Um estudo que coleta dados dos participantes e bioescimenses para analisar exossomos patogênicos que mediam o aumento do risco de demência vascular aumentada em indivíduos com herpes zoster. (R01)

Demência vascular: A demência vascular é a segunda forma mais comum de demência após a doença de Alzheimer e é caracterizada amplamente como uma perda de suprimento sanguíneo para o cérebro e a barreira do cérebro sanguíneo (BBB), que leva a um miocárdio e o prejuízo cognitivo. Colaboradores e fatores de risco para o desenvolvimento de demência vascular. Recentemente, os vírus foram identificados como fatores de risco potenciais.

O vírus zoster de varicella (VZV) e a disfunção vascular: VZV é um alphaherpesvírus exclusivamente humano de fita dupla que produz varicela (varicela), então estabelece latência no renda e os neurônios ganglionares sensoriais e autonômicos, com o AGRINPIVENTION, o AGRINPIRATIVENTIVOS ANSOMIVOS EM RETRATIVOS EM RETROSTIVOS EM RETROSTIVOS EM RETROSTIVOS EM RETROSTOS DO RETROSTRIVOS EMOMESSON77. 1 em cada 3 indivíduos para produzir herpes zoster (Hz; telhas) e outras doenças neurológicas com ou sem erupção cutânea.38 Apesar da disponibilidade de duas vacinas Hz, mais de 1 milhão de americanos desenvolvem Hz anualmente.9 Menos conhecido pelo público em geral é a frequência da reativação do VZV sem precisão (Zoster Sine Herpete). Dado que o VZV reative dos neurônios ganglionares em toda a neuroxia, essencialmente todos os órgãos e tecidos, incluindo a vasculatura, são propensos a infecção e doença sem a erupção cutânea de Hz característica e diagnóstica. De fato, prevê -se que, para cada 1 caso de Hz com erupção cutânea, 7 indivíduos reativam com VZV sem erupção cutânea correspondente.39 Além disso, nosso grupo mostrou que os indivíduos ainda podem derramar vírus ativo em sua saliva até 12 anos após a Hz, sugerindo que pelo menos um subconjunto de indivíduos pode ter replicação contínua, apesar de sem erupção cutânea; Neste estudo, 67% dos pacientes ainda tinham vírus ativo em sua saliva pelo menos 3 meses após a corte.40 Assim, o ônus da doença da VZV, particularmente a duração, provavelmente está subestimado grosseiramente.

HZ é reconhecido como um fator de risco de derrame; A Hz aumenta o risco de derrame até 1 ano após a Hz, com risco maior quando a Hz ocorre na distribuição oftalmológica ou em indivíduos <40 anos de idade.41 Especificamente, os dados agrupados de 9 estudos nos EUA, Europa e Ásia mostram que o risco relativo de derrame após Hz foi de 1,78 (IC 95% 1,70-1,88) No primeiro mês seguinte à Hz, caindo progressivamente para 1,20 (IC 95% 1,14-1.26) Após 1 ano.41 O risco de acidente vascular cerebral aumentou em uma margem maior durante o primeiro mês após um episódio de Hz Ophthalmicus: o risco relativo foi de 2,05 (IC 95% 1,82-2.31); E o risco de derrame permaneceu elevado um ano após o episódio agudo. 41 Um estudo retrospectivo recente dos EUA com 23.339 indivíduos com Hz e 46.378 controles, os investigadores descobriram que, durante o período agregado de 8 semanas, os indivíduos com Hz tinham uma probabilidade significativamente maior de sofrer um AVC: taxas de incidência ajustadas para todos os pacientes e pacientes com idades entre 18 e 49 anos foram 1,40 (95%, 0,93-2.11) e 8,12 (IC 95%, 0,93-71,27), respectivamente (p <0,05); risco retornado à linha de base por 1 ano.42 O aumento do risco de acidente vascular cerebral em indivíduos com Hz com <50 anos de idade, em comparação com todos os indivíduos com Hz, é notável porque esses indivíduos não se qualificam para a vacina Hz.

