AEPO et Santé Hépatique Métabolique dans la MASLD (EvoLiveR)

La maladie du foie stéatosique associée à un dysfonctionnement métabolique (MASLD) est l'une des maladies chroniques non transmissibles les plus répandues dans le monde et la principale cause de mortalité et de morbidité liées au foie. Elle touche actuellement environ 38 % de la population adulte mondiale et entre 7 % et 14 % de la population pédiatrique, et les projections indiquent que sa prévalence continuera d'augmenter, dépassant 44 % d'ici 2040.

Le terme MASLD a été récemment introduit pour remplacer l'ancienne nomenclature de la maladie du foie stéatosique (maladie du foie gras non alcoolique, NAFLD) et pour souligner la relation étroite entre le « foie gras » et le syndrome métabolique, comme indiqué dans la déclaration de consensus Delphi multisociétale de 2023.

La MASLD est définie par l'accumulation de triglycérides dans le foie en l'absence de consommation d'alcool significative ou d'autres causes de stéatose, ainsi que par au moins un des facteurs de risque cardiométabolique suivants : obésité, diabète de type 2, dyslipidémie ou hypertension artérielle. Sa physiopathologie est multifactorielle et implique à la fois des facteurs modifiables et non modifiables : les lésions hépatiques résultent de l'effet combiné du dysfonctionnement métabolique, d'une alimentation malsaine, de l'inactivité physique et de la prédisposition génétique.

À l'heure actuelle, il n'existe pas de consensus fort sur la thérapie pharmacologique pour la prise en charge de la MASLD. Pour cette raison, la modification du mode de vie, en mettant l'accent sur l'alimentation et l'activité physique, représente toujours l'intervention de première intention pour la prévention et la prise en charge de la MASLD. Des études récentes identifient l'alimentation comme un facteur modifiable primordial dans l'approche clinique de la MASLD, soulignant le rôle clé de la qualité de l'alimentation et des habitudes alimentaires dans la modulation de divers processus métaboliques. La plupart des preuves scientifiques s'accordent à identifier le régime méditerranéen comme le modèle alimentaire le plus fortement associé aux bienfaits pour la santé, avec des effets protecteurs contre plusieurs maladies chroniques non transmissibles.

Le régime méditerranéen est un modèle alimentaire traditionnel suivi par les populations vivant dans les pays bordant la mer Méditerranée. Ses bienfaits sont principalement attribuables aux aliments caractéristiques qu'il inclut, riches en nutriments, en composés antioxydants et en fibres alimentaires. Le régime méditerranéen est basé sur une consommation élevée de fruits, de légumes, de céréales complètes, de légumineuses, de noix et d'huile d'olive extra vierge, une consommation modérée de poisson et de volaille, et une faible consommation de viande rouge et de produits transformés.

L'huile d'olive extra vierge (EVOO) est la principale matière grasse culinaire utilisée dans le régime méditerranéen. Elle est composée de 97 à 99 % de triglycérides et d'une petite fraction de composés bioactifs responsables de son activité biologique et de ses propriétés organoleptiques. Les effets bénéfiques de l'EVOO sur la santé sont dus à sa teneur élevée en acides gras monoinsaturés, principalement l'acide oléique, et à une série de composants mineurs mais précieux tels que les polyphénols, les phytostérols, les tocophérols, le squalène et les composés phénoliques, tous connus pour leurs effets anti-inflammatoires et antioxydants.

De nombreuses études cliniques et interventionnelles ont montré que la supplémentation en EVOO, en particulier lorsqu'elle est incluse dans un régime de type méditerranéen, peut réduire la stéatose hépatique chez les sujets atteints de MASLD. Son effet hépatoprotecteur est lié à des améliorations de l'inflammation, du stress oxydatif et de la résistance à l'insuline, qui sont tous des mécanismes clés dans la pathogenèse de la MASLD. Il a été démontré que les polyphénols de l'EVOO réduisent les niveaux d'interleukine-6 (IL-6) et de protéine C-réactive (CRP), exerçant ainsi un effet anti-inflammatoire. L'oléocanthal, le composé responsable du goût piquant de l'EVOO, exerce une action similaire à celle de l'ibuprofène en inhibant la cyclooxygénase-1 et -2 (COX-1/COX-2), réduisant encore davantage l'inflammation.

Outre ses propriétés anti-inflammatoires, l'EVOO est également reconnue comme un puissant antioxydant. Un régime méditerranéen enrichi en EVOO a montré réduire les niveaux de 8-hydroxy-2-désoxyguanosine (un marqueur connu des dommages oxydatifs à l'ADN), diminuer la peroxydation lipidique, abaisser les niveaux de facteur de nécrose tumorale-α (TNF-α) et de myéloperoxydase, et augmenter les niveaux d'adiponectine et d'interleukine-10 (IL-10) chez les adultes obèses et de poids normal. Plusieurs études ont également rapporté une activité antioxydante postprandiale de l'EVOO, liée à une réduction des niveaux de peroxydes lipidiques plasmatiques après les repas.

