EVOO и метаболическое здоровье печени при MASLD (EvoLiveR)

Метаболическая дисфункция-ассоциированная стеатозная болезнь печени (MASLD) является одним из наиболее распространенных неинфекционных хронических заболеваний в мире и ведущей причиной смертности и заболеваемости, связанных с печенью. В настоящее время она затрагивает около 38% взрослого населения мира и от 7% до 14% детского населения, а прогнозы указывают на то, что ее распространенность будет продолжать расти, превысив 44% к 2040 году.

Термин MASLD был недавно введен для замены прежней номенклатуры стеатозной болезни печени (неалкогольная жировая болезнь печени, NAFLD) и для подчеркивания тесной взаимосвязи между «жировой печенью» и метаболическим синдромом, как сообщается в многообщественном Дельфийском консенсусном заявлении 2023 года.

MASLD определяется накоплением триглицеридов в печени при отсутствии значительного употребления алкоголя или других причин стеатоза, вместе с наличием по крайней мере одного из следующих кардиометаболических факторов риска: ожирение, сахарный диабет 2 типа, дислипидемия или артериальная гипертензия. Ее патофизиология является многофакторной и включает как модифицируемые, так и немодифицируемые факторы: повреждение печени является результатом комбинированного эффекта метаболической дисфункции, нездорового питания, физической инертности и генетической предрасположенности.

В настоящее время нет сильного консенсуса по фармакологической терапии для лечения MASLD. По этой причине модификация образа жизни, с акцентом на диету и физическую активность, по-прежнему представляет собой вмешательство первой линии для профилактики и лечения MASLD. Недавние исследования определяют диету как первичный модифицируемый фактор в клиническом подходе к MASLD, подчеркивая ключевую роль качества диеты и пищевых привычек в модуляции различных метаболических процессов. Большая часть научных данных согласна в определении средиземноморской диеты как диетического паттерна, наиболее сильно ассоциированного с пользой для здоровья, с защитными эффектами против нескольких неинфекционных хронических заболеваний.

Средиземноморская диета — это традиционный диетический паттерн, которому следуют население, проживающее в странах, граничащих со Средиземным морем. Ее преимущества в основном связаны с характерными продуктами, которые она включает, богатыми питательными веществами, антиоксидантными соединениями и пищевыми волокнами. Средиземноморская диета основана на высоком потреблении фруктов, овощей, цельнозерновых продуктов, бобовых, орехов и оливкового масла экстра вирджин, умеренном потреблении рыбы и птицы и низком потреблении красного мяса и обработанных продуктов.

Оливковое масло экстра вирджин (EVOO) является основным кулинарным жиром, используемым в средиземноморской диете. Оно состоит из 97-99% триглицеридов и небольшой фракции биологически активных компонентов, ответственных за его биологическую активность и органолептические свойства. Полезные для здоровья эффекты EVOO обусловлены его высоким содержанием мононенасыщенных жирных кислот, в основном олеиновой кислоты, и рядом второстепенных, но ценных компонентов, таких как полифенолы, фитостеролы, токоферолы, сквален и фенольные соединения, все известные своими противовоспалительными и антиоксидантными эффектами.

Многочисленные клинические и интервенционные исследования показали, что добавление EVOO, особенно в рамках режима средиземноморской диеты, может уменьшить печеночный стеатоз у субъектов с MASLD. Его гепатопротекторный эффект связан с улучшением воспаления, окислительного стресса и инсулинорезистентности, которые являются ключевыми механизмами в патогенезе MASLD. Было показано, что полифенолы EVOO снижают уровни интерлейкина-6 (IL-6) и C-реактивного белка (CRP), тем самым оказывая противовоспалительное действие. Олеокантал, соединение, ответственное за острый вкус EVOO, оказывает действие, подобное ибупрофену, ингибируя циклооксигеназу-1 и -2 (COX-1/COX-2), дополнительно уменьшая воспаление.

Помимо своих противовоспалительных свойств, EVOO также признается мощным антиоксидантом. Было показано, что средиземноморская диета, обогащенная EVOO, снижает уровни 8-гидрокси-2-дезоксигуанозина (известного маркера окислительного повреждения ДНК), уменьшает перекисное окисление липидов, снижает уровни фактора некроза опухоли-α (TNF-α) и миелопероксидазы, а также повышает уровни адипонектина и интерлейкина-10 (IL-10) как у взрослых с ожирением, так и с нормальным весом. Несколько исследований также сообщили о постпрандиальной антиоксидантной активности EVOO, связанной со снижением уровней пероксидов липидов плазмы после еды.

