증후군성 비만 대상자의 표현형 및 유전형 특성화: 엑솜 시퀀싱(OBEXOME)에 의한 새로운 후보 유전자 식별 (OBEXOME)

엑손의 시퀀싱:

현재까지 대부분의 증후군성 비만은 밝혀지지 않았습니다. 그러나 관련 분자 이상을 식별하지 못하기 때문에 재발 위험 및 환자의 최적 지원에 대한 정보가 가족에게 제한됩니다.

엑손("엑솜")의 시퀀싱 또는 단백질을 코딩하는 게놈의 표적 시퀀싱 하위 집합이라고 하는 새로운 분자 생물학 도구는 관련이 없는 소수의 개인에서 희귀 질병을 일으키는 돌연변이를 식별하는 능력을 보여주었습니다. 실제로 이 도구는 삼출성 유리체-망막병증이 있는 23명의 피험자에서 TSPAN12(Tetraspanin 12) 유전자의 두 가지 돌연변이, 운동성 발작성 이상운동증이 있는 중국인 가족 8명의 PRRT2(프롤린이 풍부한 막투과 단백질 2) 유전자의 3가지 돌연변이, 2 가족성 결합성 저지방혈증이 있는 2명의 피험자에서 유전자 ANGPTL3(안지오포이에틴 유사 3)의 넌센스 돌연변이, 신드롬 구개열(TARP 증후군) 환자 3명에서 RBM10 유전자(RNA 결합 모티프 10)의 돌연변이 또는 췌장암 환자의 유전자 PALB2(BRCA2의 파트너 및 로컬라이저). 연구자들은 이 도구가 증후군성 비만을 가진 개인의 새로운 분자 이상을 식별할 수 있다고 믿습니다. 표현형 데이터의 상세한 분석은 임상 및 생물학적 표현형을 공유하고 이 기술이 사용될 비만 환자 그룹(최소 10명)을 식별할 수 있습니다.

엑솜 시퀀싱은 추가적인 차별적 능력을 제공하기 위해 그들의 표현형뿐만 아니라 그들의 친척(2명의 부모와 형제자매) 중에서 선택된 피험자에서 수행될 것입니다. 비만 환자와 영향을 받지 않은 친척의 동형 접합 상태에서 발견된 모든 새로운 변이는 후보 돌연변이 목록에서 즉시 제외됩니다. 반대로, 환자에게서 발견되었지만 부모와 형제자매 모두에게서 발견되지 않은 변이는 잠재적인 새로운 돌연변이입니다. 변이 후보의 존재는 다른 엑솜 공개 데이터베이스(dbSNP, 1000 Genomes, Exome Variant Server)에서 찾을 수 있으며, 목록에 없는 변이의 경우 일반 비만 및 비비만 어린이 코호트에서 유전자형을 분석할 수 있습니다. -빈도를 결정하기 위해 비만하고 따라서 증후군성 비만 표현형에 대한 잠재적 관련성에 대한 추가 정보를 제공합니다. 임상 사진에서 변이 유전자의 역할을 검증하는 마지막 단계는 단백질에 대한 기능적 결과에 대한 시험관 내 분석과 동물 모델의 생체 내 분석이 될 것입니다.

40명의 선택된 피험자(부모와 비만하지 않은 형제가 모두 있는 10명의 프로밴드)의 모든 엑손("엑솜")의 시퀀싱은 새로운 유형의 세대 시퀀서 Illumina HiSeq 2000을 사용하여 게놈 플랫폼에서 수행됩니다. 이렇게 하려면 샘플당 DNA 3μg(15μL 농도에서 200 ng/uL)가 필요하며 2 x 75bp에서 "페어드 엔드" 유형의 시퀀싱이 필요합니다. 생성된 서열은 BWA 소프트웨어를 사용하여 참조 게놈(빌드 hg19)과 정렬됩니다. 복제물(PCR 복제물' 및 '광학 복제물')은 쌍을 이루지 않고 잘못 정렬된 시퀀스(Q-점수 <20)로 제거됩니다. 그런 다음 생성된 시퀀스는 GATK 소프트웨어에 의해 재보정되어 이러한 변형 삽입/삭제 감지를 개선합니다. 변형 감지는 도구 소프트웨어를 사용하여 수행되며 주석은 annovar 소프트웨어를 사용합니다. 분석은 최소 10x 깊이의 감지된 변이에 초점을 맞춥니다. 조사관은 환자의 동형접합 상태와 부모의 이형접합 상태(열성 가설)에서 발견된 변종을 선택합니다. 영향을 받지 않은 친척들 사이에서 동형접합이 발견된 변이체는 후보 목록에서 제외됩니다. 환자에게서 발견되었지만 두 부모 모두에게 없는 변이는 새로운 경우의 잠재적인 후보가 될 수 있습니다. 연구자들은 이 전략이 진단을 용이하게 할 수 있다고 믿으며 필요한 경우 산전 진단을 제공하여 가족에게 제공합니다. 또한 Prader-Willi 증후군이 있는 어린이의 의료, 심리적, 사회적 돌봄과 같이 가능한 한 빨리 이 어린이들에게 지원을 제공할 것입니다. 실제로, 표현형을 담당하는 유전 진단의 존재는 환자에게 적합한 특정 생활 프로젝트의 개발을 허용하고 참조 센터 및 부서별 장애인 주택(MDPH)과의 협력을 통해 장애에 대한 개발 지원을 용이하게 합니다. 마지막으로, 이러한 비만의 메커니즘에 대한 이해의 진전은 가장 일반적인 형태의 비만의 병태생리학을 더 잘 이해하고 관리를 개선하는 데 도움이 될 수 있습니다.

환자 선택 :

증후군성 비만이 있는 소아 및 성인의 경우, 완전한 임상 및 생물학적 평가를 수행하기 위해 일반 진료에서 주간 입원이 체계적으로 계획됩니다. 입원 당일 진행되는 각종 검사에 대한 안내는 상담 시 안내해 드립니다. 유전자 연구가 제안될 것입니다. 이 상담 중에 환자, 어린이 및 성인과 그 가족에게 제안되었습니다. 입원 날짜는 일반적으로 상담 다음 달입니다.

포함 - 환자 당일 입원:

일반적인 치료의 일환으로 조사관 당일 입원에 의해 정밀한 표현형 특성화가 수행됩니다. 가족 체중 이력, 개인 체중 이력의 후 향적 분석, 임상 검사, 인체 측정,식이 상담, 신체 구성 및 휴식 에너지 ​​소비 측정, 음식 및 신체 활동 설문지, 내분비 및 대사 균형.

연구는 유전자 연구를 위해 여분의 20mL 혈액 샘플로 구성되며 동의서에 서명한 후 비만 피험자를 대상으로 수행됩니다. 분석 가능한 샘플이 이미 DNA 은행 번호 DC2009-957에 저장된 환자는 다시 샘플을 채취하지 않습니다.