EVOO i Zdrowie Metaboliczne Wątroby w MASLD (EvoLiveR)

Metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease (MASLD) to jedna z najbardziej rozpowszechnionych niezakaźnych chorób przewlekłych na świecie i główna przyczyna zgonów i zachorowań związanych z wątrobą.
Obecnie dotyka około 38% dorosłej populacji świata oraz od 7% do 14% populacji pediatrycznej, a prognozy wskazują, że jej rozpowszechnienie będzie nadal rosło, przekraczając 44% do 2040 roku.

Termin MASLD został niedawno wprowadzony, aby zastąpić poprzednią nomenklaturę dla stłuszczeniowej choroby wątroby (niealkoholowa stłuszczeniowa choroba wątroby, NAFLD) i podkreślić ścisły związek między "stłuszczeniem wątroby" a zespołem metabolicznym, jak podano w wielostowarzyszeniowym oświadczeniu konsensusowym Delphi z 2023 roku.

MASLD definiuje się jako nagromadzenie triglicerydów w wątrobie przy braku znacznego spożycia alkoholu lub innych przyczyn stłuszczenia, wraz z co najmniej jednym z następujących kardiometabolicznych czynników ryzyka: otyłością, cukrzycą typu 2, dyslipidemią lub nadciśnieniem tętniczym.
Jego patofizjologia jest wieloczynnikowa i obejmuje zarówno modyfikowalne, jak i niemodyfikowalne czynniki: uszkodzenie wątroby wynika z połączonego działania dysfunkcji metabolicznej, niezdrowej diety, braku aktywności fizycznej i predyspozycji genetycznych.

Obecnie nie ma silnego konsensusu dotyczącego farmakoterapii w leczeniu MASLD.
Z tego powodu modyfikacja stylu życia, ze szczególnym uwzględnieniem diety i aktywności fizycznej, nadal stanowi interwencję pierwszego rzutu w zapobieganiu i leczeniu MASLD.
Ostatnie badania identyfikują dietę jako główny modyfikowalny czynnik w podejściu klinicznym do MASLD, podkreślając kluczową rolę jakości diety i nawyków żywieniowych w modulowaniu różnych procesów metabolicznych.
Większość dowodów naukowych zgadza się, że dieta śródziemnomorska jest wzorcem żywieniowym najsilniej związanym z korzyściami zdrowotnymi, z ochronnym działaniem przeciwko kilku niezakaźnym chorobom przewlekłym.

Dieta śródziemnomorska to tradycyjny wzorzec żywieniowy stosowany przez populacje mieszkające w krajach graniczących z Morzem Śródziemnym.
Jej korzyści są głównie przypisywane charakterystycznym produktom spożywczym, które zawiera, bogatym w składniki odżywcze, związki przeciwutleniające i błonnik pokarmowy.
Dieta śródziemnomorska opiera się na wysokim spożyciu owoców, warzyw, pełnych ziaren, roślin strączkowych, orzechów i oliwy z oliwek extra virgin, umiarkowanym spożyciu ryb i drobiu oraz niskim spożyciu czerwonego mięsa i produktów przetworzonych.

Oliwa z oliwek extra virgin (EVOO) to główny tłuszcz kulinarny stosowany w diecie śródziemnomorskiej.
Składa się z 97-99% triglicerydów i małej frakcji składników bioaktywnych odpowiedzialnych za jej aktywność biologiczną i właściwości organoleptyczne.
Korzyści zdrowotne EVOO wynikają z wysokiej zawartości jednonienasyconych kwasów tłuszczowych, głównie kwasu oleinowego, oraz z szeregu mniejszych, ale cennych składników, takich jak polifenole, fitosterole, tokoferole, skwalen i związki fenolowe, wszystkie znane ze swoich przeciwzapalnych i przeciwutleniających właściwości.