Улучшение функции печени, связанное с потреблением EVOO, также отражается снижением уровней печеночных ферментов аланинаминотрансферазы (AST), аспартатаминотрансферазы (ALT) и гамма-глутамилтрансферазы (GGT), которые являются важными маркерами воспаления и повреждения печени. Исследования сообщили о снижении уровней печеночных ферментов после добавления EVOO продолжительностью от 2 до 12 месяцев.

В соответствии со своими метаболическими преимуществами, потребление EVOO, особенно в контексте средиземноморской диеты, показало значительные улучшения в гликемическом контроле и инсулиновой чувствительности. Исследования сообщили о более низких значениях глюкозы натощак, инсулина и HOMA-IR, что позволяет предположить, что оливковое масло экстра вирджин способствует улучшению метаболизма глюкозы, что является ключевым компонентом MASLD и тесно связано с инсулинорезистентностью.

Положительные эффекты потребления EVOO также наблюдались на липидный профиль. Исследования продемонстрировали снижение уровней холестерина ЛПНП и триглицеридов, а также улучшение активности и состава липопротеинов высокой плотности (HDL).

Некоторые авторы предполагают, что благотворные эффекты EVOO на метаболические заболевания и здоровье в целом могут опосредоваться изменениями в кишечной микробиоте. У крыс диета, обогащенная EVOO, изменила профиль кишечной микробиоты, увеличив ее биоразнообразие и впоследствии улучшив метаболические параметры, такие как инсулинорезистентность и масса тела. Кроме того, было высказано предположение, что тирозол, один из фенольных компонентов EVOO, может вызывать потерю веса у мышей путем модуляции кишечной микробиоты и запуска термогенеза жировой ткани через увеличение экспрессии генов факторов, таких как разобщающий белок 1 (UCP1).

Диета, включающая ежедневное потребление оливкового масла экстра вирджин, также считается валидным и эффективным вариантом для снижения веса и поддержания веса. Было замечено, что диеты, включающие три или четыре столовые ложки EVOO в день, приводят к большему снижению веса, чем диеты с низким содержанием жира. Более того, при одинаковом количестве потери веса ежедневное потребление EVOO может привести к большему снижению жировой массы по сравнению с ежедневным потреблением обычных растительных масел. Согласно исследованиям in vitro и на животных, потенциальные механизмы, лежащие в основе этого дополнительного снижения жировой массы, приписываются фенолам EVOO, которые уменьшают пролиферацию адипоцитов и увеличивают термогенез через активацию бурой жировой ткани.

В настоящее время Европейское агентство по безопасности продуктов питания (EFSA) утверждает, что защитные эффекты оливкового масла экстра вирджин могут быть получены при ежедневном потреблении не менее 20 г EVOO или 5,0 мг гидрокситирозола. Однако до сих пор неясно, одинаково ли эффективны эти количества у лиц с MASLD, особенно у тех, кто имеет избыточный вес или ожирение.

Данное исследование будет иметь интервенционный дизайн и будет включать две интервенционные группы: 60 последовательных субъектов с MASLD и с 20 ≤ ИМТ < 30 будут набраны из «Центра клинического питания для исследования и лечения ожирения и метаболических заболеваний» нашего Института.

Набор будет поддерживаться врачами общей практики, через добровольное участие и с использованием уже существующих когортных исследований.

Интервенция будет нутрициональной: субъекты, включенные в обе группы, получат изокалорийную диету в средиземноморском стиле, разработанную с учетом возраста, пола и образа жизни, в соответствии с LARN, 5-й редакцией.

Субъекты, которые соответствуют критериям включения в исследование, оцененным во время Скринингового визита (V0), будут приглашены, в течение первых 14 дней, потреблять предопределенное количество EVOO (3 столовые ложки - приблизительно 30 г), чтобы уменьшить селекционное смещение.

По окончании 14 дней, включенные субъекты будут рандомизированы в две интервенционные группы.