L'amélioration de la fonction hépatique associée à la consommation d'EVOO se reflète également par une réduction des niveaux des enzymes hépatiques alanine aminotransférase (AST), aspartate aminotransférase (ALT) et gamma-glutamyl transférase (GGT), qui sont des marqueurs importants de l'inflammation et des dommages hépatiques. Des études ont rapporté des réductions des niveaux d'enzymes hépatiques suite à une supplémentation en EVOO d'une durée de 2 à 12 mois.

Conformément à ses bénéfices métaboliques, la consommation d'EVOO, en particulier dans le contexte du régime méditerranéen, a montré des améliorations significatives du contrôle glycémique et de la sensibilité à l'insuline. Des études ont rapporté des valeurs plus basses de glucose à jeun, d'insuline et d'HOMA-IR, suggérant que l'huile d'olive extra vierge contribue à améliorer le métabolisme du glucose, qui est une composante clé de la MASLD et étroitement lié à la résistance à l'insuline.

Des effets positifs de la consommation d'EVOO ont également été observés sur le profil lipidique. Des études ont démontré des réductions des niveaux de cholestérol LDL et de triglycérides, ainsi que des améliorations de l'activité et de la composition des lipoprotéines de haute densité (HDL).

Certains auteurs suggèrent que les effets bénéfiques de l'EVOO sur les maladies métaboliques et la santé en général pourraient être médiés par des changements dans le microbiote intestinal. Chez les rats, un régime enrichi en EVOO a modifié le profil du microbiote intestinal, augmentant sa biodiversité et améliorant par la suite les paramètres métaboliques tels que la résistance à l'insuline et le poids corporel. De plus, il a été émis l'hypothèse que le tyrosol, l'un des composants phénoliques de l'EVOO, pourrait induire une perte de poids chez les souris en modulant le microbiote intestinal et en déclenchant la thermogenèse du tissu adipeux via une augmentation de l'expression génique de facteurs tels que la protéine découplante 1 (UCP1).

Un régime qui inclut une consommation quotidienne d'huile d'olive extra vierge est également considéré comme une option valable et efficace pour la perte de poids et le maintien du poids. Il a été observé que les régimes incluant trois ou quatre cuillères à soupe d'EVOO par jour conduisent à une réduction de poids plus importante que les régimes pauvres en graisses. De plus, pour la même quantité de perte de poids, la consommation quotidienne d'EVOO peut produire une réduction de la masse grasse plus importante par rapport à la consommation quotidienne d'huiles végétales génériques. Selon des études in vitro et animales, les mécanismes potentiels sous-jacents à cette réduction supplémentaire de la masse grasse sont attribuables aux phénols de l'EVOO, qui diminuent la prolifération des adipocytes et augmentent la thermogenèse via l'activation du tissu adipeux brun.

À l'heure actuelle, l'Autorité européenne de sécurité des aliments (EFSA) affirme que les effets protecteurs de l'huile d'olive extra vierge peuvent être obtenus avec un apport quotidien d'au moins 20 g d'EVOO ou 5,0 mg d'hydroxytyrosol. Cependant, il n'est toujours pas clair si ces quantités sont également efficaces chez les individus atteints de MASLD, en particulier ceux qui sont en surpoids ou obèses.

L'étude en question sera de conception interventionnelle et comprendra deux bras d'intervention : 60 sujets consécutifs atteints de MASLD et avec un IMC 20 ≤ IMC < 30 seront recrutés au « Centro di Nutrizione Clinica per la Ricerca e la Cura dell'Obesità e delle Malattie del Metabolismo » de notre institut.

Le recrutement sera soutenu par les médecins généralistes, par la participation volontaire et en s'appuyant sur des études de cohorte déjà en cours.

L'intervention sera nutritionnelle : les sujets inscrits dans les deux bras recevront un régime de type méditerranéen isocalorique, conçu en tenant compte de l'âge, du sexe et du mode de vie, conformément aux LARN, 5e révision.

Les sujets qui remplissent les critères d'inclusion de l'étude, évalués lors d'une visite de dépistage (V0), seront invités, pendant les 14 premiers jours, à consommer une quantité prédéfinie d'EVOO (3 cuillères à soupe - environ 30 g), afin de réduire le biais de sélection.

À la fin des 14 jours, les sujets inscrits seront randomisés en deux bras d'intervention.

