골수증식성신생물 치료에서 인터페론의 작용기전 (IFN&SMP)
고전적인 BCR-ABL 음성 골수증식종양(MPN)에는 진성적혈구증가증(PV), 본태성혈소판증가증(ET) 및 원발성골수섬유화증(PMF)이 포함됩니다. 이들은 JAK2/STAT 경로를 활성화시키는 돌연변이에 의해 유발되는 다능성 조혈모세포(HSC)의 변형으로 인한 골수성 악성종양입니다. 가장 널리 퍼진 돌연변이는 JAK2V617F입니다. 유형 1 및 유형 2 칼레티쿨린(CALR) 및 트롬보포이에틴 수용체(MPL) 돌연변이도 ET 및 PMF에서 관찰됩니다. 상이한 경로에 영향을 미치는 추가적인 비-MPN 돌연변이도 특히 PMF에서 발견되며, 질병 개시 및/또는 표현형 변화 및/또는 질병 진행 및/또는 요법에 대한 반응에 관여한다.
MPN에 대한 효율적인 치료에 대한 명백하고 긴급한 요구가 있습니다. 특히 PMF는 동종이계 HSC 이식과 JAK 억제제가 질병 결과에 미치는 영향이 제한적이라는 점을 제외하고는 근치적 치료 없이 남아 있습니다. 새로운 치료 접근법 중에서 Peg-IFNα2a(IFN)는 JAK2V617F 및 CALRmut MPN 환자에서 높은 비율의 혈액학적 반응과 심분자 반응(DMR)을 포함하여 주로 JAK2V617F 환자에서 일부 분자 반응을 모두 포함하는 가장 효율적인 방법입니다. 그럼에도 불구하고 우리 자신을 포함한 여러 연구에서 CALRmut 환자의 IFN 분자 반응이 JAK2V617F 환자보다 이질적이고 전반적으로 훨씬 낮다는 것이 입증되었습니다. 또한 일부 JAK2V617F MPN 환자는 IFN에 반응하지 않으며 DMR은 JAK2V617F 환자의 약 20%에서만 관찰됩니다. 마지막으로, DMR을 얻기 위해서는 장기 치료(2-5년)가 필요하며, 이는 장기 독성 가능성으로 인해 성공을 위태롭게 합니다.
CALRmut 환자의 실패, 약물 내성, 이질적인 분자 반응 및 JAK2V617F 환자의 DMR에 대한 긴 지연의 근본적인 이유는 IFNα가 MPN 악성 클론을 표적으로 삼는 메커니즘이 파악하기 어렵기 때문에 여전히 불분명합니다.
IFN 효능의 상당한 개선은 기초 및 임상 연구 없이는 달성될 수 없습니다. 따라서 우리의 두 가지 연구 라인은
- IFNα가 종양 HSC를 구체적으로 표적으로 삼는 방법 이해
- IFNα 치료 중 환자 반응 예측 및 개선
연구 개요
상태
정황
상세 설명
고전적인 BCR-ABL 음성 골수증식종양(MPN)에는 진성적혈구증가증(PV), 본태성혈소판증가증(ET) 및 원발성골수섬유화증(PMF)이 포함됩니다. 이들은 JAK2/STAT 경로를 활성화시키는 돌연변이에 의해 유발되는 다능성 조혈모세포(HSC)의 변형으로 인한 골수성 악성종양입니다. 가장 널리 퍼진 돌연변이는 JAK2V617F입니다. 유형 1 및 유형 2 칼레티쿨린(CALR) 및 트롬보포이에틴 수용체(MPL) 돌연변이도 ET 및 PMF에서 관찰됩니다. 상이한 경로에 영향을 미치는 추가적인 비-MPN 돌연변이도 특히 PMF에서 발견되며, 질병 개시 및/또는 표현형 변화 및/또는 질병 진행 및/또는 요법에 대한 반응에 관여한다.
MPN에 대한 효율적인 치료에 대한 명백하고 긴급한 요구가 있습니다. 특히 PMF는 동종이계 HSC 이식과 JAK 억제제가 질병 결과에 미치는 영향이 제한적이라는 점을 제외하고는 근치적 치료 없이 남아 있습니다. 새로운 치료 접근법 중에서 Peg-IFNα2a(IFN)는 JAK2V617F 및 CALRmut MPN 환자에서 높은 비율의 혈액학적 반응과 심분자 반응(DMR)을 포함하여 주로 JAK2V617F 환자에서 일부 분자 반응을 모두 포함하는 가장 효율적인 방법입니다. 그럼에도 불구하고 우리 자신을 포함한 여러 연구에서 CALRmut 환자의 IFN 분자 반응이 JAK2V617F 환자보다 이질적이고 전반적으로 훨씬 낮다는 것이 입증되었습니다. 또한 일부 JAK2V617F MPN 환자는 IFN에 반응하지 않으며 DMR은 JAK2V617F 환자의 약 20%에서만 관찰됩니다. 마지막으로, DMR을 얻기 위해서는 장기 치료(2-5년)가 필요하며, 이는 장기 독성 가능성으로 인해 성공을 위태롭게 합니다.
