Um estudo de MVA85A em crianças e bebês saudáveis

O M.tb é um organismo intracelular e a imunidade protetora depende de um sistema imunológico celular intacto. Tanto os linfócitos T CD4+ restritos à classe II quanto os linfócitos T CD8+ restritos à classe I são importantes para a proteção. As células gama delta e as células T não classicamente restritas, como as células T restritas a CD1, também podem desempenhar um papel protetor, mas o conhecimento de como induzi-las a níveis protetores por vacinação é muito limitado. Embora vários sistemas de administração de vacinas sejam capazes de induzir células T, e. combinações de proteína/adjuvante, vacinas de DNA e vetores virais recombinantes, quando usados ​​sozinhos, esses sistemas de entrega induzem apenas respostas de baixo nível. As estratégias de imunização primária-reforço heterólogas envolvem a imunização com 2 duas vacinas diferentes, cada uma expressando o mesmo antígeno, com várias semanas de intervalo. Essas estratégias induzem níveis mais altos de células T CD4+ e CD8+ do que o reforço homólogo em modelos animais de malária, HIV e tuberculose.

Vírus vaccinia modificado recombinante Ankara expressando o antígeno 85A (MVA85A). Quando usados ​​em estratégias de iniciação-reforço heterólogas, alguns vetores virais são muito bons em estimular respostas de células T previamente iniciadas, particularmente construtos adenovirais recombinantes e vírus da varíola recombinantes. O vírus vaccinia modificado Ankara (MVA) é uma cepa atenuada do vírus vaccinia que passou mais de 500 vezes através de fibroblastos de embrião de galinha e, como consequência, perdeu tanto os genes da gama de hospedeiros quanto os genes dos receptores de citocinas. A MVA tem um excelente histórico de segurança, pois foi usada para vacinar mais de 120.000 pessoas no final da campanha de erradicação da varíola, sem eventos adversos graves. Em humanos, várias centenas de voluntários HIV negativos já foram imunizados com MVAs recombinantes que expressam vários antígenos diferentes, sem eventos adversos graves. Foi demonstrado que um MVA recombinante expressando um antígeno de Plasmodium falciparum aumenta as células T CD4+ e CD8+ em humanos. MVAs recombinantes estão agora em ensaios clínicos para várias doenças infecciosas, incluindo HIV, hepatite B e malária. É importante ressaltar que, para uma nova vacina contra tuberculose, a segurança do MVA como vetor viral foi demonstrada em pacientes HIV positivos.

A inclusão do BCG em tais regimes de iniciação-reforço heterólogos permite que os efeitos benéficos do BCG sejam retidos. Desenvolvemos uma estratégia de imunização usando BCG como imunização primária e um MVA recombinante (rMVA) como reforço. O antígeno selecionado para inclusão no rMVA deve estar presente em todas as cepas de BCG. Selecionamos o Antígeno 85A, que faz parte do complexo imunodominante do antígeno 85. Embora existam numerosos antígenos candidatos para uso em uma vacina contra TB, o antígeno 85A tem sido considerado uma escolha importante. É o principal antígeno alvo reconhecido pelas células T de indivíduos infectados e é protetor como uma vacina de DNA em pequenos animais. É importante ressaltar que, para uso em regimes de reforço de BCG prime-MVA, é altamente conservado entre todas as espécies de micobactérias e está presente em todas as cepas de BCG. Em pequenos animais, é um dos principais alvos das respostas imunes induzidas por BCG e, em humanos, células T CD8 restritas a HLA-A2 foram encontradas em uma alta proporção de indivíduos imunizados com BCG. O antígeno 85A é uma enzima, a micoliltransferase, que está envolvida na biossíntese da parede celular.

Dados pré-clínicos O uso deste reforço BCG prime-MVA85A em camundongos BALB/c induz níveis mais altos de células CD4 T e CD8+ T secretoras de interferon-gama (IFN-γ) específico do antígeno e níveis mais altos de proteção do que após BCG sozinho. Este regime foi agora ainda avaliado no modelo de provocação de aerossol de cobaia mais sensível com resultados muito encorajadores. Porquinhos-da-índia vacinados com BCG, seguido por MVA85A, e depois reforçados com um segundo vetor viral recombinante, fowlpox, expressando o antígeno 85A (FP85A) mostraram proteção significativamente maior contra o desafio do que porquinhos-da-índia vacinados apenas com BCG. Este regime também é imunogênico e protetor em macacos rhesus

Estudos clínicos A segurança e a imunogenicidade desta estratégia de vacinação de reforço BCG prime-MVA85A já foram avaliadas em uma série de estudos de Fase I de pequena escala no Reino Unido. A MVA85A foi a primeira vacina candidata contra a tuberculose em ensaios clínicos em qualquer lugar do mundo em setembro de 2002, e atualmente é a única em ensaios clínicos na África. A principal leitura imunológica usada nesses ensaios clínicos é o ensaio ex-vivo IFN-γ Elispot, que é usado para avaliar respostas específicas de células T ao PPD da tuberculina, complexo de antígeno 85 e pools de peptídeos sobrepostos abrangendo o comprimento do antígeno 85A. O melhor correlato imunológico da proteção na tuberculose murina e humana é a secreção de IFN-γ das células T sensibilizadas.

