DRC의 에볼라 바이러스 질병에 대한 모바일 현장 진료 진단 테스트 (MobEboDRC)

기니의 에볼라 발병에서 최대 90%의 환자가 음성 판정을 받았지만 감별진단을 거의 받지 못했고 말라리아 및 기타 질병이 제대로 진단되지 않아 이러한 감염원으로 인해 더 많은 사망자가 발생할 가능성이 높습니다. 또 다른 중요한 측면은 에볼라 환자가 다른 질병을 앓고 있는 동안에 병원체 유형에 대한 정확한 진단을 적시에 제공함으로써 환자의 두려움을 극복해야 한다는 것입니다. [던바 NK 등].

RPA 분석은 기존의 실시간 PCR보다 6배 빠르면서도 동일한 분석 감도와 특이성을 제공합니다. 또한 RPA 형식(장비 크기, 콜드 체인 독립적인 시약)은 신속한 현장 테스트를 실현 가능하고 저렴하게 만듭니다. 우리는 단단한 플라스틱 글러브 박스, DiaS(Diagnostics-in-a-Suitcase), 태양광 패널 및 전원 팩 세트로 구성된 이동식 실험실을 개발했습니다. 분해된 글러브 박스는 기타 필요한 재료(소독액, 추출 키트, 필터 팁, 랙, 와류, 히트 블록, 오토클레이브가 가능한 비닐 봉투 및 개인 보호 장비(PPE))와 함께 금속 상자(80 × 60 × 41cm)에 보관됩니다. 총 중량은 상자의 경우 28kg, DiaS의 경우 16kg입니다. 지금까지 SE 키트를 사용한 샘플 비활성화 및 RNA 추출은 글로브박스에서 수행되었습니다. 이것은 위험 그룹 4 샘플의 취급을 허용했습니다. RT-RPA 분석은 터치스크린이 통합된 ESEQuant TS2 장치가 포함된 DiaS에서 수행되어 소독이 쉽지 않은 랩톱 없이 장치를 작동하고 결과를 표시했습니다(그림 1). 이동식 실험실은 성공적으로 배치되었습니다. 코나크리에서는 주로 비신고, 과묵, 매장 중 감염 전파 사슬로 인해 2014년 말까지 사례가 증가했습니다. 안전하고 위엄 있는 매장(SDB) 프로그램에 대한 빠른 결과를 제공하기 위해 Matoto Gbessia Port II 지구에 두 개의 이동 실험실이 설치되었습니다. 모두 928개의 사후 면봉 샘플을 테스트했습니다. 전체적으로 120개 샘플(12.9%)이 양성 점수를 받았습니다. 긍정적인 결과는 30-40분 이내에 얻어졌으며 SDB 팀에 직접 보고되었습니다[Faye O et al.].

접근하다

목적:

차등 RPA의 성능 및 작동 특성을 평가하기 위해 우리는 i) 기니 및 DRC에서 수집된 샘플의 잘 특성화된 EBOV 혈청 패널 ii) EVD 의심 사례의 혈청 및 iii) IPD 및 NIBR에서 일상적인 진단의 혈청을 사용할 것입니다.

연구 인구:

이 연구는 EVD 의심자, 보관 및 예상 EBOV 음성 샘플 및 선택된 일상 진단 샘플의 자료에 대해 수행됩니다.

포함 및 제외 기준: DRC에서 현재 사용되는 사례 정의에 따라 실시간 RT-PCR 분석에 적합한 "의심되는" 및 "가능성 있는" EVD 사례에 대한 WHO 사례 정의를 충족하는 모든 피험자(남성, 여성, 성인 및 어린이). 전향적 평가를 위해 환자/법적 보호자의 구두 동의가 연구 참여 자격에 대해 요청되며 제외 기준은 피험자의 안전을 위험에 빠뜨릴 수 있는 동의, 샘플 또는 상태를 제공할 수 없음입니다.

표본의 크기:

각 병원균에 대한 50-100개의 RT-PCR 양성 샘플 패널과 50-100개의 RT-PCR 음성 샘플 패널이 조립되어 사용됩니다. 예상되는 RPA 검정 민감도 및 특이도가 98%(신뢰 구간 95%)인 경우 각 매개변수에 대해 최소 30개의 양성 및 음성 사례가 연구에 포함되어야 합니다. 기니에서의 경험에 따르면 의심 사례의 샘플에 대한 RT-PCR 테스트의 10%가 EBOV 양성입니다. 결과적으로 300건의 의심되는 EVD 사례를 선별하여 적어도 30개의 EVD 양성 샘플을 확보해야 합니다. P. falciparum > S.typhi > DENV > YFV의 보급 구배는 나머지 270개 샘플에서 예상됩니다. 각 매개변수에 대해 검사할 양성 및 음성의 최소 수는 유병률에 따라 계산됩니다.