While the mechanisms underlying VZV and vascular disease are not fully elucidated, histological and immunohistochemical studies of VZV-infected arteries, analysis of cerebrospinal fluid (CSF) from VZV vasculopathy patients for cytokines and matrix metalloproteinases (MMPs), and in vitro studies provide some clues to the pathogenesis of disease (reviewed in Nagel and Bubak, 2018) 10. Especificamente, após a reativação do VZV, o vírus viaja ao longo de fibras nervosas que terminam na camada advential mais externa da artéria em que os fibroblastos adventiais infectados pelo vírus provocam uma resposta inflamatória robusta que envolve neutrófilos no início da doença e células T e macrófagos durante todo o curso de doenças. Células infectadas por VZV, neutrófilos e outras células imunes infiltrantes produzem MMPs ativados, que degradam a matriz extracelular potencialmente levando ao enfraquecimento da parede do vaso, formação de aneurisma e ruptura. Fatores solúveis secretados pelas células inflamatórias também foram descritos para contribuir ainda mais para a morte do músculo liso vascular e o acúmulo de miofibroblastos na intima espessada, levando potencialmente à oclusão arterial. No entanto, os "fatores solúveis" não foram caracterizados até recentemente pelo nosso grupo (descrito abaixo).

Papel dos exossomos nos estados da doença: os exossomos circulantes surgiram como importantes "fatores solúveis" que podem afetar as células remotas de seu local de origem. Os exossomos são pequenas vesículas extracelulares (~ 40-200 nm de diâmetro) de origem endossômica que carregam carga (proteínas, ácidos nucleicos etc.) de suas células de origem a células adjacentes ou distais para comunicação durante estados normais e patológicos, regulando processos biológicos e resposta à doença.43 Por exemplo, exossomos derivados de plaquetas, megacariócitos e células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) podem transferir CXCR4 e CCR5 para células que não possuem esses receptores, aumentando assim o número de células suscetíveis para infecção pelo HIV.44,45 Em outros estudos, os exossomos liberados das células de carcinoma nasofaríngeo positivos para EBV contêm a proteína 1 da membrana latente viral e outros fatores virais/celulares que manipulam o microambiente tumoral para melhorar a progressão do tumor e aliviar as respostas imunes às células do tumor.46-50 Além disso, exossomos (e outras vesículas extracelulares) derivadas de:

1. As células de câncer de mama induzem ativação e agregação plaquetárias, contribuindo para a trombose associada ao câncer51; e
2. Os fibroblastos adventuais vasculares do cérebro humano infectados por VZV mediam a disfunção celular endotelial e a transmissão de virions.52 Recentemente, publicamos um estudo piloto mostrando exossomos de plasma patogênicos de pacientes com Hz agudo são protrombóticos e pró -inflamatórios.2 Proteínas específicas que foram significativamente elevadas nos exossomos Hz e envolvidas nas vias de ativação, sinalização e agregação de plaquetas incluíram trombospondina 1 (THBS1), 53,54 proteína associada a caveolae 2 (Cavin-2), 55 Fator de coagulação (F5), 56 e fator de coagulação Xiiiiii-1) (F1). As proteínas da doença do sistema cardiovascular elevadas nos exossomos Hz incluíram calmodulina 1 (calma1) e transtirretina (TTR) (Fig. 1). A calmodulina 1 elevada pode contribuir para o estresse oxidativo associado à morte celular neural após lesão cerebral hipóxica-isquêmica e é um preditor de maus resultados de derrame.58,59 Embora o aumento da transtiretina sérica tenha sido associada a resultados aprimorados de AVC isquêmico, 60 transtirretina também pode oligomerizar e induzir estresse oxidativo, inflamação e toxicidade celular.61,62 De fato, durante a Hz, os fatores de promoção de amilóide estão presentes no plasma, 8 causando potencialmente agregação de aumento da transtiretina circulante à forma oligomérica tóxica nas artérias que lembram a angiopatia amilóide cerebral (CAA).

