다른 선택 절차에 따른 정자 집단의 특성화 (CROSP)

의료보조생식(MAR) 동안 난모세포를 수정하는 데 사용될 정자 집단을 선택하기 위해 현재 다양한 절차를 사용할 수 있습니다. 선택된 개체군은 수정 부위에 도달하고 최적의 수정 및 배아 발달을 가능하게 하는 능력을 가진 완전한 기능을 갖춘 정자를 포함해야 합니다. 이러한 능력은 운동성, 형태학적 이상, 세포사멸 상태[포스파티딜세린 전좌(세포사멸의 초기 단계)] 및 DNA 단편화(세포사멸의 후기 단계)와 같은 특정 정자의 형태 기능적 특징에 엄격히 의존합니다. 체외 수정 실험실에서 사용되는 정자 선택 기술 중 형태 기능 매개변수를 기반으로 최상의/건강한 정자 집단을 선택하는 방법을 결정하는 것을 목표로 합니다. 이를 위해 일상적인 진단 분석 후 사용되지 않은 생 정액은 3개의 부분으로 분할되고 다른 정자 준비 방법(1) DGC, 2) DGC 및 MACS, 3) MSS로 즉시 처리됩니다.

각 방법으로 선택된 정자 세포는 형태학적 및 기능적 매개변수에 대해 분석됩니다.

초기 정자 농도(×106/ml)는 카운팅 챔버를 사용하여 평가됩니다.

정자 운동성은 40배 배율에서 200개의 정자에 대해 평가되며 결과는 백분율로 표시됩니다.

각 선택 절차 후, Neubauer 계수 챔버를 사용하여 농도와 운동성을 결정합니다.

형태가 정상인 정자는 건조 도말에 Diff Quick Staining을 사용하여 염색한 도말에서 확인하며, 200개의 정자는 Kruger 엄격한 기준에 따라 정상/비정상으로 분류됩니다.

포스파티딜세린(PS) 전좌(초기 세포사멸 마커): Annexin V-FITC(Fluorescein Isothiocyanate) 및 요오드화프로피듐(PI)과 함께 정자 세포 현탁액 배양 후 형광 현미경을 사용하여 분석할 것입니다. 정자는 다음과 같이 분류될 것이다: PS 전좌가 없는 생존 가능한 정자(PI 음성/아넥신 음성); 전위된 PS(PI 음성/Annexin 양성)로 실행 가능; 사망(PI 양성/Annexin 양성 또는 PI 양성/Annexin 음성).

DNA 단편화 지수(분석된 세포 수당 DNA 단편화를 나타내는 정자 세포의 백분율; DFI)는 말단 데옥시뉴클레오티딜-트랜스퍼라제-매개 데옥시우리딘 트리포스페이트-플루오레세인 닉 엔드 라벨링(TUNEL) 분석 프로토콜(상용 키트 "In Situ Cell Death 감지"; 로슈 진단). 아폽토시스 동안 게놈 DNA의 절단은 단일 가닥 절단(닉) 및 이중 가닥, 저분자량 DNA 단편 둘 다로 이어진다. 이러한 DNA 가닥 파손은 두 단계의 효소 반응에서 확인할 수 있습니다. 폴리머. TUNEL 양성 정자는 녹색으로 염색되고 TUNEL 음성 샘플은 적색으로 염색되며 형광 현미경으로 직접 검출 및 정량화할 수 있습니다. 이 키트는 세포사멸 세포의 수를 검출하고 정량화하기 위한 정확하고 빠르며 간단한 비방사성 기술로 설계되었습니다. 그것은 세포사멸 동안 생성된 DNA 가닥 절단을 표시하기 때문에 특이적이며, 테스트가 세포사멸 세포와 괴사 세포를 구별할 수 있게 합니다.

기술 통계는 각 변수에 대한 평균, 중앙값, 최소값 및 최대값을 보고하는 데 사용됩니다. Friedman의 검정에 대한 정확한 검정을 사용하여 3가지 기법에 걸쳐 차이가 있는지 조사합니다. Wilcoxon 부호 순위 테스트에 대한 정확한 테스트는 쌍별 비교에 사용됩니다. 다중 비교를 조정하기 위해 Bonferroni 보정이 적용됩니다. 유의 수준은 p<0.05, 양측으로 설정됩니다. 통계 분석은 STATA 15.1 및 SPSS 26.0(사회 과학용 통계 패키지)을 통해 수행됩니다. 50명의 환자가 연구에 포함될 것입니다.

얻은 결과는 IVF 실험실에서 정자 선택 과정을 개선하는 데 도움이 될 것입니다.