MVA85A在健康儿童和婴儿中的研究

结核分枝杆菌是一种细胞内生物，保护性免疫依赖于完整的细胞免疫系统。 II 类限制性 CD4+ 和 I 类限制性 CD8+ T 淋巴细胞对于保护都很重要。 Gamma delta 细胞和非经典限制性 T 细胞（如 CD1 限制性 T 细胞）也可能发挥保护作用，但关于如何通过接种疫苗将其诱导至保护水平的知识非常有限。 尽管一些疫苗递送系统能够诱导 T 细胞，例如 蛋白质/佐剂组合、DNA 疫苗和重组病毒载体，当单独使用时，这些递送系统仅引起低水平反应。 异源初免-加强免疫策略包括使用 2 种不同的疫苗进行免疫，每种疫苗都表达相同的抗原，间隔数周。 在疟疾、HIV 和 TB 动物模型中，这些策略比同源增强诱导更高水平的 CD4+ 和 CD8+ T 细胞。

表达抗原 85A (MVA85A) 的重组改良痘苗病毒 Ankara。 当用于异源引发-加强策略时，一些病毒载体非常擅长加强先前引发的 T 细胞反应，特别是重组腺病毒构建体和重组痘病毒。 改良的安卡拉痘苗病毒 (MVA) 是一种减毒的痘苗病毒株，已通过鸡胚成纤维细胞传代 500 多次，因此失去了宿主范围基因和细胞因子受体基因。 MVA 拥有出色的安全记录，因为它在天花根除运动结束时被用于为超过 120,000 人接种疫苗，没有出现严重的不良事件。 在人类中，数百名 HIV 阴性志愿者现在已经用表达多种不同抗原的重组 MVA 进行了免疫，没有出现严重的不良事件。 表达恶性疟原虫抗原的重组 MVA 已被证明可以增强人类的 CD4+ 和 CD8+ T 细胞。 重组 MVA 目前正在进行多种传染病的临床试验，包括 HIV、乙型肝炎和疟疾。 重要的是，对于一种新的 TB 疫苗，MVA 作为病毒载体的安全性现已在 HIV 阳性患者中得到证实。

将 BCG 包含在此类异源初免-加强方案中可以保留 BCG 的有益作用。 我们开发了一种免疫策略，使用 BCG 作为初免免疫并使用重组 MVA (rMVA) 作为加强免疫。 选择包含在 rMVA 中的抗原必须存在于所有 BCG 菌株中。 我们选择了抗原 85A，它构成免疫显性抗原 85 复合物的一部分。 尽管有许多候选抗原可用于 TB 疫苗，但抗原 85A 长期以来一直被认为是首选。 它是受感染个体的 T 细胞识别的主要靶抗原，在小动物中作为 DNA 疫苗具有保护作用。 重要的是，对于用于 BCG prime-MVA 加强方案，它在所有分枝杆菌物种中高度保守，并且存在于所有 BCG 菌株中。 在小动物中，它是 BCG 诱导的免疫反应的主要目标，在人类中，在高比例的 BCG 免疫个体中发现了 HLA-A2 限制性 CD8 T 细胞。 抗原85A是一种酶，分枝杆菌转移酶，参与细胞壁生物合成。

临床前数据 在 BALB/c 小鼠中使用这种 BCG prime-MVA85A 增强剂可诱导更高水平的抗原特异性干扰素-γ (IFN-γ) 分泌 CD4 T 和 CD8+ T 细胞，以及比单独使用 BCG 后更高水平的保护。 现在已经在更敏感的豚鼠气溶胶攻击模型中进一步评估了该方案，结果非常令人鼓舞。 接种 BCG、随后接种 MVA85A、然后进一步接种第二种重组病毒载体鸡痘、表达抗原 85A (FP85A) 的豚鼠比仅接种 BCG 的豚鼠表现出显着更强的抵抗攻击的保护作用。 该方案在恒河猴中也具有免疫原性和保护性

临床研究 这种 BCG prime-MVA85A 加强疫苗接种策略的安全性和免疫原性现已在英国的一系列小规模 I 期研究中得到评估。 MVA85A 是 2002 年 9 月在世界任何地方进行临床试验的第一个候选 TB 疫苗，目前是非洲唯一的临床试验疫苗。 这些临床试验中使用的主要免疫学读数是体外 IFN-γ Elispot 测定，用于评估对结核菌素 PPD、抗原 85 复合物和跨越抗原 85A 长度的重叠肽库的特异性 T 细胞反应。 小鼠和人类 TB 保护的最佳免疫相关性是 IFN-γ 从致敏 T 细胞中的分泌。