• Groupe A : Les sujets inscrits dans ce groupe seront invités à consommer, en plus des aliments indiqués dans le régime, 3 cuillères à soupe (environ 30 g) d'EVOO par jour, correspondant à 270 kcal, incluses dans les calories totales du régime prescrit. L'huile doit être utilisée crue à tout moment de la journée.
• Groupe B : Les sujets inscrits dans ce groupe seront invités à consommer, en plus des aliments indiqués dans le régime, 9 cuillères à soupe (environ 90 g) d'EVOO par jour, correspondant à 810 kcal, incluses dans les calories totales du régime prescrit. L'huile doit être utilisée crue à tout moment de la journée.

Le traitement durera environ 74 jours et, en plus de V0 (visite de dépistage), 3 autres visites sont prévues :

• V1 : V0 + 14 jours
• V2 : 30 jours après la remise du régime
• V3 : V2 + 30 jours

À V0, les sujets potentiellement éligibles, après avoir signé le formulaire de consentement éclairé, subiront :

• Un Fibroscan, pour évaluer le degré de stéatose hépatique
• La mesure des caractéristiques anthropométriques (taille, poids et IMC)

Si les critères d'inclusion sont remplis, les sujets recrutés seront invités à consommer une quantité prédéfinie d'EVOO (3 cuillères à soupe - environ 30 g), afin de réduire le biais de sélection.

Les sujets recrutés seront invités à revenir pour V1 après 14 jours (V0 + 14 jours), à jeun depuis au moins 12 heures, pour subir un Fibroscan afin de confirmer les critères d'inclusion.

Si les critères d'inclusion sont confirmés, les sujets seront inscrits à l'étude et subiront :

• Une anamnèse (familiale, physiologique, pathologique passée et récente, et pharmacologique)
• La mesure des caractéristiques anthropométriques (poids et IMC, tour de taille et tour de cou)
• Une analyse par bioimpédance
• Une DEXA
• Un prélèvement sanguin par ponction veineuse
• Un questionnaire alimentaire en ligne

Il sera demandé aux sujets d'apporter :

• Un échantillon de selles
• Un échantillon d'urine

(N.B. : Si le sujet ne remplit plus les critères d'inclusion, les échantillons biologiques seront immédiatement éliminés.)

Les sujets qui remplissent les critères d'inclusion à V1 seront randomisés dans l'un des deux bras d'intervention.

Les sujets recevront le régime isocalorique par e-mail, préparé par la diététicienne de l'institution.

Après 30 jours à compter de la réception du régime, ils reviendront pour V2 où, à jeun depuis au moins 12 heures, ils subiront :

• La mesure des caractéristiques anthropométriques (poids et IMC, tour de taille et tour de cou)
• Une analyse par bioimpédance
• Un prélèvement sanguin par ponction veineuse
• Après 30 jours à compter de V2, les sujets reviendront pour la visite finale (V3) où, à jeun depuis au moins 12 heures, ils subiront :
• Un Fibroscan
• La mesure des caractéristiques anthropométriques (poids et IMC, tour de taille et tour de cou)
• Une analyse par bioimpédance
• Une DEXA
• Un prélèvement sanguin par ponction veineuse

Il sera demandé aux sujets d'apporter :

• Un échantillon de selles
• Un échantillon d'urine

Considérant que l'un des objectifs de l'étude est d'évaluer l'effet de la consommation d'EVOO exclusivement sur la MASLD, il est nécessaire qu'il n'y ait pas de variations de poids significatives chez les sujets recrutés.

Par conséquent, il sera demandé aux participants de rapporter leur poids corporel chaque semaine.

En cas de variation de poids significative, le plan nutritionnel sera ajusté.

Les échantillons de sang total et de sérum obtenus seront envoyés au laboratoire central pour la mesure des paramètres de routine et des paramètres nutritionnels, métaboliques et de risque cardiovasculaire (glucose à jeun, insuline, hémoglobine glyquée, triglycérides, cholestérol total, HDL et LDL, transaminases (AST et ALT), γGT, créatinine, acide urique, numération sanguine complète, ferritine, 25-OH-vitamine D, calcium, IGF-I, TSH, FT3, FT4, proBNP).

Sur la base des résultats, le degré de résistance à l'insuline (indice HOMA) et le degré de stéatose hépatique FLI (indice du foie gras), basés sur les paramètres anthropométriques (IMC, tour de taille) et biochimiques (triglycérides et γGT), et la fibrose hépatique (FIB-4), seront calculés.

Le FIB-4 permet d'établir le niveau de fibrose hépatique en reliant l'âge du sujet, les niveaux d'AST et le nombre de plaquettes.

