식이 식물성 에스트로겐이 전립선 종양 증식을 늦출 수 있습니까? (PRODICA)

생태학적 및 실험적 연구의 데이터는 전립선암에 대한 식이 식물성 에스트로겐의 보호 효과를 분명히 보여줍니다. 유전적 요인은 또한 전립선암에서 병인학적으로 중요하며 전립선암 진행에서 유전자-식이 상호작용의 중요성에 대한 증거가 증가하고 있습니다. 연구자들은 최근 식물성 에스트로겐의 이러한 보호 역할에 대해 추정되는 유전적 상호작용을 발견했습니다. 식물성 에스트로겐을 많이 섭취하는 남성의 전반적인 전립선암 위험 감소는 에스트로겐 수용체-베타(ERß) 유전자의 뉴클레오티드 서열 변이에 의해 강력하게 변형되었습니다. 미국 연구에서는 체질량 지수(BMI)뿐만 아니라 식물성 에스트로겐 섭취와 ERß의 또 다른 뉴클레오티드 서열 변이 사이에 유사한 상호작용 효과가 있음을 발견했습니다. 콩 및 기타 콩에서 발견됩니다. ERß 발현은 전립선암의 진행에 관여하는 것으로 밝혀졌으며, 이는 식물성 에스트로겐이 전립선암 발병에서 ERß와 상호작용할 수 있음을 시사합니다. 잠재적인 발암 기전과 관련하여 식물성 에스트로겐은 AR과 ERβ 사이의 균형에 영향을 미침으로써 전립선 세포 성장의 내분비 조절에 관여할 수 있습니다. 반대로 DHT의 대사산물인 5α androstane-3ß,17ß-diol(3ßAdiol)은 ERß에 결합하여 AR의 발현을 억제하여 안드로겐에 의한 증식을 억제하고 세포 분화를 촉진합니다. 증식 측면에서, 현재 데이터는 전립선에서 ERα와 AR의 조합된 자극 역할을 시사하는 반면 ERβ는 증식을 억제하고 분화를 자극합니다. 에스트로겐 ERα와 ß는 모두 에스트라디올에 친화력이 있는 반면, 식물성 에스트로겐과 3ßAdiol은 선택적으로 ERß를 활성화합니다. 결과적으로 식물성 에스트로겐은 3ßAdiol을 대체하여 암 성장을 제한할 수 있습니다. 이것은 실험 연구에 의해 확인되었습니다.

이전 개입 연구의 결과는 특정 식이 요법이나 생활 방식 수정이 전립선 암의 진행에 영향을 미칠 수 있다는 유망한 결과를 제공했지만, 이러한 연구의 대부분은 기간이 상당히 짧고 상대적으로 적은 수의 환자를 기반으로 했습니다. 예를 들어, 무작위 연구에 따르면 아마씨를 식단에 추가한 남성은 식단에 아마씨를 추가하지 않은 남성보다 증식 표지자 Ki-67을 포함하는 양성 세포의 비율이 낮았습니다. 종합하면, 현재의 증거는 전립선암 환자가 종양 진행을 예방하거나 지연시키기 위해 생활 습관 관련 치료 대안으로 보완할 가능성을 지적합니다.

특정 목표: 전립선암이 있는 남성을 대상으로 통제된 무작위 식이 개입 연구를 수행합니다. 조사관은 다음과 같은 구체적인 목표/가설을 추구할 것입니다.

1. "중간 위험 수준의 전립선암이 있는 남성의 경우 식물성 에스트로겐이 많은 식단은 식물성 에스트로겐이 적은 식단을 섭취하는 남성에 비해 종양 진행을 감소시킵니다."
2. "전립선암 종양 진행에 대한 식물성 에스트로겐이 많은 식단의 효과는 ERß 유전자의 다형성 유전자형이 다른 남성 간에 다릅니다." 남자들은 가설이 테스트될 ERβ-유전자의 단일 염기 다형성(SNP) rs2987983-13950 T/C의 TT 또는 TC/CC 대립유전자를 포함하는 두 개의 하위 그룹으로 나뉩니다.
3. 전립선 종양 조직에서 AR, ERα 및 ERβ의 RNA 발현과 스테로이드 호르몬 수치가 각각 식물성 에스트로겐이 많은 남성과 낮은 남성 간에, 또는 ERβ 유전자의 다른 유전자형 간에 다른지 여부를 결정합니다.
4. 증식에 관여하는 유전자의 mRNA 발현과 전립선 절제술 표본에서 전체 transcriptomic 프로파일링에 의해 분석된 ER 신호 경로가 각각 식물성 에스트로겐이 많은 남성과 낮은 남성 간에, 또는 ERβ 유전자의 다른 유전자형 간에 다른지 여부를 결정합니다.