No Reino Unido, 14 voluntários saudáveis ​​virgens de micobactérias e BCG foram vacinados com 5 x 10^7pfu MVA85A, administrado por via intradérmica. Achamos que o MVA85A é seguro e bem tolerado. Uma única vacinação com MVA85A induz níveis notavelmente altos de respostas de células T efetoras específicas (resposta mediana de IFN-γ Elispot para pools de peptídeos somados do antígeno 85A 1153 pontos por milhão de PBMC). Além disso, a segurança de MVA85A em voluntários previamente vacinados com BCG já foi demonstrada em 17 voluntários. Esses 17 voluntários mostram níveis de pico ainda mais altos de células T específicas do antígeno (resposta média de 2.455 pontos por milhão de PBMC) 1 semana após a vacinação do que aqueles imunizados com MVA85A sozinho. Talvez mais importante para a indução da memória de células T, os voluntários que foram previamente vacinados com BCG mantêm níveis mais altos de células T específicas do antígeno após MVA85A por até 24 semanas após a vacinação, quando comparados aos voluntários vacinados apenas com MVA85A. Em contraste com esse reforço do vetor viral, a magnitude das respostas das células T observadas após a vacinação com uma vacina de proteína/adjuvante líder (para a malária), RTS,S/AS02, é de cerca de 200 manchas por milhão de PBMC.

Esta série de estudos de Fase I também foi replicada na Gâmbia, e os resultados da Gâmbia são igualmente promissores. Nos estudos do Reino Unido e da Gâmbia, o MVA85A induz respostas imunes 5 a 10 vezes maiores do que qualquer outro MVA recombinante em ensaios clínicos. A explicação mais provável para isso é que os voluntários têm alguma imunidade antimicobacteriana preexistente fraca induzida pela exposição a micobactérias ambientais, e essa imunidade antimicobacteriana específica está sendo aumentada pelo MVA85A. Temos alguns dados preliminares para apoiar esta hipótese, e outros grupos também encontraram imunidade pré-existente a micobactérias ambientais em adultos saudáveis ​​do Reino Unido. As vacinas que são boas para aumentar as respostas das células T previamente preparadas, como a MVA85A, são potencialmente boas candidatas para uma vacina pós-exposição projetada para aumentar a resposta imune e prevenir o desenvolvimento da doença naqueles infectados de forma latente. Se os altos níveis de células T específicas observados após uma única imunização com MVA85A são atribuíveis ao reforço de respostas induzidas pelo ambiente pré-existentes, isso torna o MVA85A um candidato extremamente promissor para uma vacina de reforço, administrada como uma vacina pós-exposição em pacientes latentes. infecção.

O estudo seguinte, que concluiu a inscrição no Reino Unido em fevereiro de 2006, avaliou a segurança e a imunogenicidade do MVA85A em voluntários saudáveis ​​com infecção latente por M.tb. Doze indivíduos saudáveis ​​com infecção latente foram vacinados com uma dose única de 5 x 10^7pfu MVA85A. Neste estudo, a infecção latente por M.tb foi determinada pelo teste tuberculínico e respostas ex-vivo IFN-γ Elispot a dois antígenos específicos de M.tb, ESAT6 e CFP10. O acompanhamento envolveu avaliação radiológica e clínica detalhada da segurança desta vacina em indivíduos infectados por M.tb. Descobrimos que o MVA85A é igualmente seguro e igualmente imunogênico nessa população com infecção latente, assim como na população vacinada com BCG (Sander et al, dados não publicados). Também realizamos um estudo de determinação de dose observando duas doses adicionais de MVA85A, 1 x 10^7 pfu e 1 x 10^8 pfu. Doze indivíduos foram vacinados com cada dose. Os resultados preliminares mostram que a vacina é significativamente mais imunogênica na dose mais alta (1 x 10^8 pfu), mas a imunogenicidade da dose mais baixa (1 x 10^7 pfu) é comparável à dose padrão (5 x 10^7 pfu). .

Acabamos de iniciar a inscrição em um estudo de HIV onde adultos virgens de antirretrovirais, infectados por HIV com uma contagem de CD4 superior a 350 são vacinados com MVA85A. Até o momento, não houve preocupações de segurança com este estudo.

O MVA85A está sendo testado em uma série de estudos de Fase I e II na província de Western Cape, África do Sul, onde a prevalência de tuberculose é extremamente alta (incidência anual da doença ~1%). Em agosto de 2005, a inscrição começou no julgamento 008 e continuou até julho de 2006. 24 adultos saudáveis ​​virgens de tuberculose e não infectados pelo HIV foram vacinados. Os resultados preliminares deste braço do estudo foram apresentados em Viena (Hawkridge et al, TB Vaccines for the World; abril de 2006) e Paris, a vacina demonstrou ser segura e altamente imunogênica. A inscrição no grupo de adolescentes deste estudo começou em novembro de 2006, uma vez que ficou claro que os resultados de segurança do dia 84 em adultos eram satisfatórios.

Este protocolo forma a segunda parte desses estudos de redução de idade na África do Sul, que são necessários antes de iniciarmos um estudo de eficácia de prova de conceito de Fase IIb com MVA85A nesta população em 2008.