oljen må brukes rå når som helst på dagen.
• Gruppe B: Deltakere i denne gruppen vil bli bedt om å konsumere, i tillegg til matvarene angitt i dietten, 9 spiseskjeer (omtrent 90 g) EVOO per dag, tilsvarende 810 kcal, inkludert i de totale kaloriene i den foreskrevne dietten.
  Oljen må brukes rå når som helst på dagen.

Behandlingen vil vare omtrent 74 dager og, i tillegg til V0 (Screeningsbesøk), er 3 ytterligere besøk planlagt:

• V1: V0 + 14 dager
• V2: 30 dager etter utlevering av dietten
• V3: V2 + 30 dager

På V0 vil potensielt kvalifiserte deltakere, etter å ha signert informert samtykkeskjema, gjennomgå:

• Fibroscan, for å vurdere graden av hepatisk steatose
• Måling av antropometriske egenskaper (høyde, vekt og BMI)

Hvis inklusjonskriteriene er oppfylt, vil rekrutterte deltakere bli bedt om å konsumere en forhåndsdefinert mengde EVOO (3 spiseskjeer - omtrent 30 g), for å redusere seleksjonsbias.

Rekrutterte deltakere vil bli invitert til å returnere for V1 etter 14 dager (V0 + 14 dager), fastende i minst 12 timer, for å gjennomgå en Fibroscan for å bekrefte inklusjonskriterier.

Hvis inklusjonskriteriene bekreftes, vil deltakere bli innmeldt i studien og vil gjennomgå:

• Medisinsk historie (familie, fysiologisk, tidligere og nylig patologisk, og farmakologisk)
• Måling av antropometriske egenskaper (vekt og BMI, midjemål og nakkeomkrets)
• Bioimpedansanalyse
• DEXA
• Blodprøvetaking ved venepunksjon
• Online kostholdsspørreskjema

Deltakere vil bli bedt om å ta med:

• En avføringsprøve
• En urinprøve

(NB: Hvis deltakeren ikke lenger oppfyller inklusjonskriteriene, vil de biologiske prøvene umiddelbart bli kassert.)

Deltakere som oppfyller inklusjonskriteriene på V1 vil bli randomisert til en av de to intervensjonsgruppene.

Deltakere vil motta den isokaloriske dietten på e-post, utarbeidet av institusjonens dietist.

Etter 30 dager fra mottak av dietten vil de returnere for V2 hvor, fastende i minst 12 timer, de vil gjennomgå:

• Måling av antropometriske egenskaper (vekt og BMI, midjemål og nakkeomkrets)
• Bioimpedansanalyse
• Blodprøvetaking ved venepunksjon
• Etter 30 dager fra V2 vil deltakere returnere for det endelige besøket (V3) hvor, fastende i minst 12 timer, de vil gjennomgå:
• Fibroscan
• Måling av antropometriske egenskaper (vekt og BMI, midjemål og nakkeomkrets)
• Bioimpedansanalyse
• DEXA
• Blodprøvetaking ved venepunksjon

Deltakere vil bli bedt om å ta med:

• En avføringsprøve
• En urinprøve

Med tanke på at et av studiens mål er å evaluere effekten av EVOO-forbruk utelukkende på MASLD, er det nødvendig at det ikke er signifikante vektendringer hos de rekrutterte deltakerne.

Derfor vil deltakere bli bedt om å rapportere sin kroppsvekt ukentlig.

I tilfelle signifikant vektvariasjon vil ernæringsplanen bli justert.

Hele blod- og serumprøver som er innhentet vil bli sendt til sentrallaboratoriet for måling av rutine- og ernærings-, metabolske og kardiovaskulære risikoparametere (fastende glukose, insulin, glykert hemoglobin, triglyserider, total kolesterol, HDL og LDL, transaminaser (AST og ALT), γGT, kreatinin, urinsyre, fullstendig blodtelling, ferritin, 25-OH-vitamin D, kalsium, IGF-I, TSH, FT3, FT4, proBNP).

Basert på resultatene vil graden av insulinresistens (HOMA-indeks) og graden av hepatisk steatose FLI (fatty liver index), basert på antropometriske (BMI, midjemål) og biokjemiske parametere (triglyserider og γGT), og hepatisk fibrose (FIB-4), bli beregnet.

FIB-4 muliggjør etablering av nivået av leverfibrose ved å relatere deltakerens alder, AST-nivåer og blodplatelettelling.

FIB-4-formelen er: (Alder [år] × AST [U/L]) / ((PLT [10(9)/L]) × (ALT [U/L]^(1/2))).

