EVOO en Metabole Levergezondheid in MASLD (EvoLiveR)

Metabole disfunctie-geassocieerde steatotische leverziekte (MASLD) is een van de meest wijdverspreide niet-overdraagbare chronische ziekten wereldwijd en de belangrijkste oorzaak van levergerelateerde mortaliteit en morbiditeit. Het treft momenteel ongeveer 38% van de wereldwijde volwassen bevolking en tussen 7% en 14% van de pediatrische bevolking, en projecties geven aan dat de prevalentie zal blijven stijgen, waarbij deze naar verwachting meer dan 44% zal bedragen tegen 2040.

De term MASLD werd recentelijk geïntroduceerd om de voormalige nomenclatuur voor steatotische leverziekte (niet-alcoholische leververvetting, NAFLD) te vervangen en om de nauwe relatie tussen "leververvetting" en het metabool syndroom te benadrukken, zoals gerapporteerd in de 2023 multisociety Delphi consensusverklaring.

MASLD wordt gedefinieerd door de ophoping van triglyceriden in de lever bij afwezigheid van significante alcoholinname of andere oorzaken van steatose, samen met ten minste één van de volgende cardiometabole risicofactoren: obesitas, diabetes mellitus type 2, dyslipidemie of arteriële hypertensie. De pathofysiologie is multifactorieel en omvat zowel beïnvloedbare als niet-beïnvloedbare factoren: leverschade is het gevolg van het gecombineerde effect van metabole disfunctie, ongezond voedingspatroon, lichamelijke inactiviteit en genetische aanleg.

Op dit moment is er geen sterke consensus over farmacologische therapie voor het beheer van MASLD. Om deze reden vertegenwoordigt leefstijlverandering, met focus op voeding en fysieke activiteit, nog steeds de eerstelijnsinterventie voor de preventie en het beheer van MASLD. Recente studies identificeren voeding als een primaire beïnvloedbare factor in de klinische benadering van MASLD, waarbij de sleutelrol van voedingskwaliteit en eetgewoonten bij het moduleren van verschillende metabole processen wordt benadrukt. Het grootste deel van het wetenschappelijk bewijs is het erover eens dat het mediterrane dieet wordt geïdentificeerd als het voedingspatroon dat het sterkst geassocieerd is met gezondheidsvoordelen, met beschermende effecten tegen verschillende niet-overdraagbare chronische ziekten.

Het mediterrane dieet is een traditioneel voedingspatroon dat wordt gevolgd door bevolkingsgroepen in landen grenzend aan de Middellandse Zee. De voordelen zijn voornamelijk toe te schrijven aan de karakteristieke voedingsmiddelen die het omvat, die rijk zijn aan voedingsstoffen, antioxidantverbindingen en voedingsvezels. Het mediterrane dieet is gebaseerd op hoge consumptie van fruit, groenten, volkoren granen, peulvruchten, noten en extra vierge olijfolie, matige inname van vis en gevogelte, en lage inname van rood vlees en bewerkte producten.

Extra vierge olijfolie (EVOO) is het belangrijkste culinaire vet dat wordt gebruikt in het mediterrane dieet. Het bestaat uit 97-99% triglyceriden en een kleine fractie van bioactieve componenten die verantwoordelijk zijn voor de biologische activiteit en organoleptische eigenschappen. De gezondheidseffecten van EVOO zijn te danken aan het hoge gehalte aan enkelvoudig onverzadigde vetzuren, voornamelijk oliezuur, en aan een reeks minder belangrijke maar waardevolle componenten zoals polyfenolen, fytosterolen, tocoferolen, squaleen en fenolverbindingen, allemaal bekend om hun ontstekingsremmende en antioxiderende effecten.