Liczne badania kliniczne i interwencyjne wykazały, że suplementacja EVOO, zwłaszcza w ramach diety śródziemnomorskiej, może zmniejszyć stłuszczenie wątroby u osób z MASLD.
Jego działanie hepatoprotekcyjne jest związane z poprawą stanu zapalnego, stresu oksydacyjnego i insulinooporności, które są kluczowymi mechanizmami w patogenezie MASLD.
Wykazano, że polifenole EVOO zmniejszają poziom interleukiny-6 (IL-6) i białka C-reaktywnego (CRP), wywierając tym samym działanie przeciwzapalne.
Oleokantal, związek odpowiedzialny za ostry smak EVOO, działa podobnie do ibuprofenu, hamując cyklooksygenazę-1 i -2 (COX-1/COX-2), dodatkowo zmniejszając stan zapalny.

Oprócz właściwości przeciwzapalnych, EVOO jest również uznawana za silny przeciwutleniacz.
Wykazano, że dieta śródziemnomorska wzbogacona EVOO zmniejsza poziom 8-hydroksy-2-deoksyguanozyny (znanego markera oksydacyjnego uszkodzenia DNA), zmniejsza peroksydację lipidów, obniża poziom czynnika martwicy nowotworów-α (TNF-α) i mieloperoksydazy oraz zwiększa poziom adiponektyny i interleukiny-10 (IL-10) zarówno u dorosłych otyłych, jak i z prawidłową masą ciała.
Kilka badań doniosło również o poposiłkowej aktywności przeciwutleniającej EVOO, związanej ze zmniejszonym poziomem nadtlenków lipidów w osoczu po posiłkach.

Poprawa funkcji wątroby związana ze spożyciem EVOO znajduje również odzwierciedlenie w obniżonym poziomie enzymów wątrobowych: aminotransferazy alaninowej (AST), aminotransferazy asparaginianowej (ALT) i gamma-glutamylotransferazy (GGT), które są ważnymi markerami zapalenia i uszkodzenia wątroby.
Badania donoszą o obniżeniu poziomu enzymów wątrobowych po suplementacji EVOO trwającej od 2 do 12 miesięcy.

Zgodnie z jej korzyściami metabolicznymi, spożycie EVOO, szczególnie w kontekście diety śródziemnomorskiej, wykazało znaczną poprawę kontroli glikemii i wrażliwości na insulinę.
Badania donoszą o niższych wartościach glukozy na czczo, insuliny i HOMA-IR, sugerując, że oliwa z oliwek extra virgin przyczynia się do poprawy metabolizmu glukozy, który jest kluczowym składnikiem MASLD i ściśle związany z insulinoopornością.

Pozytywne efekty spożycia EVOO zaobserwowano również na profil lipidowy.
Badania wykazały zmniejszenie poziomu cholesterolu LDL i triglicerydów, a także poprawę aktywności i składu lipoprotein o wysokiej gęstości (HDL).

Niektórzy autorzy sugerują, że korzystne efekty EVOO na choroby metaboliczne i zdrowie ogólnie mogą być mediowane przez zmiany w mikrobiocie jelitowej.
U szczurów dieta wzbogacona EVOO zmodyfikowała profil mikrobiomu jelitowego, zwiększając jego bioróżnorodność i następnie poprawiając parametry metaboliczne, takie jak insulinooporność i masa ciała.
Ponadto postawiono hipotezę, że tyrozol, jeden z fenolowych składników EVOO, może indukować utratę masy ciała u myszy poprzez modulację mikrobiomu jelitowego i wywoływanie termogenezy tkanki tłuszczowej poprzez zwiększoną ekspresję genów czynników takich jak białko rozprzęgające 1 (UCP1).

Dieta obejmująca codzienne spożycie oliwy z oliwek extra virgin jest również uważana za ważną i skuteczną opcję dla utraty i utrzymania masy ciała.
Zaobserwowano, że diety obejmujące trzy lub cztery łyżki EVOO dziennie prowadzą do większej redukcji masy ciała niż diety niskotłuszczowe.
Co więcej, przy tej samej ilości utraty masy ciała, codzienne spożycie EVOO może spowodować większą redukcję masy tłuszczowej w porównaniu z codziennym spożyciem ogólnych olejów roślinnych.
Według badań in vitro i na zwierzętach, potencjalne mechanizmy leżące u podstaw tej dodatkowej redukcji masy tłuszczowej są przypisywane fenolom EVOO, które zmniejszają proliferację adipocytów i zwiększają termogenezę poprzez aktywację brunatnej tkanki tłuszczowej.

