Rask diagnose av protetiske leddinfeksjoner ved matriseassistert laserdesorpsjon

Materialer og metoder

1. Pasienter som har høy sannsynlighet for infeksjon basert på Musculoskeletal Infection Society (MSIS) kriteriene og er planlagt kun for debridering eller debridering med implantatfjerning, vil bli invitert til å melde seg på studien etter signert informert samtykke.

   Synovialleddvæsken vil bli tatt prøve før artrotomien på operasjonsrommet. Aspirater vil bli samlet inn under en aseptisk teknikk med en 18-Fr steril sprøyte med en minimumsmengde på 14 ccs. Prøven vil bli delt mellom MALDI-TOF massespektrometri i standard blodkulturflasker (10 ccs), sårkulturrør (2 ccs) og synovialvæskeanalyse (2 ccs). Prøvene vil bli levert til mikrobiologisk laboratorium innen en 2-timers periode.

2. Bakteriedyrking og konvensjonell identifikasjon Bakterieidentifikasjon vil bli utført med den konvensjonelle metoden ved bruk av Vitek 2-systemet. For den konvensjonelle kulturen vil 1 µL godt blandet leddvæske inokuleres og spres på blodagarplater og MacConkey-agarplater ved hjelp av en steril engangsløkke av plast. Platene vil bli inkubert i en aerob atmosfære ved 37 ℃ i 18-24 timer. Når bakterievekst observeres, vil koloniene på blodagar telles, og kolonier fra begge typer plater vil bli identifisert ved å bruke Vitek 2-systemet.

3. MALDI-TOF MS-identifikasjon Suspensjonen oppnådd etter prøveprepareringen ovenfor vil bli sentrifugert ved 13 000 g i 2 minutter, og supernatanten vil bli kastet. Pelleten vil bli sentrifugert ved 13 000 g i ytterligere 2 minutter før fjerning av gjenværende etanol. Femti mikroliter maursyre (70 % v/v) og 50 mL 100 % acetonitril tilsettes pelleten og blandes grundig etter at hver reagens er tilsatt. Suspensjonen vil bli sentrifugert igjen ved 13 000 g i ytterligere 2 minutter, og 1 mL av supernatanten vil bli flekket på stålmålplaten. Analyse vil bli utført etter lufttørking av 1 mL a-cyano-4-hydroksykanelsyre-matriseløsning plassert på den tørkede prøveflekken i duplikat.

   Massespektraprofiler vil bli anskaffet ved hjelp av et microflex LT MALDI-TOF massespektrometer (Bruker Daltonics, Bremen, Tyskland) etter produsentens innstillinger. Spektra vil bli registrert i lineær positiv modus ved en laserfrekvens på 60 Hz innenfor et masseområde fra 2000 Da til 20 000 Da. Alle bakterieidentifikasjoner vil bli utført av MALDI-TOF Biotyper RTC og Bruker MALDI Biotyper 3.1 programvare og bibliotek (4613 isolater; Bruker Daltonics). Kriterier som brukes for mikroorganismeanalyse og identifikasjon vil være som anbefalt av produsenten.

4. Statistisk analyse Tid til identifikasjon vil bli bestemt som tiden fra kolonidannelse til tidspunktet da det endelige resultatet rapporteres til lege. Statistisk analyse vil bli utført for å sammenligne de tre metodene ved bruk av chi-kvadrat-tester. Nivået for statistisk signifikans vil bli satt til p < 0,05.