Diagnosi rapida dell'infezione dell'articolazione protesica mediante desorbimento laser assistito da matrice

Materiale e metodi

1. I pazienti che hanno un'alta probabilità di infezione in base ai criteri della Musculoskeletal Infection Society (MSIS) e sono programmati solo per debridement o debridement con rimozione dell'impianto, saranno invitati a iscriversi allo studio dopo aver firmato il consenso informato.

   Il liquido sinoviale dell'articolazione verrà prelevato prima dell'artrotomia in sala operatoria. Gli aspirati saranno raccolti con una tecnica asettica con una siringa sterile da 18 Fr con una quantità minima di 14 cc. Il campione sarà suddiviso tra spettrometria di massa MALDI-TOF in flaconi standard per emocoltura (10 cc), provetta per coltura della ferita (2 cc) e analisi del liquido sinoviale (2 cc). I campioni saranno consegnati al laboratorio di microbiologia entro un periodo di 2 ore.

2. Coltura batterica e identificazione convenzionale L'identificazione batterica sarà eseguita con il metodo convenzionale utilizzando il sistema Vitek 2. Per la coltura convenzionale, 1 µL di liquido articolare sinoviale ben miscelato verrà inoculato e distribuito su piastre di agar sangue e piastre di agar MacConkey utilizzando un'ansa monouso in plastica sterile. Le piastre saranno incubate in atmosfera aerobica a 37°C per 18-24 ore. Quando si osserva la crescita batterica, verranno contate le colonie su agar sangue e le colonie di entrambi i tipi di piastra verranno identificate utilizzando il sistema Vitek 2.

3. Identificazione MALDI-TOF MS La sospensione ottenuta dopo la suddetta preparazione del campione sarà centrifugata a 13.000 g per 2 minuti, ed il supernatante sarà scartato. Il pellet verrà centrifugato a 13.000 g per altri 2 minuti prima della rimozione dell'etanolo residuo. Cinquanta microlitri di acido formico (70% v/v) e 50 mL di acetonitrile al 100% verranno aggiunti al pellet e miscelati accuratamente dopo l'aggiunta di ciascun reagente. La sospensione verrà nuovamente centrifugata a 13.000 g per altri 2 minuti e 1 mL del supernatante verrà depositato sulla piastra bersaglio in acciaio. L'analisi verrà eseguita dopo l'essiccazione all'aria di 1 mL di soluzione di matrice di acido a-ciano-4-idrossicinnamico posta in duplicato sul campione essiccato.

   I profili degli spettri di massa saranno acquisiti utilizzando uno spettrometro di massa microflex LT MALDI-TOF (Bruker Daltonics, Brema, Germania) seguendo le impostazioni del produttore. Gli spettri saranno registrati in modo lineare positivo ad una frequenza laser di 60 Hz entro un intervallo di massa da 2000 Da a 20.000 Da. Tutte le identificazioni batteriche saranno eseguite da MALDI-TOF Biotyper RTC e dal software e libreria Bruker MALDI Biotyper 3.1 (4613 isolati; Bruker Daltonics). I criteri utilizzati per l'analisi e l'identificazione dei microrganismi saranno quelli raccomandati dal produttore.

4. Analisi statistica Il tempo per l'identificazione sarà determinato come il tempo dalla formazione della colonia al momento in cui il risultato finale viene riferito a un medico. Verrà eseguita un'analisi statistica per confrontare i tre metodi utilizzando test Chi-quadrato. Il livello di significatività statistica sarà fissato a p<0.05.