Obecnie Europejski Urząd ds. Bezpieczeństwa Żywności (EFSA) stwierdza, że ochronne efekty oliwy z oliwek extra virgin można uzyskać przy dziennym spożyciu co najmniej 20 g EVOO lub 5,0 mg hydroksytyrozolu.
Jednak nadal nie jest jasne, czy te ilości są równie skuteczne u osób z MASLD, szczególnie tych z nadwagą lub otyłością.

Badanie w pytaniu będzie miało charakter interwencyjny i obejmie dwa ramiona interwencji: 60 kolejnych osób z MASLD i z 20 ≤ BMI < 30 zostanie zrekrutowanych z "Centro di Nutrizione Clinica per la Ricerca e la Cura dell'Obesità e delle Malattie del Metabolismo" naszego Instytutu.

Rekrutacja będzie wspierana przez lekarzy rodzinnych, poprzez dobrowolny udział i korzystając z już trwających badań kohortowych.

Interwencja będzie żywieniowa: osoby zarejestrowane w obu ramionach otrzymają izokaloryczną dietę w stylu śródziemnomorskim, zaprojektowaną z uwzględnieniem wieku, płci i stylu życia, zgodnie z LARN, 5. rewizją.

Osoby spełniające kryteria włączenia do badania, ocenione podczas Wizyty Przesiewowej (V0), zostaną zaproszone, przez pierwsze 14 dni, do spożycia z góry określonej ilości EVOO (3 łyżki - około 30 g), w celu zmniejszenia błędu selekcji.

Pod koniec 14 dni, zarejestrowane osoby zostaną randomizowane do dwóch ramion interwencji.

• Grupa A: Osoby zarejestrowane w tej grupie zostaną poproszone o spożywanie, oprócz produktów wskazanych w diecie, 3 łyżek (około 30 g) EVOO dziennie, co odpowiada 270 kcal, wliczonych w całkowitą kaloryczność przepisanej diety.
  Olej musi być używany na surowo o dowolnej porze dnia.
• Grupa B: Osoby zarejestrowane w tej grupie zostaną poproszone o spożywanie, oprócz produktów wskazanych w diecie, 9 łyżek (około 90 g) EVOO dziennie, co odpowiada 810 kcal, wliczonych w całkowitą kaloryczność przepisanej diety.
  Olej musi być używany na surowo o dowolnej porze dnia.

Leczenie będzie trwało około 74 dni i, oprócz V0 (Wizyta Przesiewowa), zaplanowano 3 kolejne wizyty:

• V1: V0 + 14 dni
• V2: 30 dni po dostarczeniu diety
• V3: V2 + 30 dni

Na V0, potencjalnie kwalifikujące się osoby, po podpisaniu formularza świadomej zgody, przejdą:

• Fibroscan, aby ocenić stopień stłuszczenia wątroby
• Pomiar cech antropometrycznych (wzrost, waga i BMI)

Jeśli kryteria włączenia są spełnione, zrekrutowane osoby zostaną poproszone o spożycie z góry określonej ilości EVOO (3 łyżki - około 30 g), w celu zmniejszenia błędu selekcji.

Zrekrutowane osoby zostaną zaproszone do powrotu na V1 po 14 dniach (V0 + 14 dni), na czczo przez co najmniej 12 godzin, aby przejść Fibroscan w celu potwierdzenia kryteriów włączenia.