Link entre demência vascular e VZV: Como descrito acima, o VZV demonstrou ser um agente causador dos fatores de risco acima mencionados (AVC, inflamação vascular, etc.). Além disso, um estudo epidemiológico recente de dois bancos de dados independentes (FINNGEN e UKB) descobriu que a reativação do VZV aumenta significativamente o risco de desenvolver demência vascular em particular (2,33 e 6,22, respectivamente; índices de risco) .13 Uma barreira na aceitação de VZV e vírus em geral ao desenvolvimento de demência vascular e doença de Alzheimer é a falta ou presença inconsistente de antígenos vírus/ácidos nucleicos nos tecidos doentes no momento da morte. Embora isso possa ser potencialmente explicado por um fenômeno "atropelamento e corrida" (o vírus infecta tecidos, causa danos irreversíveis, mas é posteriormente limpo), propomos que exossomos não infecciosos produzidos na periferia (raiz dorsal e gânglios trigerinais) possam contribuir para doenças distantes do local da replicação viral. Os mecanismos em que o VZV contribui diretamente para a patologia da demência vascular na ausência de uma infecção lítica não foi estudada e é o foco desta proposta. Tomados em conjunto, levantamos a hipótese de que os exossomos circulantes durante a Hz e nos meses subsequentes promoverão vasculite e trombose, fornecendo assim uma base mecanicista para o aumento do risco de disfunção vascular anterior à demência vascular.

Significado: existem dados epidemiológicos e correlacionais fortes que ligam VZV e demência, incluindo doenças vasculares e doença de Alzheimer.13,15-20 No entanto, uma escassez de evidências mecanicistas resultou em uma hesitação em vincular causar causar causar -se os dois. Assim, esta proposta visa abordar essa lacuna no conhecimento testando sistematicamente o papel dos exossomos patogênicos e duradouros após a HZ nos processos de doenças vasculares. A descoberta mecanicamente as proteínas/miRNAs de interesse pode potencialmente mudar a prática clínica em relação à duração da terapia antiviral e ao uso de agentes anti-plaquetários para Hz, além de aumentar o suporte à vacinação para evitar erupções cutâneas e mitigar o risco de derrame e demência vascular. Além disso, nossos achados servirão como modelo para como outros patógenos podem ter efeitos duradouros em locais remotos de regiões de infecção e estimular pesquisas adicionais sobre as conseqüências biológicas dos exossomos associados a patógenos.

Inovação e impacto: esta proposta tem várias áreas de inovação. A caracterização longitudinal e a investigação mecanicista dos exossomos circulantes durante o post de Hz e 12 meses:

1. Forneça um entendimento mecanicista ao maior risco de demência e derrame vascular observado epidemiologicamente após a Hz. As contribuições diretas dos vírus para a demência, incluindo demência vascular e doença de Alzheimer, ainda são controversas, dada que a maioria dos dados que ligam os dois são epidemiológicos e correlacionais. Os dados gerados nesta proposta fornecerão informações mecanicistas imparciais sobre como a VFV pode levar diretamente a doenças vasculares, contribuindo com evidências causais necessárias de um fator de risco em estágio inicial ou falta dela.
2. Mudar o gerenciamento clínico. Atualmente, os fatores de risco de AVC e doenças vasculares modificáveis ​​incluem hipertensão, tabagismo, diabetes e hipercolesterolemia. Como esses exossomos patogênicos aumentam o risco de trombose e vasculite, a modificação do fator de risco de acidente vascular cerebral deve incluir a vacinação contra Hz com a vacina de subunidade não-vive (Shingrix). Se ocorrer Hz, a terapia antiviral de maior duração pode ser necessária, conforme determinado por nossos resultados, mostrando o tempo que esses exossomos patogênicos persistem, bem como agentes anti-plaquetários e anti-inflamatórios. Quando disponível, também pode haver um uso para novas terapêuticas que impedem a liberação/fusão do exossomo.
3. Mude o paradigma de doenças infecciosas. Normalmente, assumimos que, uma vez que as características clínicas de um agente infeccioso resolvam (como erupção cutânea da reativação do VZV), seu impacto subsequente na saúde humana é insignificante. A presença de exossomos patogênicos circulando por meses na ausência do agente infeccioso desencadeador sugere que os médicos precisam considerar a história infecciosa remota desde o momento do AVC ou da apresentação de doenças vasculares.
4. Empregue uma nova tecnologia de ponta (Exoview R200) ​​que permitirá a classificação e a caracterização de exossomos únicos para nos ajudar a entender a heterogeneidade da população. Esses resultados, juntamente com o corpo maior de resultados dos 2 objetivos (incluindo dados de sequenciamento de exossomos), fornecerão dados para subsídios futuros para elucidar a função e as células de origem dos subconjuntos de exossomos.