在英国，14 名健康志愿者接种了 5 x 10^7pfu MVA85A 皮内接种的分枝杆菌和 BCG 幼稚疫苗。 我们发现 MVA85A 是安全且耐受性良好的。 用 MVA85A 进行单次疫苗接种可诱导显着高水平的特异性效应 T 细胞反应（对抗原 85A 的中值 IFN-γ Elispot 反应总肽库为每百万 PBMC 1153 个点）。 此外，MVA85A 在先前接种 BCG 的志愿者中的安全性现已在 17 名志愿者中得到证实。 这 17 名志愿者在接种疫苗后 1 周显示出比仅用 MVA85A 免疫的志愿者更高的抗原特异性 T 细胞峰值水平（中值反应每百万 PBMC 2455 个斑点）。 也许对于诱导 T 细胞记忆而言更重要的是，与仅接种 MVA85A 的志愿者相比，先前接种过 BCG 疫苗的志愿者在接种 MVA85A 后维持更高水平的抗原特异性 T 细胞长达 24 周。 与这种病毒载体增强相反，在接种领先的蛋白质/佐剂疫苗（用于疟疾）RTS,S/AS02 后观察到的 T 细胞反应强度约为每百万 PBMC 200 个点。

这一系列的一期研究也在冈比亚进行了复制，冈比亚的结果同样令人鼓舞。 在英国和冈比亚的研究中，MVA85A 诱导的免疫反应比临床试验中任何其他重组 MVA 高 5-10 倍。 对此最可能的解释是，志愿者由于暴露于环境分枝杆菌而产生了一些较弱的预先存在的抗分枝杆菌免疫力，而这种特定的抗分枝杆菌免疫力正在被 MVA85A 增强。 我们有一些初步数据支持这一假设，其他小组也发现健康的英国成年人对环境分枝杆菌具有预先存在的免疫力。 擅长增强先前引发的 T 细胞反应的疫苗（例如 MVA85A）可能是暴露后疫苗的良好候选者，旨在增强免疫反应并防止潜伏感染者发生疾病。 如果在用 MVA85A 单次免疫后观察到的高水平特异性 ​​T 细胞可归因于增强预先存在的环境诱导反应，那么这使得 MVA85A 成为极有希望的加强疫苗候选者，作为潜伏期暴露后疫苗给予感染。

下一项研究于 2006 年 2 月在英国完成招募，评估了 MVA85A 在潜伏感染结核分枝杆菌的健康志愿者中的安全性和免疫原性。 12 名潜伏感染的健康受试者接种了单剂 5 x 10^7pfu MVA85A。 在这项研究中，通过结核菌素皮肤试验和对两种结核分枝杆菌特异性抗原 ESAT6 和 CFP10 的离体 IFN-γ Elispot 反应确定潜伏的结核分枝杆菌感染。 后续行动包括对该疫苗在结核分枝杆菌感染受试者中的安全性进行详细的放射学和临床评估。 我们发现 MVA85A 在这个潜伏感染人群中与在接种 BCG 疫苗的人群中一样安全且具有同等免疫原性（Sander 等人，未发表的数据）。 我们还进行了一项剂量发现研究，研究了另外两种剂量的 MVA85A，1 x 10^7pfu 和 1 x 10^8pfu。 每剂疫苗接种 12 名受试者。 初步结果表明，该疫苗在较高 (1 x 10^8 pfu) 剂量下的免疫原性明显更高，但较低 (1 x 10^7 pfu) 剂量的免疫原性与标准 (5 x 10^7pfu) 剂量相当.

我们刚刚开始参加一项 HIV 研究，其中 CD4 计数大于 350 的未接受过抗逆转录病毒、HIV 感染的成年人接种了 MVA85A 疫苗。 迄今为止，这项研究没有安全问题。

MVA85A 正在南非西开普省的一系列 I 期和 II 期研究中进行试验，那里结核病的流行率极高（年发病率约为 1%）。 2005年8月，008试验开始招生，一直持续到2006年7月。 24 名未感染结核病和未感染 HIV 的健康成年人接种了疫苗。 该试验的初步结果已在维也纳（Hawkridge 等人，世界结核病疫苗；2006 年 4 月）和巴黎公布，该疫苗被证明是安全和高度免疫原性的。 一旦明确第 84 天的成人安全结果令人满意，便于 2006 年 11 月开始招募该研究的青少年组。

该方案构成了在南非进行的这些年龄递减研究的第二部分，这是我们在 2008 年开始在该人群中使用 MVA85A 进行 IIb 期概念验证功效试验之前所必需的。