샘플 수집 및 처리:

발열 환자 및 잠재적인 새로운 EVD 발생에 대한 전향적 연구를 위해 프로토콜 포함을 준수하는 EVD 증상이 있는 환자를 위해 DRC에서 사용되는 SOP와 조화된 기니의 EVD 발생에서 수행된 SOP에 따라 구강 면봉 및 정맥 천자를 통해 타액 및 혈청을 수집합니다. 기준. EBOV-RPA 및 실시간 RT-PCR이 수행되고 결과는 일치 음성 또는 양성 또는 불일치로 분류됩니다. EBOV 음성 및 양성 결과를 가진 환자는 현지에서 설정된 기준에 따라 각각 퇴원하거나 입원합니다. 일치하지 않는 결과는 동일한 샘플과 24시간 후에 수집된 보충 샘플에 대해 다시 테스트됩니다. 불일치를 해결할 수 없는 경우 임상의와 결과를 논의하여 상황과 관련하여 환자와 지역 사회를 위한 최선의 결정을 내립니다. 보관된 샘플은 냉동고에 저장된 분취량에서 직접 테스트됩니다.

샘플 추출 프로토콜:

처음에 수집된 모든 샘플은 BSL-3 휴대용 글러브 박스의 용해 버퍼를 사용하여 비활성화 단계를 거칩니다(그림 2). 2개의 신속 추출 프로토콜이 현장 사용에 대한 적합성에 대해 검증 및 비교됩니다. 미정제 시료에서 전체 핵산 추출을 가능하게 하는 여과지 기반 핵산 추출 방법[Zou Y et al.].

두 프로토콜 모두 최대 10분이 필요합니다. 추출물은 캐나다 위니펙(NML)에 있는 BSL-4 실험실로 보내어 세포 배양에 접종하여 샘플 추출물에서 에볼라 바이러스의 불활성화를 확인합니다. RPA는 필요한 모든 장비와 시약이 들어 있는 가방 실험실에서 운영됩니다(그림 1).

.

데이터 수집 및 저장:

임상 데이터 및 결과는 기니에서 사용되는 기존 설문지를 통해 기록되고 DRC 절차와 조화를 이루며 데이터베이스에 입력됩니다. 데이터에는 연령, 성별, 입원 날짜, 발병 날짜, 샘플링 날짜, 자세한 증상, 테스트 결과, 환자의 최종 분류, 질병 결과가 포함되지만 이에 국한되지 않습니다.

데이터 수집 프로세스의 신뢰성, 입력 일반 관리 준수 및 생성된 데이터의 품질을 모니터링하기 위해 적절한 품질 관리 조치가 구현됩니다. 연구가 끝나면 수집된 모든 데이터는 품질을 위해 통제되고 데이터 분석을 위해 잠깁니다.

표준 작동 절차:

적용 가능한 모든 연구 프로세스의 SOP가 제공됩니다.

데이터 분석 방법:

연구 모집단에 대한 정확한 설명을 제공하기 위해 임상 데이터를 분석할 것입니다. 수집된 각 변수는 정량적 변수의 경우 평균, 중앙값, 표준 편차, 정성적 변수의 경우 빈도와 같은 통계 지표를 사용하여 설명됩니다. EVD 진단 테스트의 분석적 성능과 임상적 성능을 비교하기 위해 95% 신뢰 구간과 유의성 테스트(예: Xi-square)가 제공됩니다.

시험 정확도:

양성 심판 음성 심판 테스트 결과 테스트 결과 양성 테스트 결과 TP FP

음성 테스트 결과 FN TN

민감도: 진정한 양성 샘플의 비율. (TP/TP+FN) 특이성: 진음성 샘플의 비율. (TN/TN+FP) 민감도와 특이도는 kappa 값으로 결합되어 테스트의 전체 성능을 추정합니다.

테스트 유용성:

사용자 친화도를 평가하기 위한 점수 시스템이 개발될 것입니다.