Diagnóstico rápido de infección de prótesis articular mediante desorción láser asistida por matriz

Material y métodos

1. Los pacientes que tengan una alta probabilidad de infección según los criterios de la Sociedad de Infecciones Musculoesqueléticas (MSIS) y estén programados para desbridamiento solo o desbridamiento con extracción del implante, serán invitados a inscribirse en el estudio después de firmar el consentimiento informado.

   El líquido de la articulación sinovial se tomará una muestra antes de la artrotomía en el quirófano. Los aspirados se recogerán bajo técnica aséptica con jeringa estéril de 18 Fr con una cantidad mínima de 14 cc. La muestra se dividirá entre espectrometría de masas MALDI-TOF en frascos de hemocultivo estándar (10 cc), tubo de cultivo de heridas (2 cc) y análisis de líquido sinovial (2 cc). Las muestras se entregarán al laboratorio de microbiología en un plazo de 2 horas.

2. Cultivo bacteriano e identificación convencional La identificación bacteriana se realizará por el método convencional utilizando el sistema Vitek 2. Para el cultivo convencional, se inoculará 1 µl de líquido articular sinovial bien mezclado y se esparcirá en placas de agar sangre y placas de agar MacConkey utilizando un asa desechable de plástico estéril. Las placas se incubarán en una atmósfera aeróbica a 37 ℃ durante 18 a 24 horas. Cuando se observe crecimiento bacteriano, se contarán las colonias en agar sangre y se identificarán las colonias de ambos tipos de placas utilizando el sistema Vitek 2.

3. Identificación MALDI-TOF MS La suspensión obtenida tras la preparación de la muestra anterior se centrifugará a 13.000 g durante 2 minutos y se desechará el sobrenadante. El sedimento se centrifugará a 13 000 g durante otros 2 minutos antes de eliminar el etanol residual. Cincuenta microlitros de ácido fórmico (70 % v/v) y 50 ml de acetonitrilo al 100 % se agregarán al sedimento y se mezclarán completamente después de agregar cada reactivo. La suspensión se centrifugará de nuevo a 13 000 g durante otros 2 minutos y se colocará 1 ml del sobrenadante en la placa objetivo de acero. El análisis se realizará después del secado al aire de 1 ml de solución de matriz de ácido a-ciano-4-hidroxicinámico colocado en el punto de muestra seco por duplicado.

   Los perfiles de espectros de masas se adquirirán utilizando un espectrómetro de masas microflex LT MALDI-TOF (Bruker Daltonics, Bremen, Alemania) siguiendo la configuración del fabricante. Los espectros se registrarán en el modo positivo lineal a una frecuencia láser de 60 Hz dentro de un rango de masa de 2000 Da a 20 000 Da. Todas las identificaciones de bacterias se realizarán mediante MALDI-TOF Biotyper RTC y el software y la biblioteca Bruker MALDI Biotyper 3.1 (4613 aislados; Bruker Daltonics). Los criterios utilizados para el análisis e identificación de microorganismos serán los recomendados por el fabricante.

4. Análisis estadístico El tiempo de identificación se determinará como el tiempo desde la formación de colonias hasta el momento en que se notifica el resultado final al médico. Se realizará un análisis estadístico para comparar los tres métodos utilizando pruebas de Chi-cuadrado. El nivel de significación estadística se fijará en p < 0,05.