• Группа A: Субъекты, включенные в эту группу, будут просить потреблять, в дополнение к продуктам, указанным в диете, 3 столовые ложки (приблизительно 30 г) EVOO в день, что соответствует 270 ккал, включенным в общие калории предписанной диеты. Масло должно использоваться сырым в любое время дня.
• Группа B: Субъекты, включенные в эту группу, будут просить потреблять, в дополнение к продуктам, указанным в диете, 9 столовых ложек (приблизительно 90 г) EVOO в день, что соответствует 810 ккал, включенным в общие калории предписанной диеты. Масло должно использоваться сырым в любое время дня.

Лечение продлится приблизительно 74 дня и, помимо V0 (Скрининговый визит), запланировано 3 дополнительных визита:

• V1: V0 + 14 дней
• V2: 30 дней после выдачи диеты
• V3: V2 + 30 дней

На V0 потенциально подходящие субъекты, после подписания формы информированного согласия, пройдут:

• Фиброскан, для оценки степени печеночного стеатоза
• Измерение антропометрических характеристик (рост, вес и ИМТ)

Если критерии включения выполнены, набранные субъекты будут просить потреблять предопределенное количество EVOO (3 столовые ложки - приблизительно 30 г), чтобы уменьшить селекционное смещение.

Набранные субъекты будут приглашены вернуться на V1 через 14 дней (V0 + 14 дней), натощак не менее 12 часов, чтобы пройти Фиброскан для подтверждения критериев включения.

Если критерии включения подтверждены, субъекты будут включены в исследование и пройдут:

• Сбор анамнеза (семейный, физиологический, прошлый и недавний патологический, и фармакологический)
• Измерение антропометрических характеристик (вес и ИМТ, окружность талии и окружность шеи)
• Биоимпедансный анализ
• ДЭРА
• Забор крови путем венепункции
• Онлайн-диетический опросник

Субъектов попросят принести:

• Образец кала
• Образец мочи

(Примечание: Если субъект больше не соответствует критериям включения, биологические образцы будут немедленно утилизированы.)

Субъекты, которые соответствуют критериям включения на V1, будут рандомизированы в одну из двух интервенционных групп.

Субъекты получат изокалорийную диету по электронной почте, подготовленную диетологом Института.

Через 30 дней после получения диеты они вернутся на V2, где, натощак не менее 12 часов, они пройдут:

• Измерение антропометрических характеристик (вес и ИМТ, окружность талии и окружность шеи)
• Биоимпедансный анализ
• Забор крови путем венепункции
• Через 30 дней после V2 субъекты вернутся на финальный визит (V3), где, натощак не менее 12 часов, они пройдут:
• Фиброскан
• Измерение антропометрических характеристик (вес и ИМТ, окружность талии и окружность шеи)
• Биоимпедансный анализ
• ДЭРА
• Забор крови путем венепункции

Субъектов попросят принести:

• Образец кала
• Образец мочи

Учитывая, что одной из целей исследования является оценка эффекта потребления EVOO исключительно на MASLD, необходимо, чтобы у набранных субъектов не было значительных изменений веса.

Поэтому участников попросят сообщать о своей массе тела еженедельно.

В случае значительного изменения веса, нутрициональный план будет скорректирован.

Полученные образцы цельной крови и сыворотки будут отправлены в центральную лабораторию для измерения рутинных и нутрициональных, метаболических и сердечно-сосудистых параметров риска (глюкоза натощак, инсулин, гликированный гемоглобин, триглицериды, общий холестерин, HDL и LDL, трансаминазы (AST и ALT), γGT, креатинин, мочевая кислота, общий анализ крови, ферритин, 25-ОН-витамин D, кальций, IGF-I, TSH, FT3, FT4, proBNP).

На основе результатов будет рассчитана степень инсулинорезистентности (индекс HOMA) и степень печеночного стеатоза FLI (индекс жировой печени), основанный на антропометрических (ИМТ, окружность талии) и биохимических параметрах (триглицериды и γGT), и печеночного фиброза (FIB-4).

FIB-4 позволяет установить уровень фиброза печени, связывая возраст субъекта, уровни AST и количество тромбоцитов.

Формула FIB-4: (Возраст [лет] × AST [Ед/л]) / ((PLT [10(9)/л]) × (ALT [Ед/л]^(1/2))).