Estudo racional Objetivo 1. Analise o conteúdo de exossomos para proteínas/miRNAs vasculares conhecidas de controle de controle e Hz correspondentes durante um período de 12 meses. Using mass spectrometry and small RNA sequencing, we will quantify abundance and temporal changes of exosomal proteins and miRNAs associated with vascular dysfunction, inflammation, coagulation, and stroke, then correlate analytes with clinical and laboratory features (anti-VZV IgG titers and IgM, complete blood counts, comprehensive metabolic panel, and aPTT/PT/INR). As análises de enriquecimento serão realizadas na rede de proteínas e miRNAs exossômicas para descobrir vias e analitos compartilhados associados a Hz, disfunção vascular e processos neurodegenerativos.

Justificativa: publicamos recentemente que, durante a HZ aguda, os exossomos plasmáticos contêm THBS1 elevados e outras proteínas associadas à disfunção vascular.2 No entanto, a persistência longitudinal dessas proteínas do fator de risco não é conhecida e é imperativa a descobrir os mecanismos que mediam o risco de demência vascular de longo prazo e, finalmente, direcionou terapias intervencionistas além dos tratamentos antivirais. Dado os dados epidemiológicos que correlacionam a reativação da Hz e um aumento no diagnóstico de demência dentro de 5 anos, 15 e mais recentemente, a forte correlação da reativação de Hz e risco de demência vascular, 13 prevemos certas proteínas do fator de risco e miRNAs permanecerão elevados para um ano após a reativação do Hz. A dinâmica temporal das proteínas do fator de risco é uma etapa crítica além dos pontos de tempo agudos, porque, normalmente, seguindo os indivíduos de liberação precipitada não estão mais na terapia antiviral, cuja extensão pode ser uma maneira clinicamente viável e econômica para reduzir o risco.

Objetivo 2. Determine o (s) mecanismo (s) em que os exossomos Hz não infecciosos promovem a disfunção vascular. Plasma exosomes isolated from control and HZ individuals at timepoints above will be applied to human vascular endothelial cells derived from healthy donors or donors with APOE4 allele, then conditioned supernatant analyzed for proinflammatory cytokines (IFN-γ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, e TNF-α) por ELISA multiplex. As células também serão analisadas quanto à geração reativa de espécies de oxigênio (ROS) e deposição de amilóide. Além disso, exporemos as plaquetas de doadores saudáveis ​​aos exossomos de controle e Hz para avaliar a função plaquetária por quantificação de: (1) ativação plaquetária (regulação positiva da p-selectina, αIIBβ3 e fosfatidilserina) por citometria de fluxo; (2) adesão plaquetária e agregação em ensaios de fluxo microfluídico; e (3) retração de plaquetas por ensaios de contração de coágulos. Em seguida, correlacionaremos os resultados do ensaio funcional com as características clínicas e de laboratório (acima), incluindo o desenvolvimento de AVC e outros eventos vasculares nos indivíduos até 12 meses após a Hz. Experimentos de imitação de proteínas específicas, como trombospondina-1, serão realizadas para investigar o mecanismo de patogênese no nível molecular.

