Snelle diagnose van prothetische gewrichtsinfectie door matrixondersteunde laserdesorptie

Materiaal en methoden

1. Patiënten die een hoge kans op infectie hebben op basis van de criteria van de Musculoskeletal Infection Society (MSIS) en die zijn ingepland voor alleen debridement of debridement met verwijdering van het implantaat, worden na ondertekende geïnformeerde toestemming uitgenodigd om deel te nemen aan het onderzoek.

   De synoviale gewrichtsvloeistof wordt vóór de artrotomie in de operatiekamer afgenomen. Aspiraten worden verzameld onder een aseptische techniek met een 18-Fr steriele injectiespuit met een minimale hoeveelheid van 14 cc. Het monster wordt verdeeld over MALDI-TOF-massaspectrometrie in standaard bloedkweekflessen (10 cc), wondkweekbuis (2 cc) en synoviale vloeistofanalyse (2 cc). De monsters worden binnen 2 uur afgeleverd bij het microbiologisch laboratorium.

2. Bacteriële kweek en conventionele identificatie Bacteriële identificatie zal worden uitgevoerd door de conventionele methode met behulp van het Vitek 2-systeem. Voor de conventionele kweek wordt 1 μL goed gemengde synoviale gewrichtsvloeistof geïnoculeerd en op bloedagarplaten en MacConkey-agarplaten verspreid met behulp van een steriele plastic wegwerplus. De platen worden gedurende 18-24 uur in een aerobe atmosfeer bij 37 ℃ geïncubeerd. Wanneer bacteriegroei wordt waargenomen, worden de kolonies op bloedagar geteld en worden kolonies van beide soorten platen geïdentificeerd met behulp van het Vitek 2-systeem.

3. MALDI-TOF MS-identificatie De suspensie verkregen na bovenstaande monsterbereiding wordt 2 minuten gecentrifugeerd bij 13.000 g en het supernatant wordt weggegooid. De pellet wordt nog 2 minuten gecentrifugeerd bij 13.000 g voordat de resterende ethanol wordt verwijderd. Vijftig microliter mierenzuur (70% v/v) en 50 ml 100% acetonitril worden aan de pellet toegevoegd en grondig gemengd nadat elk reagens is toegevoegd. De suspensie wordt nog eens 2 minuten bij 13.000 g gecentrifugeerd en 1 ml van het supernatant wordt op de stalen doelplaat gedruppeld. De analyse wordt uitgevoerd na luchtdroging van 1 ml a-cyaan-4-hydroxykaneelzuurmatrixoplossing die in tweevoud op de gedroogde monstervlek is aangebracht.

   Massaspectraprofielen zullen worden verkregen met behulp van een microflex LT MALDI-TOF massaspectrometer (Bruker Daltonics, Bremen, Duitsland) volgens de instellingen van de fabrikant. Spectra zullen worden opgenomen in de lineaire positieve modus met een laserfrequentie van 60 Hz binnen een massabereik van 2000 Da tot 20.000 Da. Alle bacterie-identificaties worden uitgevoerd door MALDI-TOF Biotyper RTC en de Bruker MALDI Biotyper 3.1-software en -bibliotheek (4613 isolaten; Bruker Daltonics). De criteria die worden gebruikt voor de analyse en identificatie van micro-organismen zijn zoals aanbevolen door de fabrikant.

4. Statistische analyse De tijd tot identificatie wordt bepaald als de tijd vanaf kolonievorming tot het tijdstip waarop het eindresultaat aan een arts wordt gerapporteerd. Er zal een statistische analyse worden uitgevoerd om de drie methoden te vergelijken met behulp van Chi-kwadraattoetsen. Het niveau van statistische significantie wordt vastgesteld op p < 0,05.