Proteettisen nivelinfektion nopea diagnoosi matriisiavusteisella laserdesorptiolla

Materiaali ja metodit

1. Potilaat, joilla on suuri todennäköisyys saada infektio Musculoskeletal Infection Society (MSIS) -kriteerien perusteella ja joille on suunniteltu pelkkä debridement tai implanttipoiston yhteydessä tehtävä debridementti, kutsutaan ilmoittautumaan tutkimukseen allekirjoitetun tietoisen suostumuksen jälkeen.

   Nivelnesteestä otetaan näyte ennen artrotomiaa leikkaussalissa. Aspiraatit kerätään aseptisella tekniikalla 18 Fr:n steriilillä ruiskulla, jonka vähimmäismäärä on 14 cc. Näyte jaetaan MALDI-TOF-massaspektrometriaan standardeissa veriviljelypulloissa (10 cc), haavaviljelyputkessa (2 cc) ja nivelnesteanalyysissä (2 cc). Näytteet toimitetaan mikrobiologian laboratorioon 2 tunnin sisällä.

2. Bakteeriviljely ja tavanomainen tunnistus Bakteerien tunnistus suoritetaan tavanomaisella menetelmällä Vitek 2 -järjestelmällä. Tavanomaista viljelmää varten 1 µl hyvin sekoitettua nivelnestettä ympätään ja levitetään veri-agar- ja MacConkey-agar-maljoille käyttämällä steriiliä muovista kertakäyttöistä silmukkaa. Levyjä inkuboidaan aerobisessa ilmakehässä 37 ℃:ssa 18-24 tuntia. Kun bakteerien kasvua havaitaan, pesäkkeet veriagarilla lasketaan ja pesäkkeet molemmista levytyypeistä tunnistetaan Vitek 2 -järjestelmän avulla.

3. MALDI-TOF MS -tunnistus Edellä olevan näytteen valmistuksen jälkeen saatua suspensiota sentrifugoidaan 13 000 g:ssä 2 minuuttia, ja supernatantti heitetään pois. Pellettiä sentrifugoidaan 13 000 g:ssä vielä 2 minuuttia ennen etanolin jäännösten poistamista. Viisikymmentä mikrolitraa muurahaishappoa (70 % tilavuus/tilavuus) ja 50 ml 100 % asetonitriiliä lisätään pellettiin ja sekoitetaan huolellisesti jokaisen reagenssin lisäyksen jälkeen. Suspensiota sentrifugoidaan uudelleen 13 000 g:ssä vielä 2 minuuttia, ja 1 ml supernatanttia täplätään teräksiselle kohdelevylle. Analyysi suoritetaan sen jälkeen, kun kuivatulle näytepisteelle asetettu 1 ml a-syaani-4-hydroksikanelihappomatriisiliuosta on ilmakuivattu kahtena rinnakkaisena.

   Massaspektriprofiilit hankitaan käyttämällä microflex LT MALDI-TOF -massaspektrometriä (Bruker Daltonics, Bremen, Saksa) valmistajan asetusten mukaisesti. Spektrit tallennetaan lineaarisessa positiivisessa tilassa 60 Hz:n lasertaajuudella massaalueella 2000 Da - 20 000 Da. Kaikki bakteeritunnistukset suoritetaan MALDI-TOF Biotyper RTC:llä ja Bruker MALDI Biotyper 3.1 -ohjelmistolla ja -kirjastolla (4613 isolaattia; Bruker Daltonics). Mikro-organismien analysoinnissa ja tunnistamisessa käytettävät kriteerit ovat valmistajan suosittelemia.

4. Tilastollinen analyysi Aika tunnistamiseen määritetään ajanjaksona pesäkkeen muodostumisesta siihen hetkeen, jolloin lopullinen tulos ilmoitetaan lääkärille. Tilastollinen analyysi suoritetaan kolmen menetelmän vertaamiseksi khin neliötesteillä. Tilastollisen merkitsevyyden tasoksi asetetaan p < 0,05.