Hurtig diagnose af ledproteseinfektion ved matrix-assisteret laserdesorption

Materialer og metoder

1. Patienter, der har en høj sandsynlighed for infektion baseret på Musculoskeletal Infection Society (MSIS) kriterierne og er planlagt til kun debridering eller debridering med implantatfjernelse, vil blive inviteret til at tilmelde sig undersøgelsen efter underskrevet informeret samtykke.

   Synovialledsvæsken udtages inden artrotomien på operationsstuen. Aspirater vil blive opsamlet under en aseptisk teknik med en 18-Fr steril sprøjte med en minimumsmængde på 14 ccs. Prøven vil blive delt mellem MALDI-TOF massespektrometri i standard blodkulturflasker (10 ccs), sårkulturrør (2 ccs) og synovialvæskeanalyse (2 ccs). Prøverne vil blive leveret til mikrobiologisk laboratorium inden for en 2-timers periode.

2. Bakteriedyrkning og konventionel identifikation Bakterieidentifikation vil blive udført ved den konventionelle metode ved hjælp af Vitek 2-systemet. Til den konventionelle kultur inokuleres 1 µL godt blandet ledvæske og spredes på blodagarplader og MacConkey-agarplader ved hjælp af en steril engangsløkke af plast. Pladerne vil blive inkuberet i en aerob atmosfære ved 37 ℃ i 18-24 timer. Når bakterievækst observeres, vil kolonierne på blodagar blive talt, og kolonier fra begge typer plader vil blive identificeret ved at bruge Vitek 2-systemet.

3. MALDI-TOF MS-identifikation Suspensionen opnået efter ovenstående prøveforberedelse vil blive centrifugeret ved 13.000 g i 2 minutter, og supernatanten vil blive kasseret. Pelleten vil blive centrifugeret ved 13.000 g i yderligere 2 minutter før fjernelse af den resterende ethanol. Halvtreds mikroliter myresyre (70 % v/v) og 50 mL 100 % acetonitril tilsættes til pelleten og blandes grundigt efter hver reagens er tilsat. Suspensionen centrifugeres igen ved 13.000 g i yderligere 2 minutter, og 1 ml af supernatanten vil blive plettet på stålmålpladen. Analyse vil blive udført efter lufttørring af 1 mL a-cyano-4-hydroxykanelsyrematrixopløsning placeret på den tørrede prøveplet i to eksemplarer.

   Massespektreprofiler vil blive erhvervet ved hjælp af et microflex LT MALDI-TOF massespektrometer (Bruker Daltonics, Bremen, Tyskland) efter producentens indstillinger. Spektra vil blive optaget i den lineære positive tilstand ved en laserfrekvens på 60 Hz inden for et masseområde fra 2000 Da til 20.000 Da. Alle bakterieidentifikationer vil blive udført af MALDI-TOF Biotyper RTC og Bruker MALDI Biotyper 3.1 software og bibliotek (4613 isolater; Bruker Daltonics). Kriterier, der anvendes til mikroorganismeanalyse og identifikation, vil være som anbefalet af producenten.

4. Statistisk analyse Tid til identifikation vil blive bestemt som tiden fra kolonidannelse til det tidspunkt, hvor det endelige resultat rapporteres til en læge. Statistisk analyse vil blive udført for at sammenligne de tre metoder ved hjælp af Chi-square tests. Niveauet for statistisk signifikans vil blive sat til p < 0,05.