Исследование MVA85A у здоровых детей и младенцев

M.tb является внутриклеточным организмом, и защитный иммунитет зависит от интактной клеточной иммунной системы. CD4+ Т-лимфоциты, рестриктированные по классу II, и CD8+, рестриктированные по классу I, важны для защиты. Гамма-дельта-клетки и неклассически рестриктированные Т-клетки, такие как CD1-рестриктированные Т-клетки, также могут играть защитную роль, но знания о том, как индуцировать их до защитного уровня с помощью вакцинации, очень ограничены. Хотя некоторые системы доставки вакцин способны индуцировать Т-клетки, напр. комбинации белок/адъювант, ДНК-вакцины и рекомбинантные вирусные векторы, при использовании по отдельности эти системы доставки индуцируют реакции только низкого уровня. Стратегии гетерологичной первичной иммунизации включают иммунизацию двумя разными вакцинами, каждая из которых экспрессирует один и тот же антиген, с интервалом в несколько недель. Эти стратегии индуцируют более высокие уровни CD4+ и CD8+ Т-клеток, чем гомологичная бустерная стимуляция в животных моделях малярии, ВИЧ и туберкулеза.

Рекомбинантный модифицированный вирус коровьей оспы Анкара, экспрессирующий антиген 85А (MVA85A). При использовании в гетерологичных стратегиях прайм-бустинг некоторые вирусные векторы очень хорошо усиливают ранее праймированные Т-клеточные ответы, особенно рекомбинантные аденовирусные конструкции и рекомбинантные поксвирусы. Модифицированный вирус осповакцины Анкара (MVA) представляет собой аттенуированный штамм вируса осповакцины, который более 500 раз пассировали через фибробласты куриных эмбрионов и, как следствие, потерял как гены диапазона хозяев, так и гены рецепторов цитокинов. MVA имеет отличные показатели безопасности, поскольку она использовалась для вакцинации более 120 000 человек в конце кампании по ликвидации оспы без каких-либо серьезных побочных эффектов. На людях несколько сотен ВИЧ-отрицательных добровольцев были иммунизированы рекомбинантными MVA, экспрессирующими ряд различных антигенов, без каких-либо серьезных побочных эффектов. Было продемонстрировано, что рекомбинантный MVA, экспрессирующий антиген из Plasmodium falciparum, стимулирует CD4+ и CD8+ Т-клетки у людей. Рекомбинантные MVA в настоящее время проходят клинические испытания для лечения нескольких инфекционных заболеваний, включая ВИЧ, гепатит B и малярию. Важно отметить, что для новой противотуберкулезной вакцины безопасность MVA в качестве вирусного вектора была продемонстрирована на ВИЧ-позитивных пациентах.

Включение БЦЖ в такие гетерологичные режимы первичной иммунизации позволяет сохранить полезные эффекты БЦЖ. Мы разработали стратегию иммунизации с использованием БЦЖ в качестве первичной иммунизации и рекомбинантного MVA (rMVA) в качестве буст-иммунизации. Антиген, выбранный для включения в rMVA, должен присутствовать во всех штаммах БЦЖ. Мы выбрали антиген 85А, который является частью комплекса иммунодоминантного антигена 85. Несмотря на то, что существует множество антигенов-кандидатов для использования в противотуберкулезной вакцине, антиген 85A долгое время считался наиболее предпочтительным. Это основной антиген-мишень, распознаваемый Т-клетками инфицированных людей, и он защищает мелких животных в качестве ДНК-вакцины. Важно отметить, что для использования в режимах бустерной иммунизации БЦЖ Prime-MVA он высоко консервативен среди всех видов микобактерий и присутствует во всех штаммах БЦЖ. У мелких животных он является основной мишенью иммунного ответа, индуцированного БЦЖ, а у людей CD8 T-клетки, ограниченные по HLA-A2, были обнаружены у значительной части иммунизированных БЦЖ лиц. Антиген 85А представляет собой фермент миколилтрансферазу, участвующий в биосинтезе клеточной стенки.

Доклинические данные. Использование этой бустерной дозы БЦЖ Prime-MVA85A у мышей BALB/c индуцирует более высокие уровни антиген-специфического гамма-интерферона (IFN-γ), секретирующих CD4 Т- и CD8+ Т-клетки, и более высокие уровни защиты, чем после введения только БЦЖ. Этот режим был в настоящее время дополнительно оценен в более чувствительной модели аэрозольного заражения морских свинок с очень обнадеживающими результатами. Морские свинки, вакцинированные БЦЖ, а затем MVA85A, а затем дополнительно усиленные вторым рекомбинантным вирусным вектором оспы птиц, экспрессирующим антиген 85A (FP85A), показали значительно большую защиту от заражения, чем морские свинки, вакцинированные одной БЦЖ. Этот режим также является иммуногенным и защитным для макак-резусов.

Клинические исследования Безопасность и иммуногенность этой стратегии буст-вакцинации BCG prime-MVA85A в настоящее время оцениваются в серии небольших исследований фазы I в Великобритании. MVA85A была первой противотуберкулезной вакциной-кандидатом, прошедшей клинические испытания в любой точке мира в сентябре 2002 г., и в настоящее время она является единственной вакциной, проходящей клинические испытания в Африке. Основным иммунологическим показателем, используемым в этих клинических испытаниях, является анализ ex-vivo IFN-γ Elispot, который используется для оценки специфических Т-клеточных ответов на туберкулиновый PPD, комплекс антигена 85 и пулы перекрывающихся пептидов, охватывающих длину антигена 85A. Лучшим иммунологическим коррелятом защиты от мышиного и человеческого ТБ является секреция IFN-γ сенсибилизированными Т-клетками.