Оценка FIB-4 <1,45 имеет отрицательную прогностическую ценность 90% для продвинутого фиброза, тогда как FIB-4 >3,25 имеет специфичность 97% и положительную прогностическую ценность 65% для продвинутого фиброза.

Также будут измерены основные адипокины (лептин, адипонектин, RBP-4, резистин, вистатин, хемерин), основные печеночные факторы роста (HGF, Фетуин-A, FGF21, FGF19, PAI-1), основные провоспалительные цитокины (высокочувствительный C-реактивный белок, IL-6, IL-8 и TNF-α) и противовоспалительный цитокин IL-4; другие аликвоты будут использованы для липидомных и биохимических анализов.

Липидомный анализ будет проведен на мембранах эритроцитов набранных субъектов.

Жирные кислоты будут экстрагированы, дериватизированы и проанализированы с помощью газового хроматографа, оснащенного 60 м полярной капиллярной колонкой и FID детектором. Липидные профили будут идентифицированы путем сравнения их с хроматограммами метиловых эфиров жирных кислот, используемых в качестве стандартов.

В образцах сыворотки, собранных на всех визитах, будет оценена антиоксидантная активность, воспалительный статус и сывороточные уровни дегликирующих ферментов путем изучения SOD1 и SOD2, и ферментов Фруктозамин-3-Киназа и глиоксалаза.

Субъектов в исследовании также попросят принести, на каждом визите, 1 образец кала для оценки кишечной микробиоты и фекального метаболома, и 1 образец мочи.

Для оценки кишечной микробиоты, общая бактериальная метагеномная ДНК будет экстрагирована из образцов кала с использованием набора QIAamp FAST DNA Stool Mini Kit (Qiagen, Хильден, Германия).

Характеризация микробиома будет проведена с использованием подхода ДНК метабаркодинга и шотган метатранскриптомики.

Анализ ДНК метабаркодинга будет проведен с использованием гипервариабельных регионов V5-V6 16S рРНК для бактерий (платформа MiSeq-Illumina).

Образцы, значимые при анализе ДНК метабаркодинга, пройдут метатранскриптомный анализ (NextSeq 500 - платформа Illumina).

Метагеномные и метатранскриптомные данные будут проанализированы с использованием биоинформатических пайплайнов.

Метаболомные анализы будут проведены на образцах кала и мочи; образцы будут проанализированы на летучие органические соединения (VOCs), которые будут термически десорбированы и немедленно перенесены в нагретый инжекционный порт (220 °C) газового хроматографа Clarus 680 (Perkin Elmer, Биконсфилд, Великобритания), оснащенного колонкой Rtx-WAX (30 м × 0,25 мм внутренний диаметр, толщина пленки 0,25 мкм) (Restek) и соединенного с Clarus SQ8MS (Perkin Elmer), с температурами источника и трансферной линии, поддерживаемыми на уровне 250 и 210 °C соответственно.

Опциональные визиты

Включенным субъектам будет задан вопрос, на полностью опциональной и добровольной основе, не влияющей на участие в исследовании, согласны ли они пройти две амбулаторные сигмоидоскопии с холодными биопсиями.

Одна сигмоидоскопия будет выполнена после скринингового визита и до начала исследования; вторая будет выполнена в конце лечения.

Гибкая сигмоидоскопия выполняется путем введения эндоскопа в прямую кишку и продвижения его в сигмовидную кишку. Для получения небольших образцов ткани (1-2 мм) используются холодные биопсийные щипцы.

Образцы биопсии будут помещены на сухой лед для исследовательских целей. Анализы образцов слизистой оболочки толстой кишки не предоставят дополнительной клинически значимой информации для участников или их членов семьи.

Субъекты, включенные в исследование, могут отказаться от прохождения сигмоидоскопии и связанных биопсий.

Сигмоидоскопия и биопсии слизистой оболочки толстой кишки связаны с некоторыми рисками:

Менее вероятно:

Кровотечение из биопсий

Спазмы в животе из-за воздуха, используемого во время гибкой сигмоидоскопии

Редко, но серьезно:

Перфорация толстой кишки

Субъекты получат отчеты по рутинным анализам крови, Фиброскану, биоимпедансному анализу, ДЭРА и, если выполнена, сигмоидоскопии

[1](comet://newtab/)