연구 프로토콜: 조사자는 치료 의사를 통해 Västra Götaland 의료 지역에서 중간 위험 수준(T1-T2, Gleason 점수)의 전립선암 진단을 받은 남성 240명을 식별할 것입니다.

중재: 환자는 영양사가 중재 식단을 소개하고 건강 식품 선택에 대한 일반적인 정보를 받게 되며(일반 대중을 위한 권장 사항에 따름) 식이 보조제를 먹지 않도록 하며 다른 식이 제한 사항은 제공되지 않습니다. 환자는 매일 섭취해야 하는 많은 양의 식물성 에스트로겐(이소플라보노이드 100mg 이상 및 리그난 100mg 이상)이 포함된 식품이 포함된 패키지를 받게 됩니다. 개입은 수술 전날(최소 6주)까지 계속됩니다. 통제 그룹의 환자는 음식 패키지를 받지 않는다는 점을 제외하고 개입 그룹과 동일한 방식으로 정보를 받습니다.

종점: 종양 증식률에 대한 식이의 효과는 1) 마커 Ki-67을 포함하는 양성 세포의 백분율, 2) PSA 수준, 3) 증식 및 ER 신호 경로에 관여하는 유전자의 발현 및 세포 주기 진행(CCP) 유전자 발현. 수술 직전에 외과의는 진단 생검 및 자기 공명 영상의 이전 결과를 기반으로 신선한 전립선 표본에서 4개의 중앙 바늘 생검을 수집합니다. 종양 부위에서 2개, 건강한 전립선 조직에서 2개를 수집합니다. 또한 수술 시 , 근치적 전립선 절제술 조직을 수집하고 포르말린 고정 파라핀 포매. 연구 시작 시, 수술 전날 혈액 샘플을 채취하여 PSA 분석으로 보냅니다(무료 및 전체). PSA 수준과 PSA 배가 시간의 절대 차이가 계산됩니다. 또한 연구자들은 종양 조직에서 AR, ERα 및 ERß의 발현과 호르몬, 테스토스테론, DHT, 에스트라디올 및 3ß-Adiol의 혈중 수치를 측정할 것입니다.

설문지: 모든 환자는 기준선에서 암호로 보호된 설문지에 답하고 수술, 체중 및 키를 측정합니다. 6주 동안 한 번 24시간 리콜 인터뷰가 수행되며, 이전 24시간 동안 참가자의 음식 섭취가 등록됩니다. 설문지 및 식단 기록의 정보를 식품청의 영양 데이터베이스와 이전에 개발한 식물성 에스트로겐 데이터베이스에 연결하여 개인의 에너지 및 특정 영양소 섭취량을 추정합니다. 5α-환원 효소 억제제인 ​​Finasteride의 사용 가능성에 대한 정보는 의료 기록에서 수집됩니다.

다형 분석: ERß-유전자의 SNP는 PCR 기반 방법 경쟁적 대립유전자 특이적 PCR(KASP™)을 사용하여 혈액 샘플에서 분석됩니다. 대립 유전자 구성이 확인되고 참가자는 TT, TC 또는 CC 그룹에 할당됩니다. Ki-67의 분석: +4°C에서 24시간 동안 0.1M 인산염 완충액에 4% 파라포름알데히드로 침지하여 생검 샘플을 고정합니다. 그런 다음 등급이 매겨진 에탄올로 탈수한 다음 크실렌과 파라핀을 포매합니다. 파라핀 절편을 60ºC에서 30분 동안 가열하고 구연산 완충액으로 전처리합니다. 비특이적 결합은 Triton X-100이 포함된 인산염 완충 식염수(PBS)에서 30분 동안 당나귀 혈청에 의해 차단됩니다. 밤새 Ki-67 항체와 함께 배양(4ºC)한 다음 적절한 2차 비오티닐화 항체와 함께 배양합니다. 신호를 강화하기 위해 절편을 아비딘-비오틴-복합 용액으로 처리하고 면역 반응성을 시각화하기 위해 DAB(Diaminobenzidine)를 사용합니다. 염색된 종양 세포(Ki-67 양성)를 카운트하고 결과는 평가된 총 개수 × 100으로 나눈 양성 핵의 비율로 보고됩니다.