В Великобритании 14 здоровых добровольцев, ранее не инфицированных микобактериями и БЦЖ, были вакцинированы 5 x 10^7 БОЕ MVA85A, введенным внутрикожно. Мы обнаружили, что MVA85A безопасен и хорошо переносится. Однократная вакцинация MVA85A индуцирует чрезвычайно высокие уровни специфических эффекторных Т-клеточных ответов (средний ответ IFN-γ Elispot на антиген 85A, суммирующий пептидные пулы, составляет 1153 точки на миллион РВМС). Кроме того, безопасность MVA85A у добровольцев, ранее вакцинированных БЦЖ, в настоящее время продемонстрирована на 17 добровольцах. Эти 17 добровольцев демонстрируют даже более высокие пиковые уровни антигенспецифических Т-клеток (медиана ответа 2455 пятен на миллион РВМС) через 1 неделю после вакцинации, чем у тех, кто был иммунизирован только MVA85A. Возможно, более важно для индукции Т-клеточной памяти то, что добровольцы, ранее вакцинированные БЦЖ, сохраняют более высокие уровни антигенспецифических Т-клеток после вакцинации MVA85A в течение 24 недель после вакцинации по сравнению с добровольцами, вакцинированными только MVA85A. В отличие от этой стимуляции вирусного вектора, величина ответа Т-клеток, наблюдаемая после вакцинации ведущей белково-адъювантной вакциной (против малярии), RTS,S/AS02, составляет около 200 пятен на миллион РВМС.

Эта серия исследований Фазы I также была воспроизведена в Гамбии, и результаты Гамбии столь же многообещающи. В исследованиях как в Великобритании, так и в Гамбии MVA85A индуцирует в 5-10 раз более высокий иммунный ответ, чем любой другой рекомбинантный MVA в клинических испытаниях. Наиболее вероятным объяснением этого является то, что у добровольцев ранее существовал слабый антимикобактериальный иммунитет, вызванный воздействием микобактерий из окружающей среды, и этот специфический антимикобактериальный иммунитет усиливается с помощью MVA85A. У нас есть некоторые предварительные данные, подтверждающие эту гипотезу, и другие группы также обнаружили ранее существовавший иммунитет к микобактериям из окружающей среды у здоровых взрослых британцев. Вакцины, которые хорошо усиливают ранее примированные Т-клеточные ответы, такие как MVA85A, потенциально являются хорошими кандидатами для постэкспозиционной вакцины, предназначенной для усиления иммунного ответа и предотвращения развития заболевания у латентно инфицированных. Если высокие уровни специфических Т-клеток, наблюдаемые после однократной иммунизации MVA85A, объясняются усилением ранее существовавших реакций, индуцированных окружающей средой, то это делает MVA85A чрезвычайно многообещающим кандидатом для бустерной вакцины, вводимой в качестве постконтактной вакцины при латентных инфекциях. инфекционное заболевание.

В следующем исследовании, которое завершилось в Великобритании в феврале 2006 г., оценивали безопасность и иммуногенность MVA85A у здоровых добровольцев, латентно инфицированных M.tb. Двенадцать латентно инфицированных здоровых людей были вакцинированы однократной дозой 5 x 10^7 БОЕ MVA85A. В этом исследовании латентную инфекцию M.tb определяли с помощью туберкулиновой кожной пробы и ответов ex-vivo IFN-γ Elispot на два специфических антигена M.tb, ESAT6 и CFP10. Последующее наблюдение включало подробную рентгенологическую и клиническую оценку безопасности этой вакцины у субъектов, инфицированных M. tb. Мы обнаружили, что MVA85A одинаково безопасен и одинаково иммуногенен в этой латентно инфицированной популяции, как и в популяции, вакцинированной БЦЖ (Sander et al., неопубликованные данные). Мы также провели исследование по определению дозы, рассматривая две дополнительные дозы MVA85A, 1 x 10 ^ 7 pfu и 1 x 10 ^ 8 pfu. Двенадцать субъектов были вакцинированы каждой дозой. Предварительные результаты показывают, что вакцина значительно более иммуногенна при более высокой дозе (1 x 10^8 БОЕ), но иммуногенность более низкой (1 x 10^7 БОЕ) дозы сравнима со стандартной дозой (5 x 10^7 БОЕ). .

Мы только что начали набор в исследование ВИЧ, в котором ВИЧ-инфицированные взрослые, ранее не получавшие антиретровирусные препараты, с числом CD4 более 350 были вакцинированы MVA85A. На сегодняшний день в этом исследовании не было никаких проблем с безопасностью.

MVA85A проходит испытания в серии исследований фазы I и II в провинции Западный Кейп, Южная Африка, где распространенность туберкулеза чрезвычайно высока (годовая заболеваемость ~1%). В августе 2005 года началась регистрация в пробную версию 008, которая продолжалась до июля 2006 года. Были вакцинированы 24 здоровых взрослых, ранее не инфицированных туберкулезом и ВИЧ-инфицированных. Предварительные результаты этой части испытания были представлены в Вене (Hawkridge et al., Вакцины против туберкулеза для всего мира; апрель 2006 г.) и Париже. Было показано, что вакцина безопасна и обладает высокой иммуногенностью. Зачисление в подростковую группу этого исследования началось в ноябре 2006 г., когда стало ясно, что результаты по безопасности на 84-й день у взрослых были удовлетворительными.

Этот протокол представляет собой вторую часть этих исследований по снижению возраста в Южной Африке, которые необходимы, прежде чем мы начнем в 2008 году испытание эффективности фазы IIb с MVA85A в этой популяции.