Justificativa: propomos investigar os efeitos patogênicos dos exossomos de Hz em três tipos de células integrais à demência vascular, a saber, fibroblastos adventuais vasculares do cérebro (HBVAFs), células endoteliais vasculares (VECs) e plaquetas. Ao fazer isso, pretendemos descobrir os mecanismos subjacentes à evidência epidemiológica de risco elevado de demência vascular induzida por VZV. Em primeiro lugar, sabe -se que os HBVAFs desempenham um papel fundamental nas doenças vasculares e na disfunção, através da produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e citocinas, 76, bem como proliferação e migração da adventícia durante os casos de vasculopatia VZV.10 Nosso estudo preliminar mostrou que os HBVAFs expostos a exossomos plasmáticos de Hz tomados em 3 meses após a HZ induziram a secreção de IL-6 e IL-8, que são os principais reguladores de inflamação e estrutura e função vascular da parede, em comparação com os exossomas do plasma de controle.2 No entanto, a duração desse efeito, outras citocinas e a produção de ERO não foram elucidadas e poderiam desempenhar um papel fundamental na disfunção vascular crônica observada em indivíduos até 12 meses após a Hz. Em segundo lugar, os VECs também são componentes-chave na disfunção vascular observada em casos de demência vascular, com um aumento na produção de ERO e liberação pró-inflamatória de citocinas, bem como uma ruptura em junções apertadas, mediando a integridade da barreira-cérebro do sangue. Além disso, o alelo ApoE4 que transporta os indivíduos correm um risco elevado de desenvolver demência vascular, 67-69 como apoE4 que expressam VECs exibem um estado pró-inflamatório e protrombótico aumentado em comparação com outras isoformas de apoE.77 Portanto, propomos investigar se os efeitos patogênicos dos exossomos de Hz são exacerbados em indivíduos portadores de apoE4, comparando VECs derivados de um portador e não portador de apoE4. Por fim, a demência vascular é caracterizada por uma oclusão do fluxo sanguíneo para o cérebro, com hiperatividade plaquetária observada em pacientes. Nosso estudo anterior revelou que os exossomos de Hz durante a ativação de plaquetas induzidos por Hz aguda e agregações de plaquetas-leucócitos. No entanto, a duração desse efeito é desconhecida e será testada até 12 meses após a Hz, com e sem agentes anti-plaquetários usados ​​clinicamente. A descoberta de um impacto duradouro do exossomo Hz na ativação de plaquetas e o efeito mitigador correspondente dos medicamentos anti-plaquetários pode representar uma intervenção terapêutica clinicamente viável.

Relatórios anteriores descreveram um papel pró-inflamatório para THBS1 em exossomos quando expostos a macrófagos.78 Nosso estudo piloto e dados preliminares mostram um aumento robusto no THSB1 em exossomos de pacientes com HZ, mas não controla.8 Portanto, para testar se a carga elevada de THBS1 nos exossomos de Hz é responsável pelo aumento da liberação de citocinas e produção de ERO, realizaremos os experimentos de exposição ao HBVAF e VEC na presença e ausência de um inibidor de THBS1, LSKL. Além disso, o THBS1 é um potente ativador do TGFB1 e a superprodução de TGFB1 é observada na doença de Alzheimer e vascular e induz amiloidose cerebrovascular.79-81 Portanto, o inibidor do THBS1 também será usado nos ensaios de deposição amilóide para avaliar a formação amilóide mediada por exossomos e thbs1 em células vasculares.

Desenho do estudo Este estudo é um estudo não intervencional/observacional que coleta dados dos participantes e bioscimenses, a fim de analisar o conteúdo de exossomos para proteínas/miRNAs de danificação vascular conhecida em indivíduos Hz durante um período de 12 meses (6 visitas) em comparação com o grupo controle (uma visita).

Objetivo 1. Analise o conteúdo de exossomos para proteínas/miRNAs vasculares vasculares conhecidos de indivíduos de controle correspondentes e Hz durante um período de 12 meses.

