매트릭스 보조 레이저 탈착을 통한 보철 관절 감염의 신속한 진단

재료 및 방법

1. 근골격계 감염 학회(MSIS) 기준에 따라 감염 가능성이 높고 괴사조직 제거만 또는 임플란트 제거와 함께 괴사조직 제거가 예정된 환자는 사전 동의서에 서명한 후 연구에 등록하도록 초대됩니다.

   활막 관절액은 수술실에서 관절절개술 전에 채취합니다. 흡인물은 최소 14cc의 18-Fr 멸균 주사기를 사용하여 무균 기술로 수집됩니다. 샘플은 표준 혈액 배양 병(10cc), 상처 배양 튜브(2cc) 및 활액 분석(2cc)에서 MALDI-TOF 질량 분석법으로 나뉩니다. 샘플은 2시간 이내에 미생물학 실험실로 전달됩니다.

2. 세균 배양 및 기존 동정 세균 동정은 Vitek 2 시스템을 사용하여 기존 방법으로 수행됩니다. 기존 배양의 경우 잘 혼합된 관절액 1µL를 접종하고 멸균 플라스틱 일회용 루프를 사용하여 혈액 한천 플레이트와 MacConkey 한천 플레이트에 뿌립니다. 플레이트는 18-24시간 동안 37℃의 호기성 분위기에서 배양됩니다. 박테리아 성장이 관찰되면 혈액 한천의 콜로니를 세고 Vitek 2 시스템을 사용하여 두 유형의 플레이트에서 콜로니를 식별합니다.

3. MALDI-TOF MS 동정 상기 시료 전처리 후 얻은 현탁액을 13,000g에서 2분간 원심분리하고 상층액을 버린다. 펠릿은 잔류 에탄올을 제거하기 전에 2분 동안 13,000g에서 원심분리됩니다. 50 마이크로리터의 포름산(70% v/v)과 50mL의 100% 아세토니트릴을 펠릿에 첨가하고 각 시약을 첨가한 후 완전히 혼합합니다. 현탁액은 다시 13,000g에서 2분 동안 다시 원심분리되고 상층액 1mL가 강철 타겟 플레이트에 점적됩니다. 건조된 샘플 지점에 이중으로 배치된 1mL a-시아노-4-하이드록시신남산 매트릭스 용액을 공기 건조시킨 후 분석을 수행합니다.

   제조사의 설정에 따라 microflex LT MALDI-TOF 질량 분석계(Bruker Daltonics, Bremen, Germany)를 사용하여 질량 스펙트럼 프로파일을 획득합니다. 스펙트럼은 2000Da에서 20,000Da의 질량 범위 내에서 60Hz의 레이저 주파수에서 선형 포지티브 모드로 기록됩니다. 모든 박테리아 식별은 MALDI-TOF Biotyper RTC 및 Bruker MALDI Biotyper 3.1 소프트웨어 및 라이브러리(4613 분리주, Bruker Daltonics)에 의해 수행됩니다. 미생물 분석 및 식별에 사용되는 기준은 제조업체가 권장하는 바에 따릅니다.

4. 통계 분석 식별까지의 시간은 콜로니 형성에서 최종 결과가 의사에게 보고되는 시간까지의 시간으로 결정됩니다. 카이 제곱 테스트를 사용하여 세 가지 방법을 비교하기 위해 통계 분석을 수행합니다. 통계적 유의 수준은 p < 0.05로 설정됩니다.