철분과 아연 보충이 건강한 남성의 B-카로틴 생체이용률에 미치는 영향

이 연구는 1주일 휴약 기간으로 분리된 3개의 연구 부문을 포함하는 이중 맹검 교차 디자인을 따랐습니다. 요컨대, 참가자들은 4일 동안 주황색, 노란색, 빨간색 및 녹색 과일과 채소를 모두 피함으로써 카로티노이드가 적은 식단을 따르도록 요청받았습니다. 그런 다음 3일 동안 카로티노이드가 없는 식단을 엄격하게 시행했습니다. 이 식단은 지정된 목록의 음식만 허용했습니다(보충 표 A2). 각 연구일에 β-카로틴을 밤새 10시간 이상 금식한 후 아침에 투여했습니다(보충 그림 A1). 모든 참가자는 위약(빈 캡슐), 25mg 철(FeSO4; Woerwag Pharma GmbH & Co. KG, Boeblingen, Germany) 또는 30mg β-카로틴(BIOVEA)을 무작위 순서로 경구 섭취했습니다. mg 아연(ZnSO4; Woerwag Pharma) 캡슐. 시험 전날 저녁에 표준화된 저녁 식사가 제공되었고 전체 중재일 동안 표준화된 식사가 제공되었습니다(보충 표 A3). 첫 번째 연구일에 각 참가자가 각 식사에 대해 소비하는 음식의 양(무게 또는 부피)을 기록하고 유사한 음식, 특히 지방 소비를 보장하기 위해 다음 두 팔 동안 동일한 양을 제공했습니다. 물은 하루 종일 무제한으로 사용할 수 있습니다. 혈액 샘플은 유치 정맥 캐뉼라에서 채취하여 β-카로틴 보충 직전 0시간에 수집한 다음 10시간 동안 매시간 수집했습니다.

β-카로틴, LDL- 및 HDL-콜레스테롤, 트리아실글리세롤(TAG)의 혈장 농도 측정을 위해 EDTA(Sarstedt AG & Co, Nuebrecht, Germany)가 들어 있는 튜브에 혈액을 채취하고 즉시 원심분리(3000 × g, 10 최소, 4°C). 얻은 혈장 샘플에서 3개의 분취량을 추가 분석까지 -80°C에 보관하고 나머지는 초원심분리하여 트리아실글리세롤이 풍부한 분획(TRF)을 얻었습니다. 간 및 신장 기능 표지자 분석을 위해 0시간 및 4시간 시점에서 채취한 혈액에서 혈장 및 혈청을 얻었다.

TRF는 [10]에 따라 준비되었습니다. 요약하면, 혈장(3.5mL)을 초원심분리기 튜브로 옮기고 조심스럽게 8mL 1.3% 염화나트륨으로 덮은 다음 150,000 x g에서 스윙 버킷 로터(SW41Ti)를 사용하여 초원심분리(Beckman Coulter, OptimaTM L-80 XP Ultracentrifuge)했습니다. 4 °C에서 1시간. 그 후, 상부 ~6 mL를 옮겨 TRF를 분리한 다음 질소 가스를 덮어 산화를 최소화하고 추출할 때까지 -80 °C에 보관했습니다.

혈장 샘플은 무작위로 추출되었고 [15]에 따라 HPLC로 분석되었습니다. 간략하게, 내부 표준으로 apo-80-carotenal-methyloxime(12µL/100mL; Fluka Analytical(Merck Group KGaA), Darmstadt, Germany)을 포함하는 에탄올/n-부탄올 혼합물(50:50)로 40µL 혈장을 추출했습니다. 원심분리 후 투명한 상층액을 HPLC로 분석하였다.

TRF는 HPLC[15]로 추출 및 분석되었습니다. 추출을 위해 100 μl apo-80-carotenal-methyloxime(12 μL/100 mL) 및 2 mL 에탄올(단백질 제거용)을 3 mL의 TRF에 첨가하고 30초 동안 vortexing했습니다. 용액을 2mL 헥산으로 2회 추출하였다. 헥산 층을 제거하고, 결합하고, 원심 진공 농축기(Christ, RVC 2-25 CD plus)에서 증발시키고 건조된 샘플을 100μL 아세토니트릴에 재용해하고 즉시 HPLC로 분석했습니다.

플라즈마 및 TRF 샘플 모두 UV-Vis 검출기(SPD 20A, 450 nm로 설정)가 장착된 Shimadzu HPLC(LC-10AD)를 사용하여 분석했습니다. 카로티노이드는 ReproSil 80 ODS-2 컬럼(3µm, 250 x 4.6mm; Dr. Maisch GmbH, Ammerbuch, Germany)과 재순환 모드의 용리액(82% 아세토니트릴, 15% 1,4-다이옥신 및 3 100mM 암모늄 아세테이트 및 10mM 트리에틸아민을 함유하는 % 메탄올(vol/vol))을 1.5mL/분의 유속에서[15]. β-카로틴 표준(≥97.0% 순도, Sigma-Aldrich)를 사용하여 표준 곡선을 구성했습니다.

혈장 TAG, HDL- 및 LDL-콜레스테롤은 임상 실험실(Laborärzte Sindelfingen, Sindelfingen, Germany)에서 분석했습니다.