Opracowanie diagnostyki molekularnej krążących komórek nowotworowych przy użyciu nowatorskiego urządzenia mikroprzepływowego

Dla Celu 1 od pacjentów z NSCLC w Narodowym Uniwersyteckim Systemie Zdrowia zostaną pobrane dwie 5 ml krwi przed leczeniem i odpowiadające im próbki guza. Pobieranie próbek zostanie zorganizowane w taki sposób, aby próbki krwi nie były pierwszą próbką pobraną po nakłuciu skóry, aby zminimalizować zanieczyszczenie komórkami nabłonka skóry. W przypadku pierwszej próbki krwi CTC zostaną wyizolowane i odzyskane przy użyciu opracowanego przez NUS bio-czipa CTC zgodnie z metodami opisanymi wcześniej.21 Z drugiej próbki krwi CTC zostaną wyizolowane, utrwalone na chipie i wybarwione na obecność EpCAM, CD45 i DAPI w celu oceny czystości i ilości komórek. DNA zostanie wyekstrahowane z odzyskanych CTC i próbek guza oraz poddane analizie delecji eksonu 19, mutacji L858R i T790M za pomocą cyfrowej reakcji PCR na urządzeniu Fluidigm Biomark zgodnie z metodami opisanymi wcześniej.23 Status mutacji EGFR w próbkach krwi i guza zostanie następnie porównany pod kątem ich zgodności.

W ramach Celu 2 zostaną skierowani do pacjentów z NSCLC leczonych gefitnibem. Dwie 5 ml próbki krwi zostaną pobrane przed leczeniem (poziom wyjściowy), a następnie co 4 tygodnie leczenia (jeden cykl gefitynibu) od pacjentów z NSCLC w National University Health System.

CTC zostaną również uzyskane i przeanalizowane od pacjentów stosujących inny protokół otrzymujących gefitynib/hydroksychlorochinę. (B/08/196. Faza II z liderem w badaniu I fazy mającym na celu zbadanie tolerancji, profilu bezpieczeństwa i skuteczności hydroksychlorochiny i gefitynibu w zaawansowanym niedrobnokomórkowym raku płuca). W tym badaniu CTC są już zbierane. Dlatego badacze zamierzają wykorzystać próbki z B/08/196 do analizy CTC przy użyciu platformy CTC biochip.

Dla każdego punktu czasowego CTC będą izolowane, pobierane i analizowane pod kątem statusu mutacji EGFR, jak opisano powyżej. Odpowiedź kliniczna zostanie określona przy użyciu kryteriów RECIST.34 Zależności między wielkościami typu mutacji EGFR przed leczeniem a najlepszą odpowiedzią kliniczną zostaną ocenione za pomocą dokładnego testu Fishera. Związek między tendencjami w ilości typów mutacji EGFR a wielkością guza we wszystkich cyklach leczenia zostanie oceniony poprzez obserwację przeprowadzoną w badaniu przeprowadzonym przez Maheswarana i wsp.9

Badacze planują przeanalizować 30 pacjentów w ciągu jednego roku dla obu celów tego badania. Niektóre przypadki będą miały odpowiednie próbki (seryjne próbki krwi i odpowiedni guz) dla obu celów. Wielkość próby opiera się na badaniu przeprowadzonym przez Maheshwarana i wsp.9, a także na prawdopodobnej liczbie odpowiednich osób w ciągu 1 roku w NUHS. Poza tym brakuje odpowiednich danych do oszacowania wielkości próby. W szczególności brakuje częstości mutacji T790M w odpowiedniej populacji pacjentów, co podkreśla brak odpowiednich systemów analitycznych do jej oceny, takich jak ten zaproponowany w tym badaniu.