Jeśli kryteria włączenia zostaną potwierdzone, osoby zostaną włączone do badania i przejdą:

• Wywiad lekarski (rodzinny, fizjologiczny, przebyte i aktualne choroby oraz farmakologiczny)
• Pomiar cech antropometrycznych (waga i BMI, obwód talii i obwód szyi)
• Analizę bioimpedancji
• DEXA
• Pobranie krwi przez venopunkturę
• Internetowy kwestionariusz żywieniowy

Osoby zostaną poproszone o przyniesienie:

• Próbki kału
• Próbki moczu

(Uwaga: Jeśli osoba nie spełnia już kryteriów włączenia, próbki biologiczne zostaną natychmiast zutylizowane.)

Osoby spełniające kryteria włączenia na V1 zostaną randomizowane do jednego z dwóch ramion interwencji.

Osoby otrzymają dietę izokaloryczną e-mailem, przygotowaną przez Dietetyka Instytucji.

Po 30 dniach od otrzymania diety, wrócą na V2, gdzie, na czczo przez co najmniej 12 godzin, przejdą:

• Pomiar cech antropometrycznych (waga i BMI, obwód talii i obwód szyi)
• Analizę bioimpedancji
• Pobranie krwi przez venopunkturę
• Po 30 dniach od V2, osoby wrócą na wizytę końcową (V3), gdzie, na czczo przez co najmniej 12 godzin, przejdą:
• Fibroscan
• Pomiar cech antropometrycznych (waga i BMI, obwód talii i obwód szyi)
• Analizę bioimpedancji
• DEXA
• Pobranie krwi przez venopunkturę

Osoby zostaną poproszone o przyniesienie:

• Próbki kału
• Próbki moczu

Biorąc pod uwagę, że jednym z celów badania jest ocena wpływu spożycia EVOO wyłącznie na MASLD, konieczne jest, aby nie było znaczących zmian masy ciała u zrekrutowanych osób.

Dlatego uczestnicy zostaną poproszeni o zgłaszanie swojej masy ciała co tydzień.

W przypadku znaczącej zmiany masy, plan żywieniowy zostanie dostosowany.

Próbki pełnej krwi i surowicy zostaną wysłane do centralnego laboratorium w celu pomiaru rutynowych oraz żywieniowych, metabolicznych i sercowo-naczyniowych parametrów ryzyka (glukoza na czczo, insulina, hemoglobina glikowana, triglicerydy, cholesterol całkowity, HDL i LDL, transaminazy (AST i ALT), γGT, kreatynina, kwas moczowy, morfologia krwi, ferrytyna, 25-OH-witamina D, wapń, IGF-I, TSH, FT3, FT4, proBNP).

Na podstawie wyników zostanie obliczony stopień insulinooporności (indeks HOMA) i stopień stłuszczenia wątroby FLI (fatty liver index), oparty na parametrach antropometrycznych (BMI, obwód talii) i biochemicznych (triglicerydy i γGT), oraz zwłóknienia wątroby (FIB-4).

FIB-4 pozwala ustalić poziom zwłóknienia wątroby, odnosząc wiek osoby, poziom AST i liczbę płytek krwi.

Wzór FIB-4 to: (Wiek [lata] × AST [U/L]) / ((PLT [10(9)/L]) × (ALT [U/L]^(1/2))).

Wynik FIB-4 <1,45 ma ujemną wartość predykcyjną 90% dla zaawansowanego zwłóknienia, natomiast FIB-4 >3,25 ma specyficzność 97% i dodatnią wartość predykcyjną 65% dla zaawansowanego zwłóknienia.

Zostaną również zmierzone główne adipokiny (leptyna, adiponektyna, RBP-4, rezystyna, wisfatyna, chemeryna), główne czynniki wzrostu wątroby (HGF, Fetuin-A, FGF21, FGF19, PAI-1), główne cytokiny prozapalne (białko C-reaktywne o wysokiej czułości, IL-6, IL-8 i TNF-α) i cytokina przeciwzapalna IL-4; inne alikwoty zostaną użyte do analiz lipidomicznych i biochemicznych.

Analiza lipidomiczna zostanie przeprowadzona na błonach czerwonych krwinek zrekrutowanych osób.