CALRmut 환자의 실패, 약물 내성, 이질적인 분자 반응 및 JAK2V617F 환자의 DMR에 대한 긴 지연의 근본적인 이유는 IFNα가 MPN 악성 클론을 표적으로 삼는 메커니즘이 파악하기 어렵기 때문에 여전히 불분명합니다.
IFN 효능의 상당한 개선은 기초 및 임상 연구 없이는 달성될 수 없습니다. 따라서 우리의 두 가지 연구 라인은
- IFNα가 종양 HSC를 구체적으로 표적으로 삼는 방법 이해
- IFNα 치료 중 환자 반응 예측 및 개선
기본 관점에서 주요 목적은 IFN 치료 중 환자의 돌연변이 세포의 클론 구조를 그려 MPN에서 IFN의 작용 메커니즘을 더 잘 이해하는 것입니다. IFN은 특히 JAK2V617F HSC를 표적으로 하며 CALRm 환자에게 동일한 효과를 나타내지 않는 경우와 그 이유를 설명합니다.
수학적 모델과 결합된 클론 구조 데이터를 사용한 우리의 이전 임상 연구는 선조로의 분화에 의한 JAK2V617F HSC의 고갈 및 그에 따른 자가 재생의 손실이 IFN에 의한 JAK2V617F 질병의 근절을 위한 중요한 메커니즘일 수 있음을 나타냅니다. 우리는 더 많은 수의 환자에서 이 가설을 확인하고 JAK2V617F 및 CALRm 돌연변이가 질병을 유발하는 줄기 세포에 미치는 차별적인 영향의 기초를 이해하기를 희망합니다.
두 번째 목표는 다음과 같습니다.
- 더 많은 수의 환자에서 IFN 치료에 대한 CALRm 환자의 내성을 검증합니다. 더욱이, JAK2V617F 환자와 달리 높은 IFN 투여량은 이해해야 할 이유로 분자 반응에 해롭다.
- IFN 유도 분자 반응에서 연관된 돌연변이의 역할을 조사합니다.
IFN 치료는 Tet2 또는 DNMT3a와 같은 추가 돌연변이가 있는 클론(JAK2V617F 양성 또는 JAK2V617F 음성)의 출현을 촉진하는 것으로 나타났으며, 이는 IFN 치료에 대한 내성의 원인이 될 수 있습니다. 치료 성공에서 이러한 돌연변이의 역할을 분석하기 위해 환자 수와 후속 조치를 늘리고 싶습니다. 더욱이, 이러한 추가 돌연변이(치료에 의해 새로운 또는 선택된)는 PV 또는 TE보다 더 심각한 병리(MF, MDS, AML)의 발달을 선호할 수 있으며 IFN 치료 환자의 후속 조치를 모니터링하는 것이 중요할 것입니다.
-일차 환자의 세포에 대한 다른 분자와 조합된 IFN의 효과를 시험관 내에서 탐색합니다. 실제로, 우리의 기본 연구는 이미 IFN의 작용 메커니즘에 PML이 관련되어 있음을 보여주었고 비소가 IFN의 효과를 크게 강화한다는 것을 발견했습니다. 정확한 메커니즘이 무엇인지 깊이 있게 조사할 것입니다.
모든 데이터는 IFN 치료 전 또는 IFN 치료 동안 환자에게서 수집될 것이며, 데이터는 콜로니의 단일 세포 유전자형 분석 및/또는 돌연변이 유전자형 분석 및/또는 시험관 내 분석과 결합된 단일 세포 RNA 시퀀싱에 의해 수집될 것입니다.
연구 유형
등록 (예상)
연락처 및 위치
연구 연락처
- 이름: Isabelle Plo, PhD
- 전화번호: +33 1 42 11 54 93
- 이메일: isabelle.plo@gustaveroussy.fr
연구 연락처 백업
- 이름: Léa Durix, MD,PhD
- 이메일: lea.durix@gustaveroussy.fr
연구 장소
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-
Ile De France
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Villejuif, Ile De France, 프랑스, 94805
- 모병
- Inserm U1287
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연락하다:
- Isabelle Plo, PhD
- 전화번호: +33 1 42 11 54 93
- 이메일: isabelle.plo@gustaveroussy.fr
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연락하다:
- Léa Durix
- 전화번호: +33 1 42 11 54 93
- 이메일: lea.durix@gustaveroussy.fr
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수석 연구원:
- Florence Pasquier, MD, PhD
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참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
- 성인
- 고령자
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
샘플링 방법
연구 인구
설명
포함 기준:
- 만 18세 이상의 성인 남녀
- MPN의 진단은 의뢰 의사에 의해 이전에 확립되었으며 해당 의사는 페길화된 IFN으로 치료하기로 결정했을 것입니다. 환자는 포함 시점에 치료되거나 치료되지 않을 것이며 새로 진단된 환자일 수 있습니다.
