Быстрая диагностика инфекции протезного сустава с помощью матричной лазерной десорбции

Материал и методы

1. Пациенты с высокой вероятностью инфекции на основании критериев Общества скелетно-мышечных инфекций (MSIS), которым назначена только санация или санация с удалением имплантата, будут приглашены для участия в исследовании после подписания информированного согласия.

   Образец синовиальной суставной жидкости будет взят перед артротомией в операционной. Аспираты будут собираться в асептических условиях с помощью стерильного шприца 18-Fr с минимальным объемом 14 см3. Образец будет разделен для проведения масс-спектрометрии MALDI-TOF в стандартных флаконах для культур крови (10 куб. см), пробирок для раневых культур (2 куб. см) и анализа синовиальной жидкости (2 куб. см). Образцы будут доставлены в микробиологическую лабораторию в течение 2 часов.

2. Бактериальная культура и традиционная идентификация Бактериальная идентификация будет проводиться традиционным методом с использованием системы Vitek 2. Для обычной культуры 1 мкл хорошо перемешанной синовиальной суставной жидкости инокулируют и распределяют по чашкам с кровяным агаром и чашкам с агаром МакКонки с помощью стерильной пластиковой одноразовой петли. Планшеты будут инкубировать в аэробной атмосфере при 37 ℃ в течение 18-24 часов. Когда наблюдается рост бактерий, колонии на кровяном агаре подсчитывают, а колонии с чашек обоих типов идентифицируют с помощью системы Vitek 2.

3. Идентификация MALDI-TOF MS. Суспензию, полученную после описанной выше подготовки образцов, центрифугируют при 13 000 g в течение 2 минут, а надосадочную жидкость удаляют. Осадок центрифугируют при 13000 g еще 2 минуты перед удалением остаточного этанола. К осадку добавляют 50 микролитров муравьиной кислоты (70% об./об.) и 50 мл 100% ацетонитрила и тщательно перемешивают после добавления каждого реагента. Суспензию снова центрифугируют при 13000g в течение еще 2 минут, и 1 мл супернатанта наносят на стальную пластину-мишень. Анализ будет выполняться после высушивания на воздухе 1 ​​мл матричного раствора а-циано-4-гидроксикоричной кислоты, помещенного на высушенное пятно образца в двух повторах.

   Профили масс-спектров будут получены с использованием масс-спектрометра microflex LT MALDI-TOF (Bruker Daltonics, Бремен, Германия) в соответствии с настройками производителя. Спектры будут записываться в линейном положительном режиме при частоте лазера 60 Гц в диапазоне масс от 2000 Да до 20000 Да. Все идентификации бактерий будут выполняться с помощью MALDI-TOF Biotyper RTC и программного обеспечения и библиотеки Bruker MALDI Biotyper 3.1 (4613 изолятов; Bruker Daltonics). Критерии, используемые для анализа и идентификации микроорганизмов, будут соответствовать рекомендациям производителя.

4. Статистический анализ. Время до идентификации будет определяться как время от образования колонии до момента, когда конечный результат будет сообщен врачу. Будет проведен статистический анализ для сравнения трех методов с использованием критерия хи-квадрат. Уровень статистической значимости будет установлен на уровне p < 0,05.