Talloze klinische en interventiestudies hebben aangetoond dat EVOO-suppletie, vooral wanneer opgenomen binnen een mediterraan dieetregime, hepatische steatose kan verminderen bij personen met MASLD. Het hepatoprotectieve effect is gerelateerd aan verbeteringen in ontsteking, oxidatieve stress en insulineresistentie, die allemaal sleutelmechanismen zijn in de pathogenese van MASLD. EVOO-polyfenolen zijn aangetoond om de niveaus van interleukine-6 (IL-6) en C-reactief proteïne (CRP) te verlagen, waardoor ze een ontstekingsremmend effect uitoefenen. Oleocanthal, de verbinding verantwoordelijk voor de scherpe smaak van EVOO, oefent een ibuprofen-achtige werking uit door cyclo-oxygenase-1 en -2 (COX-1/COX-2) te remmen, waardoor ontsteking verder wordt verminderd.

Naast de ontstekingsremmende eigenschappen wordt EVOO ook erkend als een krachtige antioxidant. Een mediterraan dieet verrijkt met EVOO is aangetoond om de niveaus van 8-hydroxy-2-deoxyguanosine (een bekende marker van oxidatieve DNA-schade) te verminderen, lipidperoxidatie te verminderen, tumornecrosefactor-α (TNF-α) en myeloperoxidase-niveaus te verlagen, en adiponectine en interleukine-10 (IL-10) niveaus te verhogen bij zowel obese als normaal gewicht volwassenen. Verschillende studies hebben ook postprandiale antioxiderende activiteit van EVOO gerapporteerd, gekoppeld aan verminderde plasmavetperoxide-niveaus na maaltijden.

Verbeterde leverfunctie geassocieerd met EVOO-inname wordt ook weerspiegeld door verminderde niveaus van leverenzymen alanineaminotransferase (AST), aspartaataminotransferase (ALT) en gamma-glutamyltransferase (GGT), die belangrijke markers zijn van leverontsteking en -schade. Studies hebben verminderingen in leverenzymniveaus gerapporteerd na EVOO-suppletie gedurende 2 tot 12 maanden.

In overeenstemming met de metabole voordelen heeft EVOO-consumptie, met name in de context van het mediterrane dieet, significante verbeteringen aangetoond in glykemische controle en insulinegevoeligheid. Studies hebben lagere nuchtere glucose, insuline en HOMA-IR-waarden gerapporteerd, wat suggereert dat extra vierge olijfolie bijdraagt aan verbeterde glucosemetabolisme, wat een sleutelcomponent is van MASLD en nauw verbonden is met insulineresistentie.

Positieve effecten van EVOO-consumptie zijn ook waargenomen op het lipidenprofiel. Studies hebben verminderingen in LDL-cholesterol en triglyceridenniveaus aangetoond, evenals verbeteringen in de activiteit en samenstelling van high-density lipoproteïnen (HDL).

Sommige auteurs suggereren dat de gunstige effecten van EVOO op metabole ziekten en gezondheid in het algemeen mogelijk worden gemedieerd door veranderingen in de darmmicrobiota. Bij ratten heeft een dieet verrijkt met EVOO het darmmicrobiota-profiel gewijzigd, waardoor de biodiversiteit werd vergroot en vervolgens metabole parameters zoals insulineresistentie en lichaamsgewicht verbeterden. Daarnaast is gehypothetiseerd dat tyrosol, een van de fenolische componenten van EVOO, gewichtsverlies bij muizen kan induceren door de darmmicrobiota te moduleren en vetweefselthermogenese te triggeren via verhoogde genexpressie van factoren zoals uncoupling protein 1 (UCP1).

Een dieet dat dagelijkse consumptie van extra vierge olijfolie omvat, wordt ook beschouwd als een geldige en effectieve optie voor gewichtsverlies en gewichtsbehoud. Het is waargenomen dat diëten die drie of vier eetlepels EVOO per dag omvatten, leiden tot grotere gewichtsreductie dan vetarme diëten. Bovendien kan voor dezelfde hoeveelheid gewichtsverlies dagelijkse EVOO-consumptie een grotere vetmassa-reductie produceren vergeleken met de dagelijkse inname van generieke zaadoliën. Volgens in vitro- en dierstudies zijn de potentiële mechanismen die ten grondslag liggen aan deze extra vermindering van vetmassa toe te schrijven aan EVOO-fenolen, die adipocytproliferatie verminderen en thermogenese verhogen via activering van bruin vetweefsel.