- 이 환자들은 사회보장제도에 가입하거나 혜택을 받게 됩니다.
- 이러한 모든 환자에 대해 추가로 20-40mL가 수집됩니다. 이 경우 우리는 이 환자들로부터 혈액백을 수집할 것입니다. 혈액의 양은 환자의 체중과 크기에 따라 300~450mL로 다양합니다.
- 또한 이 프로토콜에는 MPN(PV, TE 또는 MF)이 치료 중 급성 백혈병(AL)으로 진행될 모든 환자가 포함됩니다. 이들은 MPN의 AP가 있는 환자일 것입니다(MPN은 또한 MPN의 급성 변환(AT)에 의해 급성 골수성 백혈병(AML)으로 진행될 수 있습니다).
- 서명된 동의서가 있는 환자
제외 기준:
- 비포함 기준은 일부 골수섬유화증 환자가 앓을 수 있는 빈혈에 관한 것입니다. 따라서 의뢰 모니터링 방문 시점에 빈혈(Hb<10g) 또는 수혈 의존성(≥ 1 포장 적혈구)이 있는 환자는 연구에 포함되지 않습니다.
- 법원의 보호, 후견인 또는 큐레이터인 사람
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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환자의 조혈 전구 세포의 클론 구조
기간: IFN 치료 0일부터 5년 동안, 연 3~4회
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혈액 샘플은 전구 세포(CD34+ 마커)에서 성숙한 세포(과립구)를 분리하기 위해 처리됩니다.
Progenitors는 다소 성숙한 CD34+/CD38±/CD90± 표현형에 따라 FACS에 의해 분리 및 분리된 다음 단일 세포 수준에서 14일 동안 배양됩니다.
배양에서 분화된 세포는 용해되고 DNA는 분리되어 돌연변이 프로파일을 정의하기 위해 PCR 또는 NGS 분석을 위해 저장됩니다.
이러한 세포의 유전자형이 확립되면 DNA가 파괴되고 초기 생물학적 샘플에는 아무것도 남지 않습니다.
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IFN 치료 0일부터 5년 동안, 연 3~4회
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유전자형 분석과 결합된 단일 세포 RNA 시퀀싱
기간: IFN 치료 0일째 및 다른 두 시점(치료 3개월에서 24개월 사이)
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혈액 샘플은 전구 세포(CD34+ 마커)에서 성숙한 세포(과립구)를 분리하기 위해 처리됩니다.
progenitors는 long-read 기술(PromethION)을 사용하여 분리되고 scRNA-seq에 적용됩니다.
조혈 분화 및 RNA 시퀀싱의 궤적은 각 세포에서 분석됩니다.
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IFN 치료 0일째 및 다른 두 시점(치료 3개월에서 24개월 사이)
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체외에서 전구 세포 배양
기간: 0일부터 5년 동안
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혈액 샘플은 전구 세포(CD34+ 마커)에서 성숙한 세포(과립구)를 분리하기 위해 처리됩니다.
이어서 전구체(CD34+)를 사이토카인이 있는 무혈청 배지에서 또는 IFN 단독 또는 연합의 존재 하에 반고체 배지에서 배양한다.
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0일부터 5년 동안
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공동 작업자 및 조사자
수사관
- 수석 연구원: Florence Pasquier, MD,PhD, florence.pasquier@gustaveroussy.fr
간행물 및 유용한 링크
일반 간행물
- James C, Ugo V, Le Couedic JP, Staerk J, Delhommeau F, Lacout C, Garcon L, Raslova H, Berger R, Bennaceur-Griscelli A, Villeval JL, Constantinescu SN, Casadevall N, Vainchenker W. A unique clonal JAK2 mutation leading to constitutive signalling causes polycythaemia vera. Nature. 2005 Apr 28;434(7037):1144-8. doi: 10.1038/nature03546.