Kwasy tłuszczowe zostaną wyekstrahowane, poddane derywatyzacji i przeanalizowane za pomocą chromatografu gazowego wyposażonego w 60-metrową polarną kolumnę kapilarną i detektor FID.
Profile lipidowe zostaną zidentyfikowane przez porównanie ich z chromatogramami estrów metylowych kwasów tłuszczowych użytych jako standardy.

W próbkach surowicy pobranych na wszystkich wizytach zostanie oceniona aktywność przeciwutleniająca, stan zapalny i poziom enzymów deglikujących w surowicy poprzez badanie SOD1 i SOD2 oraz enzymów Fruktozaminy 3-Kinazy i glioksalazy.

Osoby w badaniu zostaną również poproszone o przyniesienie, na każdej wizycie, 1 próbki kału do oceny mikrobiomu jelitowego i metabolomu kałowego, oraz 1 próbki moczu.

Do oceny mikrobiomu jelitowego, całkowite metagenomiczne DNA bakteryjne zostanie wyekstrahowane z próbek kału za pomocą zestawu QIAamp FAST DNA Stool Mini Kit (Qiagen, Hilden, Niemcy).

Charakterystyka mikrobiomu zostanie przeprowadzona przy użyciu podejścia DNA metabarcoding i shotgun metatranskryptomiki.

Analiza DNA metabarcoding zostanie przeprowadzona przy użyciu hiperzmiennych regionów V5-V6 16S rRNA dla bakterii (platforma MiSeq-Illumina).

Próbki istotne w analizie DNA metabarcoding przejdą analizę metatranskryptomiczną (NextSeq 500 - platforma Illumina).

Dane metagenomiczne i metatranskryptomiczne zostaną przeanalizowane przy użyciu potoków bioinformatycznych.

Analizy metabolomiczne zostaną przeprowadzone na próbkach kału i moczu; próbki zostaną przeanalizowane pod kątem lotnych związków organicznych (VOCs), które zostaną termicznie odsorbowane i natychmiast przeniesione do podgrzewanego portu wtryskowego (220 °C) chromatografu gazowego Clarus 680 (Perkin Elmer, Beaconsfield, UK) wyposażonego w kolumnę Rtx-WAX (30 m × 0,25 mm i.d., grubość filmu 0,25 µm) (Restek) i sprzężonego z Clarus SQ8MS (Perkin Elmer), z temperaturą źródła i linii transferowej utrzymywaną odpowiednio na 250 i 210 °C.

Wizyty opcjonalne

Zarejestrowane osoby zostaną zapytane, w sposób całkowicie opcjonalny i dobrowolny, który nie wpływa na udział w badaniu, czy zgadzają się na przejście dwóch ambulatoryjnych sigmoidoskopii z biopsjami na zimno.

Jedna sigmoidoskopia zostanie wykonana po wizycie przesiewowej i przed rozpoczęciem badania; druga zostanie wykonana pod koniec leczenia.

Elastyczna sigmoidoskopia jest wykonywana przez wprowadzenie endoskopu do odbytnicy i przesunięcie go do esicy.
Aby uzyskać małe próbki tkanki (1-2 mm), używa się kleszczy biopsyjnych na zimno.

Próbki biopsji zostaną umieszczone na suchym lodzie do celów badawczych.
Analizy próbek błony śluzowej jelita grubego nie dostarczą dodatkowych klinicznie istotnych informacji dla uczestników lub ich członków rodziny.

Osoby zarejestrowane w badaniu mogą odmówić poddania się sigmoidoskopii i związanych z nią biopsji.

Sigmoidoskopia i biopsje błony śluzowej jelita grubego wiążą się z pewnymi ryzykami:

Mniej prawdopodobne:

Krwiak z biopsji

Skurcze brzucha spowodowane powietrzem używanym podczas elastycznej sigmoidoskopii

Rzadkie, ale poważne:

Perforacja jelita grubego

Osoby otrzymają wyniki rutynowych badań krwi, Fibroscan, analizy bioimpedancji, DEXA i, jeśli wykonano, sigmoidoskopii

[1](comet://newtab/)