En FIB-4-poengsum <1,45 har en negativ prediktiv verdi på 90% for avansert fibrose, mens en FIB-4 >3,25 har en spesifisitet på 97% og en positiv prediktiv verdi på 65% for avansert fibrose.

De viktigste adipokinene (leptin, adiponektin, RBP-4, resistin, visfatin, chemerin), de viktigste hepatiske vekstfaktorene (HGF, Fetuin-A, FGF21, FGF19, PAI-1), de viktigste proinflammatoriske cytokinene (høyfølsomt C-reaktivt protein, IL-6, IL-8 og TNF-α) og det antiinflammatoriske cytokinet IL-4 vil også bli målt; andre aliquoter vil bli brukt til lipidomiske og biokjemiske analyser.

Lipidomisk analyse vil bli utført på de røde blodcellemembranene til rekrutterte deltakere.

Fettsyrer vil bli ekstrahert, derivatisert og analysert med en gasskromatograf utstyrt med en 60 m polar kapillærkolonne og en FID-detektor.
Lipidprofiler vil bli identifisert ved å sammenligne dem med kromatogrammer av fettsyremetylestere brukt som standarder.

I serumprøver samlet på alle besøk vil antioksidantaktivitet, inflammatorisk status og serumnivåer av deglykerende enzymer bli vurdert ved å studere SOD1 og SOD2, og enzymene Fruktosamin 3-Kinase og glyoksalase.

Deltakere i studien vil også bli bedt om å ta med, ved hvert besøk, 1 avføringsprøve for vurdering av tarmmikrobiota og fekal metabolom, og 1 urinprøve.

For vurdering av tarmmikrobiotaen vil total bakteriell metagenomisk DNA bli ekstrahert fra avføringsprøver ved bruk av QIAamp FAST DNA Stool Mini Kit (Qiagen, Hilden, Tyskland).

Mikrobiomkarakterisering vil bli utført ved bruk av en DNA-metabarcoding og shotgun-metatranskriptomisk tilnærming.

DNA-metabarcodinganalyse vil bli utført ved bruk av de hypervariable V5-V6-regionene av 16S rRNA for bakterier (MiSeq-Illumina-plattform).

Prøver som er signifikante på DNA-metabarcodinganalyse vil gjennomgå metatranskriptomisk analyse (NextSeq 500 - Illumina-plattform).

Metagenomiske og metatranskriptomiske data vil bli analysert ved bruk av bioinformatiske pipelines.

Metabolomiske analyser vil bli utført på avførings- og urinprøver; prøver vil bli analysert for flyktige organiske forbindelser (VOCs), som vil bli termisk desorbert og umiddelbart overført til den oppvarmede injeksjonsporten (220 °C) av en Clarus 680 gasskromatograf (Perkin Elmer, Beaconsfield, Storbritannia) utstyrt med en Rtx-WAX-kolonne (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 µm filmtykkelse) (Restek) og koblet til en Clarus SQ8MS (Perkin Elmer), med kilde- og overføringslinjetemperaturer holdt ved henholdsvis 250 og 210 °C.

Valgfrie besøk

Innmeldte deltakere vil bli spurt, på et helt valgfritt og frivillig grunnlag som ikke påvirker deltakelse i studien, om de samtykker til å gjennomgå to polikliniske sigmoidoskopier med kalde biopsier.

En sigmoidoskopi vil bli utført etter screeningsbesøket og før studiestart; den andre vil bli utført ved behandlingsslutt.

Fleksibel sigmoidoskopi utføres ved å føre et endoskop inn i endetarmen og føre det fremover inn i sigmoidcolon.
For å oppnå små vevsprøver (1-2 mm) brukes kalde biopsitenger.

Biopsiprøver vil bli plassert på tørris for forskningsformål.
Analyser av kolonslimhinneprøver vil ikke gi ytterligere klinisk relevant informasjon for deltakere eller deres familiemedlemmer.

Deltakere innmeldt i studien kan nekte å gjennomgå sigmoidoskopi og de tilhørende biopsiene.

Sigmoidoskopi og kolonslimhinnebiopsier er assosiert med noen risikoer:

Mindre sannsynlig:

Blødning fra biopsier

Abdominale kramper på grunn av luften brukt under fleksibel sigmoidoskopi

Sjelden men alvorlig:

Kolonsprengning

Deltakere vil motta rapportene av rutineblodprøver, Fibroscan, bioimpedansanalyse, DEXA og, hvis utført, sigmoidoskopi

[1](comet://newtab/)