- Klampfl T, Gisslinger H, Harutyunyan AS, Nivarthi H, Rumi E, Milosevic JD, Them NC, Berg T, Gisslinger B, Pietra D, Chen D, Vladimer GI, Bagienski K, Milanesi C, Casetti IC, Sant'Antonio E, Ferretti V, Elena C, Schischlik F, Cleary C, Six M, Schalling M, Schonegger A, Bock C, Malcovati L, Pascutto C, Superti-Furga G, Cazzola M, Kralovics R. Somatic mutations of calreticulin in myeloproliferative neoplasms. N Engl J Med. 2013 Dec 19;369(25):2379-90. doi: 10.1056/NEJMoa1311347. Epub 2013 Dec 10.
- Mascarenhas J, Kosiorek HE, Prchal JT, Rambaldi A, Berenzon D, Yacoub A, Harrison CN, McMullin MF, Vannucchi AM, Ewing J, O'Connell CL, Kiladjian JJ, Mead AJ, Winton EF, Leibowitz DS, De Stefano V, Arcasoy MO, Kessler CM, Catchatourian R, Rondelli D, Silver RT, Bacigalupo A, Nagler A, Kremyanskaya M, Levine MF, Arango Ossa JE, McGovern E, Sandy L, Salama ME, Najfeld V, Tripodi J, Farnoud N, Penson AV, Weinberg RS, Price L, Goldberg JD, Barbui T, Marchioli R, Tognoni G, Rampal RK, Mesa RA, Dueck AC, Hoffman R. A randomized phase 3 trial of interferon-alpha vs hydroxyurea in polycythemia vera and essential thrombocythemia. Blood. 2022 May 12;139(19):2931-2941. doi: 10.1182/blood.2021012743.
- Mosca M, Hermange G, Tisserand A, Noble R, Marzac C, Marty C, Le Sueur C, Campario H, Vertenoeil G, El-Khoury M, Catelain C, Rameau P, Gella C, Lenglet J, Casadevall N, Favier R, Solary E, Cassinat B, Kiladjian JJ, Constantinescu SN, Pasquier F, Hochberg ME, Raslova H, Villeval JL, Girodon F, Vainchenker W, Cournede PH, Plo I. Inferring the dynamics of mutated hematopoietic stem and progenitor cells induced by IFNalpha in myeloproliferative neoplasms. Blood. 2021 Dec 2;138(22):2231-2243. doi: 10.1182/blood.2021010986.
- Dagher T, Maslah N, Edmond V, Cassinat B, Vainchenker W, Giraudier S, Pasquier F, Verger E, Niwa-Kawakita M, Lallemand-Breitenbach V, Plo I, Kiladjian JJ, Villeval JL, de The H. JAK2V617F myeloproliferative neoplasm eradication by a novel interferon/arsenic therapy involves PML. J Exp Med. 2021 Feb 1;218(2):e20201268. doi: 10.1084/jem.20201268.
- Gisslinger H, Klade C, Georgiev P, Krochmalczyk D, Gercheva-Kyuchukova L, Egyed M, Rossiev V, Dulicek P, Illes A, Pylypenko H, Sivcheva L, Mayer J, Yablokova V, Krejcy K, Grohmann-Izay B, Hasselbalch HC, Kralovics R, Kiladjian JJ; PROUD-PV Study Group. Ropeginterferon alfa-2b versus standard therapy for polycythaemia vera (PROUD-PV and CONTINUATION-PV): a randomised, non-inferiority, phase 3 trial and its extension study. Lancet Haematol. 2020 Mar;7(3):e196-e208. doi: 10.1016/S2352-3026(19)30236-4. Epub 2020 Jan 31. Erratum In: Lancet Haematol. 2020 Feb 25;:
- Verger E, Cassinat B, Chauveau A, Dosquet C, Giraudier S, Schlageter MH, Ianotto JC, Yassin MA, Al-Dewik N, Carillo S, Legouffe E, Ugo V, Chomienne C, Kiladjian JJ. Clinical and molecular response to interferon-alpha therapy in essential thrombocythemia patients with CALR mutations. Blood. 2015 Dec 10;126(24):2585-91. doi: 10.1182/blood-2015-07-659060. Epub 2015 Oct 20.
- Knudsen TA, Skov V, Stevenson K, Werner L, Duke W, Laurore C, Gibson CJ, Nag A, Thorner AR, Wollison B, Hansen DL, Ellervik C, El Fassi D, de Stricker K, Ocias LF, Brabrand M, Bjerrum OW, Overgaard UM, Frederiksen M, Kristensen TK, Kruse TA, Thomassen M, Mourits-Andersen T, Severinsen MT, Stentoft J, Starklint J, Neuberg DS, Kjaer L, Larsen TS, Hasselbalch HC, Lindsley RC, Mullally A. Genomic profiling of a randomized trial of interferon-alpha vs hydroxyurea in MPN reveals mutation-specific responses. Blood Adv. 2022 Apr 12;6(7):2107-2119. doi: 10.1182/bloodadvances.2021004856.
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