수용체 발현, CCP 점수, 호르몬 수치 및 PSA 분석: 수술 시 채취한 조직 샘플을 나중에 냉동하기 전에 RNA에 넣습니다. 샘플은 RNeasy plus Universal Mini Kits(QIAGEN) 및 실시간 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 사용하여 분석됩니다. ERα, ERβ 및 AR mRNA 발현은 TaqMan 분석을 사용하여 결정됩니다. 총 RNA는 글로벌 transcriptome-wide 발현 어레이 Clariom ™ D (Thermos Fischer)를 사용하여 종양 및 양성 조직의 포르말린 고정 파라핀 포매 절편에서 추출됩니다. CCP 점수 분석을 위해, 각각 Prolaris® 유전자 패널 및 Decipher 점수를 기반으로 하는 CCP에 관련된 유전자의 유전자 발현. PSA-혈액 수준은 표준 임상 프로토콜에 따라 분석됩니다.

검정력 계산: 2012년 Västra Götaland 의료 지역에서 321명의 남성이 중간 위험 수준의 전립선암에 걸렸고 치료를 받았습니다. 1차 결과(Ki-67)를 사용한 계산은 118명의 환자로 구성된 연구 그룹에 대해 0.05의 유의 수준과 0.5의 효과 크기로 양측 테스트에 대한 80% 검정력을 제공합니다. 연구자들은 이전 연구에서 남성 인구의 약 42%가 ERβ 프로모터 영역 SNP(rs2987983-13950 T/C)의 변형 대립유전자(TC/CC)에 대해 이형접합 또는 동형접합이고 야생형 대립유전자에 대해 58%가 동형접합임을 발견했습니다. (TT). 연구자들은 개입의 효과가 변형 대립유전자를 가진 피험자 사이에서 더 크고 야생형 대립유전자를 가진 피험자 사이에서 더 작을 것으로 예상하기 때문에, 이 후자의 그룹은 차이가 존재한다면 차이를 찾을 수 있을 만큼 충분히 커야 합니다. 따라서 총 표본 크기는 118/58%=203명의 환자가 필요합니다.

통계적 고려 사항: 조사자는 치료 의도 방법을 활용합니다. 설계 및 데이터 수집에서 템플릿으로 약물의 테스트가 이루어졌습니다(무작위화, 위약, 눈가림, 감소 없음, 차동 측정 오류 없음, 정확한 분석). 완벽한 상황으로부터의 편차에 대해 조사관은 분석을 안내하고 결과를 해석하기 위해 역학 이론을 사용합니다. 관심 결과를 적절하게 설명하기 위해 평균, 중앙값, 표준 편차 및 사분위수 범위에 기초한 예비 분석이 제공되며 할당된 식단의 무작위화 성능을 평가하기 위해 계층화가 수행됩니다. 따라서 응답의 시간적 추세를 그래픽으로 평가하기 위해 상자 그림이 생성됩니다. 결과의 분포를 연구하고 필요한 경우 대칭성과 정규성을 개선하기 위해 적절한 변환을 적용합니다. 데이터의 종단 구조로 인해 관측치 간의 상관 관계가 통합되고 선형 혼합 효과 모델이 연구를 위해 수행될 것입니다. ) ERß 유전자형에 따라 중재군과 대조군 사이의 치료 효과가 공통 및 변이 모두에 대해 수정되는 경우. 종단 데이터 분석의 핵심 단계는 데이터 포인트 간의 상관관계를 설명하는 적절한 공분산 구조를 식별하는 것입니다: 독립 공분산(상관 없음), 교환 가능한 공분산(동일 상관) 또는 응답 간의 상관 관계가 측정 사이의 시간에 따라 감소하는 자기회귀 공분산. 조사관은 정보 이론적 접근 방식의 도움을 받아 경험적으로 검증된 가장 적절한 구조를 식별합니다. 효과의 유의성을 평가하기 위해 통계 테스트와 신뢰 구간이 모두 생성되며, 따라서 부분 F 테스트 절차를 사용하여 주 변수와 상호 작용 변수의 결합 효과를 연구하고 적절한 통계 방법을 모델 피팅 연구에 적용합니다. 식물성 에스트로겐 섭취와 암 증식 사이의 연관성은 일반화된 선형 모델에 의해 평가될 것이며, 이는 ERβ 유전자형에 의해 계층화된 위험 차이(RD) 및 해당 95% CI의 추정치를 제공할 것입니다. 증식에 대한 식물성 에스트로겐 섭취와 ERβ SNP 사이의 상호 작용은 상가 효과 척도를 고려하여 평가될 것입니다. 식물성 에스트로겐 섭취 그룹은 연속 변수로 포함되며 각 SNP는 지표 변수(변형 여부)로 표시됩니다. 식물 에스트로겐 섭취와 SNP 유전자형을 나타내는 공변량 사이의 제품 항에 의해 선형 오즈 모델에서 상호 작용을 평가할 것입니다.