Resultados e interpretações antecipados: Com base em nossos resultados preliminares e publicados do estudo piloto, esperamos medir um aumento significativo nas proteínas do exossomo associadas à trombose e doenças vasculares ("proteínas do fator de risco"), incluindo THBS1, Cavin-2, F5, f13A1, calma1 e transtyretina (TTTR) na plasma, a obtenção de exposições obtidas obtidas em hemonsomos, a partir de indivíduos que são obtidos de f13A1, e transtyretina (TTTR). Além disso, esperamos que essas proteínas exossômicas em indivíduos com HZ permaneçam em níveis semelhantes durante a visita inicial e 7 dias depois, porque os pacientes estariam na terapia antiviral; Então, aos 1 e 3 meses, esperamos um aumento nessas proteínas em um subconjunto de indivíduos que ainda têm replicação viral em andamento que foi apenas desacelerada com antivirais; Esses indivíduos teriam títulos de IgG VZV que não diminuíram desde a visita inicial (os títulos decrescentes da IgG VZV refletem a resolução produtiva de infecção por VZV e o retorno do vírus à latência), aumentando os títulos de IgG VZV desde a visita inicial ou o IGM VZV persistente ou a conversão do VZV IGM de negativo para positivo. Em outras palavras, prevemos que os níveis de IgG VZV corresponderão a essas elevações nas proteínas de interesse em um subconjunto de indivíduos com Hz, sugerindo replicação viral em andamento sem erupção cutânea em determinados pacientes. De fato, nosso grupo relatou anteriormente o derramamento persistente de VZV na saliva de 67% dos indivíduos Hz de 3 meses a 12 anos após Hz sem a presença de uma erupção cutânea.56 Assim, as elevações das proteínas do fator de risco exossômico em indivíduos com Hz podem ser devidas ao desligamento incompleto do vírus. Esperamos que essas proteínas do fator de risco atinjam aproximadamente 3 meses após a Hz e depois diminua de 6 e 12 meses após a Hz, porque um estudo de vasculopatia VZV que os indivíduos mostraram que o tempo médio de Hz a derrame é de aproximadamente 4 meses.57 Além disso, dado que o risco de acidente vascular cerebral é mais alto para indivíduos com HZO, 10 esperamos que os exossomos de indivíduos com HZO tenham o mais alto nível de proteínas fatoriais de risco entre todos os indivíduos com Hz. Conforme previsto em nossos estudos preliminares, não esperamos encontrar proteínas ou citocinas virais nos exossomos de controle e Hz.

No que diz respeito ao sequenciamento de RNA dos exossomos de Hz, não esperamos ver transcritos virais porque o DNA e o RNA VZV raramente são detectados durante Hz (comunicações pessoais, professor Ravi Mahalingam). Esperamos detectar alterações nos miRNAs implicados em doenças cerebro e cardiovasculares, como o miR-221 e o miR-222, que estão elevadas em indivíduos com doenças vasculares, 73 miR-143, que é um importante mediador do leme-vascular pulmonar. Curiosamente, um estudo preliminar em nosso laboratório mostrou a elevação significativa desses miRNAs nos exossomos de neurônios sensoriais infectados por VZV em comparação aos exossomos de neurônios infectados por simulação (Fig. 2). Finalmente, esperamos que o APOE4 carregando indivíduos que tenham as proteínas/miRNAs do fator de risco mais robustos e persistentes em seus exossomos circulantes, dado o apoE4, é um fator de risco conhecido para demência vascular.67-69

Objetivo 2. Determine o (s) mecanismo (s) em que os exossomos Hz não infecciosos promovem a disfunção vascular.