Momenteel stelt de Europese Autoriteit voor voedselveiligheid (EFSA) dat de beschermende effecten van extra vierge olijfolie kunnen worden verkregen met een dagelijkse inname van ten minste 20 g EVOO of 5,0 mg hydroxytyrosol. Het is echter nog onduidelijk of deze hoeveelheden even effectief zijn bij individuen met MASLD, met name degenen met overgewicht of obesitas.

De betreffende studie zal interventioneel van opzet zijn en zal twee interventiearmen omvatten: 60 opeenvolgende proefpersonen met MASLD en met 20 ≤ BMI < 30 zullen worden gerekruteerd vanuit het "Centro di Nutrizione Clinica per la Ricerca e la Cura dell'Obesità e delle Malattie del Metabolismo" van ons instituut.

Werving zal worden ondersteund door huisartsen, via vrijwillige deelname en door gebruik te maken van reeds lopende cohortstudies.

De interventie zal nutritioneel zijn: proefpersonen ingeschreven in beide armen zullen een isocalorisch mediterraan dieet ontvangen, ontworpen rekening houdend met leeftijd, geslacht en levensstijl, in overeenstemming met de LARN, 5e revisie.

Proefpersonen die voldoen aan de inclusiecriteria van de studie, beoordeeld tijdens een screeningsbezoek (V0), zullen worden uitgenodigd om gedurende de eerste 14 dagen een vooraf bepaalde hoeveelheid EVOO (3 eetlepels - ongeveer 30 g) te consumeren, om selectiebias te verminderen.

Aan het einde van de 14 dagen zullen ingeschreven proefpersonen worden gerandomiseerd in twee interventiearmen.

• Groep A: Proefpersonen ingeschreven in deze groep zullen worden gevraagd om, naast de voedingsmiddelen aangegeven in het dieet, 3 eetlepels (ongeveer 30 g) EVOO per dag te consumeren, overeenkomend met 270 kcal, opgenomen in de totale calorieën van het voorgeschreven dieet. De olie moet rauw worden gebruikt op elk moment van de dag.
• Groep B: Proefpersonen ingeschreven in deze groep zullen worden gevraagd om, naast de voedingsmiddelen aangegeven in het dieet, 9 eetlepels (ongeveer 90 g) EVOO per dag te consumeren, overeenkomend met 810 kcal, opgenomen in de totale calorieën van het voorgeschreven dieet. De olie moet rauw worden gebruikt op elk moment van de dag.

De behandeling zal ongeveer 74 dagen duren en, naast V0 (screeningsbezoek), zijn 3 verdere bezoeken gepland:

• V1: V0 + 14 dagen
• V2: 30 dagen na levering van het dieet
• V3: V2 + 30 dagen

Bij V0 zullen potentieel in aanmerking komende proefpersonen, na ondertekening van het geïnformeerde toestemmingsformulier, ondergaan:

• Fibroscan, om de mate van hepatische steatose te beoordelen
• Meting van antropometrische kenmerken (lengte, gewicht en BMI)

Als aan de inclusiecriteria wordt voldaan, zullen gerekruteerde proefpersonen worden gevraagd om een vooraf bepaalde hoeveelheid EVOO (3 eetlepels - ongeveer 30 g) te consumeren, om selectiebias te verminderen.

Gerekruteerde proefpersonen zullen worden uitgenodigd om terug te keren voor V1 na 14 dagen (V0 + 14 dagen), nuchter voor ten minste 12 uur, om een Fibroscan te ondergaan om de inclusiecriteria te bevestigen.

