Aronia w schemacie leczenia cukrzycy typu 2

Hipoteza: Fermentowany ekstrakt z aronii (FAE) poprawia glikemię i lipidemię w T2D skuteczniej niż zarówno niefermentowany ekstrakt z aronii (NFAE), jak i placebo.

Pytania badawcze:

Czy FAE/NFAE po podaniu pacjentom z T2D:

• Poprawić odpowiedzi glukozy na doustny test obciążenia glukozą i HbA1C?
• Poprawić cholesterol LDL, HDL i całkowity na czczo?
• Zmniejszyć oporność na insulinę i zwiększyć całkowitą zdolność antyoksydacyjną/przeciwzapalną?
• Zwiększyć krążące poziomy GLP-1 i GIP przy niższej aktywności DPP4?
• Złagodzić nadciśnienie i otyłość?

Metody Do podwójnie ślepej, randomizowanej, potrójnej krzyżowej próby potrzeba łącznie 48 pacjentów z T2D. Pacjenci będą codziennie spożywać FAE, NFAE lub placebo podzielone na dwie dawki, które mają zapewnić wystarczającą dawkę bioaktywnych związków fenolowych. Pacjenci będą rekrutowani przez „forsoegsperson.dk”, "sundhed.dk", oraz ulotki umieszczone w szpitalu uniwersyteckim w Aarhus (AUH). Pacjenci z T2D z glikemią na czczo ≤ 12 mM i HbA1c > 6,1% i < 10%, bez ciężkich chorób współistniejących, zostaną włączeni. Przed włączeniem pacjenci otrzymują wszystkie niezbędne informacje dotyczące badania (pisemne i ustne), w tym informacje o potencjalnych skutkach ubocznych (np. alergia na aronię) i będą musieli wyrazić świadomą zgodę (wizyta 1). Przeprowadzona zostanie ocena, czy pacjenci również spełniają kryteria.

Randomizowane, podwójnie zaślepione, potrójnie krzyżowe badanie składa się z trzech ośmiotygodniowych okresów interwencyjnych (placebo, FAE i NFAE), w których uczestnicy są losowo przydzielani do kolejności zabiegów (sześć różnych możliwości kolejności). Okresy interwencji są oddzielone co najmniej trzytygodniowymi okresami wymywania (szczegóły na rysunku 1). Przed i po każdym okresie interwencji, czyli sześciokrotnie, wykonywane będą doustne testy obciążenia glukozą (OGTT). Komitety Regionu Centralnej Danii ds. Etyki Badań nad Zdrowiem zatwierdziły badanie.

Analizy OGTT: Przed OGTT uczestnicy pościli przez 8 godzin, po czym spożyli 75 g glukozy rozpuszczonej w 300 ml wody w ciągu 5 minut. Krew zostanie pobrana w punktach czasowych -10, 0, 30, 60, 90, 120 i 240 minut.

Analizy krwi: Po pobraniu krwi osocze będzie przechowywane w temperaturze -80°C do czasu dalszej analizy. Oczywiście celem badaczy jest ustalenie, czy spożycie FAE i NFAE jest w stanie obniżyć poziom cukru we krwi na czczo i po posiłku, a co za tym idzie, zostaną zmierzone poziomy glukozy, fruktozaminy i HbA1c. Stężenie końcowych produktów zaawansowanej glikozylacji zostanie ocenione w próbkach krwi na czczo. Badana będzie również lipidemia, m.in. stężenie cholesterolu całkowitego, triglicerydów, lipoprotein o dużej gęstości i lipoprotein o małej gęstości. Stan zapalny będzie oceniany poprzez pomiar poziomu cytokin pro- i przeciwzapalnych oraz stężenia białka C-reaktywnego w próbkach krwi na czczo. Aby określić, czy aronia działa poprzez regulację za pośrednictwem inkretyn, zmierzone zostaną stężenia GIP i GLP-1 oraz aktywność DDP4. Ocenione zostaną również stężenia glukagonu, insuliny i adiponektyny.

Insulinooporność: dysfunkcja komórek β i insulinooporność zostaną oszacowane na podstawie stężeń glukozy i insuliny we krwi przy użyciu modelu oceny homeostazy (3) i indeksu Matsudy (4), które są oparte na stężeniach mierzonych odpowiednio na czczo i podczas OGTT.

Dobowe ciśnienie krwi: będzie prowadzone całodobowe ambulatoryjne monitorowanie ciśnienia krwi. Niezbędny sprzęt dostępny jest w AUH. Uczestnicy będą mieli mierzone 24-godzinne ciśnienie krwi przed i po każdym okresie interwencji.

Wskaźnik masy ciała (BMI): Podczas pierwszej wizyty mierzy się wzrost i wagę uczestników, a następnie monitoruje wagę.

Testy metabolomiczne i mikrobiomiczne: Wyniki poprzednich testów (wpływ na główne wyniki) określą zakres kolejnych analiz metabolomicznych i mikrobiomicznych. Próbki kału do mikrobiomiki, a także próbki krwi i moczu do metabolomiki będą przechowywane w temperaturze -80°C do momentu użycia.

Analiza danych: Obliczenie mocy opiera się na naszym podstawowym parametrze efektu przyrostowym polu powierzchni glukozy pod krzywą (iAUC). Liczba uczestników potrzebna do uzyskania mocy statystycznej 80% na poziomie P<0,05 (α=0,05; 1-β=0,8) wyliczono na 48. Badacze chcieli wykryć minimalną istotną różnicę dla obszaru (średnia ± odchylenie standardowe) 65 ± 50 mmol/l x 120 min, co daje nam szacunkową wielkość efektu 1,30. Przewidywany spadek wynosi 20%. Dla każdej zmiennej zostanie przeprowadzona analiza ANOVA w celu określenia, czy zmienne zmieniają się po podaniu FAE, NFAE lub placebo, a także w celu oceny zmienności międzygrupowej na początku badania iw punkcie końcowym. Istotność zostanie ustawiona na p < 0,05.