La formule FIB-4 est : (Âge [années] × AST [U/L]) / ((PLT [10(9)/L]) × (ALT [U/L]^(1/2))).

Un score FIB-4 < 1,45 a une valeur prédictive négative de 90 % pour la fibrose avancée, tandis qu'un FIB-4 > 3,25 a une spécificité de 97 % et une valeur prédictive positive de 65 % pour la fibrose avancée.

Les principales adipokines (leptine, adiponectine, RBP-4, résistine, visfatine, chémérine), les principaux facteurs de croissance hépatique (HGF, Fétuine-A, FGF21, FGF19, PAI-1), les principales cytokines pro-inflammatoires (protéine C-réactive haute sensibilité, IL-6, IL-8 et TNF-α) et la cytokine anti-inflammatoire IL-4 seront également mesurées ; d'autres aliquotes seront utilisées pour les analyses lipidomiques et biochimiques.

L'analyse lipidomique sera réalisée sur les membranes des globules rouges des sujets recrutés.

Les acides gras seront extraits, dérivés et analysés avec un chromatographe en phase gazeuse équipé d'une colonne capillaire polaire de 60 m et d'un détecteur FID. Les profils lipidiques seront identifiés en les comparant avec les chromatogrammes d'esters méthyliques d'acides gras utilisés comme standards.

Dans les échantillons de sérum collectés à toutes les visites, l'activité antioxydante, le statut inflammatoire et les niveaux sériques d'enzymes déglycantes seront évalués en étudiant la SOD1 et la SOD2, et les enzymes Fructosamine 3-Kinase et glyoxalase.

Il sera également demandé aux sujets de l'étude d'apporter, à chaque visite, 1 échantillon de selles pour l'évaluation du microbiote intestinal et du métabolome fécal, et 1 échantillon d'urine.

Pour l'évaluation du microbiote intestinal, l'ADN métagénomique bactérien total sera extrait des échantillons de selles en utilisant le kit QIAamp FAST DNA Stool Mini Kit (Qiagen, Hilden, Allemagne).

La caractérisation du microbiome sera réalisée en utilisant une approche de métabarcodage de l'ADN et de métatranscriptomique shotgun.

L'analyse de métabarcodage de l'ADN sera conduite en utilisant les régions hypervariables V5-V6 de l'ARNr 16S pour les bactéries (plateforme MiSeq-Illumina).

Les échantillons qui sont significatifs lors de l'analyse de métabarcodage de l'ADN subiront une analyse métatranscriptomique (NextSeq 500 - plateforme Illumina).

Les données métagénomiques et métatranscriptomiques seront analysées en utilisant des pipelines bioinformatiques.

Des analyses métabolomiques seront réalisées sur les échantillons de selles et d'urine ; les échantillons seront analysés pour les composés organiques volatils (COV), qui seront désorbés thermiquement et immédiatement transférés au port d'injection chauffé (220 °C) d'un chromatographe en phase gazeuse Clarus 680 (Perkin Elmer, Beaconsfield, Royaume-Uni) équipé d'une colonne Rtx-WAX (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 µm d'épaisseur de film) (Restek) et couplé à un Clarus SQ8MS (Perkin Elmer), avec des températures de source et de ligne de transfert maintenues respectivement à 250 et 210 °C.

Visites optionnelles

Il sera demandé aux sujets inscrits, sur une base totalement optionnelle et volontaire qui n'affecte pas la participation à l'étude, s'ils acceptent de subir deux sigmoïdoscopies ambulatoires avec biopsies à froid.

Une sigmoïdoscopie sera réalisée après la visite de dépistage et avant le début de l'étude ; la seconde sera réalisée à la fin du traitement.

La sigmoïdoscopie flexible est réalisée en passant un endoscope dans le rectum et en l'avançant dans le côlon sigmoïde. Pour obtenir de petits échantillons de tissu (1-2 mm), des pinces à biopsie à froid sont utilisées.

Les échantillons de biopsie seront placés sur de la glace carbonique à des fins de recherche. Les analyses des échantillons de muqueuse colique ne fourniront pas d'informations cliniquement pertinentes supplémentaires pour les participants ou leurs membres de la famille.

Les sujets inscrits à l'étude peuvent refuser de subir la sigmoïdoscopie et les biopsies associées.

La sigmoïdoscopie et les biopsies de la muqueuse colique sont associées à certains risques :

Moins probable :

Saignement des biopsies

Crampes abdominales dues à l'air utilisé pendant la sigmoïdoscopie flexible

Rare mais grave :

Perforation du côlon

Les sujets recevront les rapports des analyses de sang de routine, du Fibroscan, de l'analyse par bioimpédance, de la DEXA et, si réalisée, de la sigmoïdoscopie

[1](comet://newtab/)