Als de inclusiecriteria worden bevestigd, zullen proefpersonen worden ingeschreven in de studie en zullen zij ondergaan:

• Medische geschiedenis (familie, fysiologisch, vroeger en recent pathologisch, en farmacologisch)
• Meting van antropometrische kenmerken (gewicht en BMI, middelomtrek en nek omtrek)
• Bio-impedantie analyse
• DEXA
• Bloedafname via venapunctie
• Online voedingsvragenlijst

Proefpersonen zullen worden gevraagd om mee te nemen:

• Een ontlastingsmonster
• Een urinemonster

(N.B.: Als de proefpersoon niet langer voldoet aan de inclusiecriteria, zullen de biologische monsters onmiddellijk worden vernietigd.)

Proefpersonen die voldoen aan de inclusiecriteria bij V1 zullen worden gerandomiseerd naar een van de twee interventiearmen.

Proefpersonen zullen het isocalorische dieet per e-mail ontvangen, opgesteld door de diëtist van de instelling.

Na 30 dagen na ontvangst van het dieet zullen zij terugkeren voor V2 waar, nuchter voor ten minste 12 uur, zij zullen ondergaan:

• Meting van antropometrische kenmerken (gewicht en BMI, middelomtrek en nek omtrek)
• Bio-impedantie analyse
• Bloedafname via venapunctie
• Na 30 dagen na V2 zullen proefpersonen terugkeren voor het laatste bezoek (V3) waar, nuchter voor ten minste 12 uur, zij zullen ondergaan:
• Fibroscan
• Meting van antropometrische kenmerken (gewicht en BMI, middelomtrek en nek omtrek)
• Bio-impedantie analyse
• DEXA
• Bloedafname via venapunctie

Proefpersonen zullen worden gevraagd om mee te nemen:

• Een ontlastingsmonster
• Een urinemonster

Gezien een van de doelstellingen van de studie is om het effect van EVOO-consumptie uitsluitend op MASLD te evalueren, is het noodzakelijk dat er geen significante gewichtsveranderingen zijn bij de gerekruteerde proefpersonen.

Daarom zullen deelnemers worden gevraagd om wekelijks hun lichaamsgewicht te rapporteren.

In het geval van significante gewichtsvariatie zal het voedingsplan worden aangepast.

Volbloed- en serummonsters die zijn verkregen, zullen worden verzonden naar het centrale laboratorium voor meting van routinematige en nutritionele, metabole en cardiovasculaire risicoparameters (nuchtere glucose, insuline, geglyceerd hemoglobine, triglyceriden, totaal cholesterol, HDL en LDL, transaminasen (AST en ALT), γGT, creatinine, urinezuur, volledig bloedbeeld, ferritine, 25-OH-vitamine D, calcium, IGF-I, TSH, FT3, FT4, proBNP).

Op basis van de resultaten zullen de mate van insulineresistentie (HOMA-index) en de mate van hepatische steatose FLI (fatty liver index), gebaseerd op antropometrische (BMI, middelomtrek) en biochemische parameters (triglyceriden en γGT), en hepatische fibrose (FIB-4), worden berekend.

FIB-4 maakt het mogelijk om het niveau van leverfibrose vast te stellen door de leeftijd van de proefpersoon, AST-niveaus en bloedplaatjestelling te relateren.

De FIB-4-formule is: (Leeftijd [jaren] × AST [U/L]) / ((PLT [10(9)/L]) × (ALT [U/L]^(1/2))).

Een FIB-4-score <1,45 heeft een negatieve voorspellende waarde van 90% voor geavanceerde fibrose, terwijl een FIB-4 >3,25 een specificiteit van 97% en een positieve voorspellende waarde van 65% heeft voor geavanceerde fibrose.

De belangrijkste adipokines (leptine, adiponectine, RBP-4, resistine, visfatine, chemerine), de belangrijkste hepatische groeifactoren (HGF, Fetuin-A, FGF21, FGF19, PAI-1), de belangrijkste pro-inflammatoire cytokines (hooggevoelig C-reactief proteïne, IL-6, IL-8 en TNF-α) en de anti-inflammatoire cytokine IL-4 zullen ook worden gemeten; andere aliquots zullen worden gebruikt voor lipidomische en biochemische analyses.

Lipidomische analyse zal worden uitgevoerd op de rode bloedcelmembranen van gerekruteerde proefpersonen.