Resultados e interpretações antecipadas: Nossos estudos piloto de citocinas mostraram um aumento na produção de IL-6 e IL-8 a partir de HBVAFs (que são os principais reguladores de inflamação e estrutura e função da parede vascular) após a exposição aos exossomos Hz em comparação aos controles (Fig. 3) .2 Prevemos que isso continuará sendo o caso com um tamanho de amostra maior e ocorrer nos VECs. Nossa hipótese é essas citocinas e a produção de ERO atingirá o pico nos pontos de tempo de 1 e 3 meses. Para a maioria dos indivíduos, levantamos a capacidade de induzir inflamação e ERO em células ingênuas diminuirá em 12 meses após a HZ; no entanto, o APOE4 portador de VECs provavelmente permanecerá hiper-inflamatório. Também realizamos este ensaio usando exossomos derivados de neurônios sensoriais humanos infectados com simulação ou VZV in vitro. Comparados aos exossomos simulados, os exossomos condicionados à VZV (que não são infecciosos) se aplicaram a HBVAFs ingênuos aumentaram significativamente a secreção de IL-6, IL-8 e IL-1β; Portanto, suspeitamos que os exossomos que desencadeiam a produção de citocinas inflamatórias se originam das células infectadas por VZV. Dado que vemos uma elevação prolongada de exossomos de Hz contendo proteínas fatoriais de risco elevadas e esses exossomos de Hz ainda podem induzir IL-6 e IL-8 aos 3 meses após a HZ2, sugere que há replicação viral em andamento em (um subconjunto ou todos) pacientes com Hz bem após a queda. Como observado acima, nosso grupo mostrou derramamento ativo de VZV na saliva dos pacientes com Hz até 12 anos após a depuração da erupção cutânea.40 Também prevemos observar a deposição de amilóide em células expostas aos exossomos de Hz, mas não controles e que esse efeito será mais proeminente no ApoE4 portador de VECs. Finalmente, a coloração imunofluorescente provavelmente mostrará uma redução na coloração de junção rígida em VECs expostos de Hz indicativos de uma interrupção da integridade da barreira-cérebro do sangue. Acreditamos que os processos patogênicos são devidos, em parte, à carga elevada de THBS1 nos exossomos Hz e que o bloqueio da atividade do THBS1 atenuará esses efeitos.

Com base em nosso estudo piloto, 2 prevemos ver um aumento na ativação de plaquetas, medido por um aumento nas plaquetas que expressam p-selectina e fosfatidilserina após a exposição a exossomos de Hz, mas não controlam exossomos. Além disso, prevemos que esse padrão de ativação ainda será proeminente no ponto de três meses, indicativo de um risco sustentado de derrame, consistente com dados epidemiológicos; É provável que a exposição ao exossomo de 20% das amostras de Hz tenha um padrão de ativação mais pronunciado que 10%. Esperamos que o padrão de ativação 12 meses após a Hz seja diminuído e não seja significativamente diferente dos exossomos de controle. Da mesma forma, prevemos ver um aumento na taxa e quantidade de acúmulo de plaquetas e fibrinas nos modelos microfluídicos de plaquetas expostos a exossomos de Hz em comparação com as plaquetas expostas aos exossomos de controle. Esperamos que o inibidor do CD36 atenue os efeitos induzidos pelo exossomo da Hz na função plaquetária, que fornecerá fortes evidências mecanicistas. Usando múltiplas metodologias para testar a ativação, agregação e função plaquetárias, bem como a indução de citocinas pró -inflamatórias, ROS e produção amilóide por HBVAFs e VECs, geraremos um perfil funcional abrangente para exossomos HZ em vários pontos de tempo em toda a doença. Os resultados desses estudos terão implicações críticas para a prática clínica e como pensamos na reativação do VZV em geral. Especificamente, se os exossomos de Hz mostrarem patologicamente ativos e conferem um risco funcional aumentado de acidente vascular cerebral e disfunção vascular, como sugerem nossos dados preliminares, são necessários tratamento antiviral mais longo e/ou terapias anti-plaquetárias. Finalmente, é provável que identifiquem proteínas específicas nos exossomos por meio de espectrometria de massa (no objetivo 1) que se correlacionará com os ensaios funcionais/mecanicistas propostos no objetivo 2. Isso pode fornecer mais alvos intervencionistas terapêuticos e dados preliminares para futuras experiências de queda.