Raudan ja sinkin lisäyksen vaikutus B-karoteenin hyötyosuuteen terveillä miehillä

Tutkimuksessa noudatettiin kaksoissokkoutettua crossover-mallia, jossa oli kolme tutkimushaaraa, joita erotti yhden viikon huuhtoutumisjaksot. Lyhyesti sanottuna osallistujia pyydettiin noudattamaan vähän karotenoideja sisältävää ruokavaliota välttämällä kaikkia oransseja, keltaisia, punaisia ​​ja vihreitä hedelmiä ja vihanneksia neljän päivän ajan. Tämän jälkeen seurasi kolme päivää tiukasti karotenoiditonta ruokavaliota, joka salli vain tietyn luettelon ruokia (lisätaulukko A2). Jokaisena tutkimuspäivänä β-karoteenia annettiin aamulla yli 10 tunnin yön yli paaston jälkeen (lisäkuva A1). Kaikki osallistujat nielivät suun kautta satunnaisessa järjestyksessä kerta-annoksen 15 mg β-karoteenia (BIOVEA) joko lumelääkkeen (tyhjä kapseli), 25 mg:n rautaa (FeSO4; Woerwag Pharma GmbH & Co. KG, Boeblingen, Saksa) tai 30 mg:n kanssa. mg sinkkiä (ZnSO4; Woerwag Pharma) kapseli. Standardoitu illallinen tarjottiin koetta edeltävänä iltana ja standardoituja aterioita koko interventiopäivän ajan (lisätaulukko A3). Ensimmäisenä tutkimuspäivänä kunkin osallistujan kullekin aterialle kuluttaman ruoan määrä (paino tai tilavuus) kirjattiin ja samat määrät annettiin seuraavien kahden haaran aikana samanlaisen ruoan, erityisesti rasvan, kulutuksen varmistamiseksi. Vettä oli saatavilla rajoittamattomasti kulutukseen koko päivän. Verinäytteet otettiin sisällä olevasta laskimokanyylistä ja kerättiin 0 tuntia juuri ennen β-karoteenilisää ja sitten joka tunti 10 tunnin ajan.

Plasman β-karoteenin, LDL- ja HDL-kolesterolin sekä triasyyliglyserolien (TAG) pitoisuuksien määrittämiseksi veri kerättiin putkiin, jotka sisälsivät EDTA:ta (Sarstedt AG & Co, Nuebrecht, Saksa) ja sentrifugoitiin välittömästi (3000 × g, 10). min, 4 °C). Saaduista plasmanäytteistä kolme erää säilytettiin -80 °C:ssa jatkoanalyysiin asti ja loput ultrasentrifugoitiin triasyyliglyserolirikkaan fraktion (TRF) saamiseksi. Maksan ja munuaisten toimintamerkkien analyyseja varten plasma ja seerumi otettiin verinäytteistä 0 ja 4 tunnin kohdalla.

TRF valmistettiin kohdan [10] mukaisesti. Lyhyesti sanottuna plasma (3,5 ml) siirrettiin ultrasentrifugiputkeen ja peitettiin varovasti 8 ml:lla 1,3-prosenttista natriumkloridia ja sitten ultrasentrifugoitiin (Beckman Coulter, OptimaTM L-80 XP Ultracentrifuge) käyttämällä kääntyvää kauharoottoria (SW41Ti) 150 000 x g:ssä 1 tunti 4 °C:ssa. Myöhemmin TRF eristettiin siirtämällä ylempi ~ 6 ml, joka peitettiin sitten typpikaasulla hapettumisen minimoimiseksi ja säilytettiin -80 °C:ssa uuttamiseen asti.

Plasmanäytteet uutettiin satunnaisesti ja analysoitiin HPLC:llä kohdan [15] mukaisesti. Lyhyesti sanottuna 40 ui plasmaa uutettiin etanoli/n-butanoli-seoksella (50:50), joka sisälsi apo-80-karotenaalimetyylioksiimia (12 ui/100 ml; Fluka Analytical (Merck Group KGaA), Darmstadt, Saksa) sisäisenä standardina. Sentrifugoinnin jälkeen kirkas supernatantti analysoitiin HPLC:llä.

TRF uutettiin ja analysoitiin HPLC:llä [15]. Uuttoa varten 100 ui apo-80-karotenaalimetyylioksiimia (12 ui/100 ml) ja 2 ml etanolia (proteiinin poistamista varten) lisättiin 3 ml:aan TRF:ää ja vorteksoitiin 30 sekuntia. Liuos uutettiin kahdesti 2 ml:lla heksaania. Heksaanikerrokset poistettiin, yhdistettiin ja haihdutettiin keskipako-tyhjiökonsentraattorissa (Christ, RVC 2-25 CD plus) ja kuivattu näyte liuotettiin uudelleen 100 ul:aan asetonitriiliä ja analysoitiin välittömästi HPLC:llä.

Sekä plasma- että TRF-näytteet analysoitiin käyttämällä Shimadzu HPLC:tä (LC-10AD), joka oli varustettu UV-Vis-detektorilla (SPD 20A, asetettu 450 nm:iin). Karotenoidit erotettiin käyttämällä ReproSil 80 ODS-2 -kolonnia (3 µm, 250 x 4,6 mm; Dr. Maisch GmbH, Ammerbuch, Saksa) ja kierrätystilassa olevaa eluenttia (82 % asetonitriiliä, 15 % 1,4-dioksiinia ja 3 um) % metanolia (tilavuus/tilavuus), joka sisältää 100 mM ammoniumasetaattia ja 10 mM trietyyliamiinia) virtausnopeudella 1,5 ml/min [15]. β-karoteenistandardi (≥ 97,0 % puhtaus, Sigma-Aldrich) käytettiin standardikäyrän muodostamiseen.

Plasman TAG-, HDL- ja LDL-kolesteroli analysoitiin kliinisessä laboratoriossa (Laborärzte Sindelfingen, Sindelfingen, Saksa).