Diagnóstico rápido de infecção de prótese articular por dessorção a laser assistida por matriz

Material e métodos

1. Os pacientes com alta probabilidade de infecção com base nos critérios da Musculoskeletal Infection Society (MSIS) e agendados apenas para desbridamento ou desbridamento com remoção do implante serão convidados a se inscrever no estudo após o consentimento informado assinado.

   O líquido da articulação sinovial será amostrado antes da artrotomia na sala de operação. Os aspirados serão coletados sob técnica asséptica com seringa estéril de 18 Fr com quantidade mínima de 14 ccs. A amostra será dividida entre espectrometria de massa MALDI-TOF em frascos de hemocultura padrão (10 ccs), tubo de cultura de ferida (2 ccs) e análise de líquido sinovial (2 ccs). As amostras serão entregues ao laboratório de microbiologia em um período de 2 horas.

2. Cultura bacteriana e identificação convencional A identificação bacteriana será realizada pelo método convencional utilizando o sistema Vitek 2. Para a cultura convencional, 1 µL de líquido sinovial bem misturado será inoculado e espalhado em placas de ágar sangue e placas de ágar MacConkey usando uma alça plástica estéril descartável. As placas serão incubadas em uma atmosfera aeróbica a 37 ℃ por 18-24 horas. Quando for observado o crescimento bacteriano, as colônias em ágar sangue serão contadas e as colônias de ambos os tipos de placas serão identificadas usando o sistema Vitek 2.

3. Identificação MALDI-TOF MS A suspensão obtida após o preparo da amostra acima será centrifugada a 13.000g por 2 minutos, e o sobrenadante será descartado. O pellet será centrifugado a 13.000g por mais 2 minutos antes da retirada do etanol residual. Cinquenta microlitros de ácido fórmico (70% v/v) e 50 mL de acetonitrila 100% serão adicionados ao pellet e misturados completamente após a adição de cada reagente. A suspensão será novamente centrifugada a 13.000g por mais 2 minutos, e 1 mL do sobrenadante será aplicado na placa-alvo de aço. A análise será realizada após a secagem ao ar de 1 mL de solução de matriz de ácido a-ciano-4-hidroxicinâmico colocada no local da amostra seca em duplicata.

   Os perfis de espectro de massa serão adquiridos usando um espectrômetro de massa microflex LT MALDI-TOF (Bruker Daltonics, Bremen, Alemanha) seguindo as configurações do fabricante. Os espectros serão registrados no modo linear positivo a uma frequência de laser de 60 Hz dentro de uma faixa de massa de 2.000 Da a 20.000 Da. Todas as identificações de bactérias serão realizadas pelo software e biblioteca MALDI-TOF Biotyper RTC e Bruker MALDI Biotyper 3.1 (4613 isolados; Bruker Daltonics). Os critérios utilizados para análise e identificação de microorganismos serão os recomendados pelo fabricante.

4. Análise estatística O tempo até a identificação será determinado como o tempo desde a formação da colônia até o momento em que o resultado final é relatado ao médico. A análise estatística será realizada para comparar os três métodos usando testes qui-quadrado. O nível de significância estatística será estabelecido em p < 0,05.