Vetzuren zullen worden geëxtraheerd, gederivatiseerd en geanalyseerd met een gaschromatograaf uitgerust met een 60 m polaire capillaire kolom en een FID-detector. Lipidenprofielen zullen worden geïdentificeerd door ze te vergelijken met chromatogrammen van vetzurenmethylester gebruikt als standaarden.

In serummonsters verzameld bij alle bezoeken zullen antioxiderende activiteit, inflammatoire status en serum niveaus van deglycerende enzymen worden beoordeeld door studie van SOD1 en SOD2, en de enzymen Fructosamine 3-Kinase en glyoxalase.

Proefpersonen in de studie zullen ook worden gevraagd om, bij elk bezoek, 1 ontlastingsmonster mee te nemen voor de beoordeling van darmmicrobiota en fecaal metaboloom, en 1 urinemonster.

Voor de beoordeling van de darmmicrobiota zal totale bacteriële metagenomische DNA worden geëxtraheerd uit ontlastingsmonsters met behulp van de QIAamp FAST DNA Stool Mini Kit (Qiagen, Hilden, Duitsland).

Microbioomkarakterisering zal worden uitgevoerd met behulp van een DNA metabarcoding en shotgun metatranscriptomische benadering.

DNA metabarcoding analyse zal worden uitgevoerd met behulp van de hypervariabele V5-V6 regio's van 16S rRNA voor bacteriën (MiSeq-Illumina platform).

Monsters die significant zijn op DNA metabarcoding analyse zullen metatranscriptomische analyse ondergaan (NextSeq 500 - Illumina platform).

Metagenomische en metatranscriptomische data zullen worden geanalyseerd met behulp van bio-informatica pijplijnen.

Metabolomische analyses zullen worden uitgevoerd op ontlastings- en urinemonsters; monsters zullen worden geanalyseerd op vluchtige organische verbindingen (VOCs), die thermisch zullen worden gedesorbeerd en onmiddellijk worden overgebracht naar de verwarmde injectiepoort (220 °C) van een Clarus 680 gaschromatograaf (Perkin Elmer, Beaconsfield, VK) uitgerust met een Rtx-WAX kolom (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 µm filmdikte) (Restek) en gekoppeld aan een Clarus SQ8MS (Perkin Elmer), met bron- en transferlijntemperaturen gehandhaafd op respectievelijk 250 en 210 °C.

Optionele bezoeken

Ingeschreven proefpersonen zullen worden gevraagd, op volledig optionele en vrijwillige basis die de deelname aan de studie niet beïnvloedt, of zij akkoord gaan met het ondergaan van twee poliklinische sigmoïdoscopieën met koude biopten.

Eén sigmoïdoscopie zal worden uitgevoerd na het screeningsbezoek en voor de start van de studie; de tweede zal worden uitgevoerd aan het einde van de behandeling.

Flexibele sigmoïdoscopie wordt uitgevoerd door een endoscoop in het rectum te brengen en deze naar de sigmoïd colon te schuiven. Om kleine weefselmonsters (1-2 mm) te verkrijgen, worden koude biopsietangen gebruikt.

Bioptenmonsters zullen op droog ijs worden geplaatst voor onderzoeksdoeleinden. Analyses van colon slijmvliesmonsters zullen geen aanvullende klinisch relevante informatie opleveren voor deelnemers of hun familieleden.

Proefpersonen ingeschreven in de studie kunnen weigeren om sigmoïdoscopie en de gerelateerde biopten te ondergaan.

Sigmoïdoscopie en colon slijmvliesbiopten zijn geassocieerd met enkele risico's:

Minder waarschijnlijk:

Bloeding van biopten

Buikkrampen door de lucht gebruikt tijdens flexibele sigmoïdoscopie

Zeldzaam maar ernstig:

Colon perforatie

Proefpersonen zullen de rapporten ontvangen van routinematige bloedonderzoeken, Fibroscan, bio-impedantie analyse, DEXA en, indien uitgevoerd, sigmoïdoscopie

[1](comet://newtab/)