Diagnostic rapide de l'infection de l'articulation prothétique par désorption laser assistée par matrice

Matériel et méthodes

1. Les patients qui ont une forte probabilité d'infection sur la base des critères de la Musculoskeletal Infection Society (MSIS) et qui doivent subir un débridement uniquement ou un débridement avec retrait de l'implant, seront invités à s'inscrire à l'étude après avoir signé un consentement éclairé.

   Le liquide articulaire synovial sera prélevé avant l'arthrotomie au bloc opératoire. Les aspirations seront recueillies selon une technique aseptique avec une seringue stérile de 18 Fr avec une quantité minimale de 14 cc. L'échantillon sera divisé entre la spectrométrie de masse MALDI-TOF dans des flacons d'hémoculture standard (10 cc), un tube de culture de plaie (2 cc) et une analyse du liquide synovial (2 cc). Les échantillons seront livrés au laboratoire de microbiologie dans un délai de 2 heures.

2. Culture bactérienne et identification conventionnelle L'identification bactérienne sera réalisée par la méthode conventionnelle en utilisant le système Vitek 2. Pour la culture conventionnelle, 1 µL de liquide articulaire synovial bien mélangé sera inoculé et étalé sur des plaques de gélose au sang et des plaques de gélose MacConkey à l'aide d'une boucle jetable en plastique stérile. Les plaques seront incubées dans une atmosphère aérobie à 37℃ pendant 18 à 24 heures. Lorsqu'une croissance bactérienne est observée, les colonies sur la gélose au sang seront comptées et les colonies des deux types de plaques seront identifiées à l'aide du système Vitek 2.

3. Identification MALDI-TOF MS La suspension obtenue suite à la préparation de l'échantillon ci-dessus sera centrifugée à 13 000 g pendant 2 minutes, et le surnageant sera jeté. Le culot sera centrifugé à 13 000 g pendant encore 2 minutes avant l'élimination de l'éthanol résiduel. Cinquante microlitres d'acide formique (70 % v/v) et 50 mL d'acétonitrile à 100 % seront ajoutés au culot et mélangés soigneusement après l'ajout de chaque réactif. La suspension sera de nouveau centrifugée à 13 000 g pendant 2 minutes supplémentaires, et 1 ml de surnageant sera déposé sur la plaque cible en acier. L'analyse sera effectuée après séchage à l'air de 1 ml de solution de matrice d'acide a-cyano-4-hydroxycinnamique placée sur le point d'échantillon séché en double.

   Les profils de spectres de masse seront acquis à l'aide d'un spectromètre de masse microflex LT MALDI-TOF (Bruker Daltonics, Brême, Allemagne) en suivant les paramètres du fabricant. Les spectres seront enregistrés en mode positif linéaire à une fréquence laser de 60 Hz dans une gamme de masse allant de 2000 Da à 20 000 Da. Toutes les identifications de bactéries seront effectuées par MALDI-TOF Biotyper RTC et le logiciel et la bibliothèque Bruker MALDI Biotyper 3.1 (4613 isolats ; Bruker Daltonics). Les critères utilisés pour l'analyse et l'identification des micro-organismes seront ceux recommandés par le fabricant.

4. Analyse statistique Le temps d'identification sera déterminé comme le temps entre la formation de la colonie et le moment où le résultat final est rapporté à un médecin. Une analyse statistique sera effectuée pour comparer les trois méthodes à l'aide de tests du chi carré. Le niveau de signification statistique sera fixé à p < 0,05.