Effet de la supplémentation en fer et en zinc sur la biodisponibilité du B-carotène chez les hommes en bonne santé

L'étude a suivi une conception croisée en double aveugle avec trois bras d'étude séparés par des périodes de sevrage d'une semaine. En bref, les participants ont été invités à suivre un régime pauvre en caroténoïdes en évitant tous les fruits et légumes oranges, jaunes, rouges et verts pendant quatre jours. Cela a été suivi de trois jours d'un régime strictement sans caroténoïdes, qui n'autorisait que les aliments d'une liste spécifiée (tableau supplémentaire A2). Chaque jour d'étude, le β-carotène a été administré le matin après un jeûne de plus de 10 heures pendant la nuit (Figure supplémentaire A1). Tous les participants ont ingéré par voie orale, dans un ordre aléatoire, une dose unique de 15 mg de β-carotène (BIOVEA) avec soit un placebo (capsule vide), 25 mg de fer (FeSO4 ; Woerwag Pharma GmbH & Co. KG, Boeblingen, Allemagne) ou 30 gélule mg de zinc (ZnSO4; Woerwag Pharma). Un dîner standardisé a été fourni la veille de l'essai et des repas standardisés ont été fournis pendant toute la journée d'intervention (tableau supplémentaire A3). Le premier jour de l'étude, la quantité de nourriture (poids ou volume) consommée par chaque participant pour chaque repas a été enregistrée et les mêmes quantités fournies au cours des deux bras suivants pour assurer une consommation alimentaire similaire, en particulier de matières grasses. L'eau était disponible sans restriction pour la consommation tout au long de la journée. Des échantillons de sang ont été prélevés à partir d'une canule veineuse à demeure et prélevés à 0 heure juste avant la supplémentation en β-carotène, puis toutes les heures pendant 10 heures.

Pour la détermination des concentrations plasmatiques de β-carotène, de cholestérol LDL et HDL et de triacylglycérols (TAG), le sang a été prélevé dans des tubes contenant de l'EDTA (Sarstedt AG & Co, Nuebrecht, Allemagne) et immédiatement centrifugé (3000 × g, 10 min, 4 °C). À partir des échantillons de plasma obtenus, trois aliquotes ont été stockées à -80 ° C jusqu'à une analyse plus approfondie et le reste ultracentrifugé pour obtenir la fraction riche en triacylglycérols (TRF). Pour les analyses des marqueurs de la fonction hépatique et rénale, le plasma et le sérum ont été obtenus à partir de sang prélevé aux points temporels 0 et 4 heures.

Le TRF a été préparé selon [10]. En bref, le plasma (3,5 ml) a été transféré dans un tube d'ultracentrifugeuse et soigneusement recouvert de 8 ml de chlorure de sodium à 1,3 %, puis ultracentrifugé (Beckman Coulter, OptimaTM L-80 XP Ultracentrifuge) à l'aide d'un rotor à godets oscillants (SW41Ti) à 150 000 x g pour 1 heure à 4°C. Ensuite, le TRF a été isolé en transférant les ~ 6 ml supérieurs, qui ont ensuite été recouverts d'azote gazeux pour minimiser l'oxydation et stockés à -80 ° C jusqu'à l'extraction.

Les échantillons de plasma ont été extraits au hasard et analysés par HPLC selon [15]. En bref, 40 µL de plasma ont été extraits avec un mélange éthanol/n-butanol (50 :50) contenant de l'apo-80-caroténal-méthyloxime (12 µL/100 mL ; Fluka Analytical (Merck Group KGaA), Darmstadt, Allemagne) comme étalon interne. Après centrifugation, le surnageant clair a été analysé par HPLC.

Le TRF a été extrait et analysé par HPLC [15]. Pour l'extraction, 100 µl d'apo-80-caroténal-méthyloxime (12 µL/100 mL) et 2 mL d'éthanol (pour la déprotéinisation) ont été ajoutés à 3 mL de TRF et vortexés pendant 30 secondes. La solution a été extraite deux fois avec 2 ml d'hexane. Les couches d'hexane ont été retirées, combinées et évaporées dans un concentrateur sous vide centrifuge (Christ, RVC 2-25 CD plus) et l'échantillon séché redissous dans 100 ul d'acétonitrile et immédiatement analysé par HPLC.

Les échantillons de plasma et de TRF ont été analysés à l'aide d'un HPLC Shimadzu (LC-10AD) équipé d'un détecteur UV-Vis (SPD 20A, réglé à 450 nm). Les caroténoïdes ont été séparés à l'aide d'une colonne ReproSil 80 ODS-2 (3 µm, 250 x 4,6 mm ; Dr. Maisch GmbH, Ammerbuch, Allemagne) et d'un éluant en mode recirculation (82 % acétonitrile, 15 % 1,4-dioxine et 3 % de méthanol (vol/vol) contenant 100 mM d'acétate d'ammonium et 10 mM de triéthylamine) à un débit de 1,5 mL/min [15]. Un étalon de β-carotène (≥97,0 % pureté, Sigma-Aldrich) a été utilisé pour construire une courbe standard.

Les TAG plasmatiques, le cholestérol HDL et LDL ont été analysés par un laboratoire clinique (Laborärzte Sindelfingen, Sindelfingen, Allemagne).