Лечение эритропоэтином и познание во время гипогликемии

Экспериментальный протокол За 6 дней до гипогликемического клэмпа испытуемые посетили клинику, и была собрана информация о демографии, образе жизни и клинических характеристиках. Было проведено физикальное обследование с акцентом на возможную тромбоэмболическую болезнь. Артериальное давление измеряли дважды после 10-минутного отдыха в положении сидя. Оценивали показатели периферической и автономной невропатии и визуально оценивали электрокардиограмму (ЭКГ) в 12 отведениях. Состояние осознания гипогликемии классифицировали в соответствии с Pedersen-Bjergaard et al. [22]. В анкете регистрировали частоту эпизодов легкой и тяжелой гипогликемии за предшествующую неделю. Установлен датчик непрерывного мониторинга глюкозы (НГМ) (Guardian® REAL-time, Medtronic Minimed, Northridge, США). После этого субъект был повторно введен в экспериментальный протокол, и когнитивные тесты были обучены дважды, чтобы избежать эффекта обучения во время экспериментов. Наконец, исследуемое лекарство вводили внутривенно в течение четырех минут. Субъектам было дано указание жить и питаться, как раньше, избегать любых изнурительных упражнений, употребления алкоголя и психотропных препаратов в течение следующей недели. Калибровка НГМ проводилась пациентом с помощью глюкометра CONTOUR® LINK (Bayer Health Care, Леверкузен, Германия).

За 3 дня до эксперимента Вставили новый датчик CGM и включили сигнализацию гипогликемии. Поскольку значение глюкозы CGM отстает приблизительно на 10 минут по сравнению с глюкозой плазмы, точка тревоги была установлена ​​на уровне 4,5 ммоль/л. Профили глюкозы CGM за последние три дня были загружены, чтобы проверить, следует ли внести какие-либо изменения дозировки инсулина для снижения риска гипогликемии до проведения эксперимента через 3 дня. Наконец, испытуемые снова прошли тесты на когнитивные функции.

День эксперимента Испытуемые прибыли в лабораторию в 8.00 после ночного голодания. Данные из CGM были загружены. Если гипогликемия, определяемая не менее чем двумя последовательными значениями НГМ ниже 3,5 ммоль/л или одним самоконтролируемым значением глюкозы крови ниже 3,5 ммоль/л, имела место в течение предшествующей ночи, эксперимент откладывался не менее чем на 14 дней. Так было однажды. CGM трижды предупреждал участников о снижении уровня глюкозы в крови в течение ночи перед экспериментом, прежде чем это действительно произошло. В этих случаях участникам давали стандартную порцию из 10 граммов глюкозы и 35 граммов черного хлеба. Ни у одного участника в течение ночи перед экспериментом не было глюкозы CGM > 20 ммоль/л.

Субъект был введен в экспериментальную обстановку и был оснащен следующим образом: 1) Одна переднелоктевая внутривенная линия для инфузии инсулина и глюкозы и одна линия как можно более дистально для забора крови. После этого кисть и предплечье помещали на нагревательные подушки и под них для артериализации венозной крови; 2) шапочка ЭЭГ (электроэнцефалография), два референса мочки уха и два прекардиальных отведения ЭКГ, подключенные к цифровому регистратору ЭЭГ (Cadwell, Kennewick, Вашингтон, США); 3) автоматический прибор для измерения артериального давления (UA787, A&D Medical, Абингдон, Великобритания). Впоследствии испытуемые прошли когнитивные тесты.

Эксперимент проводили циклически, всего три одинаковых цикла: базовый цикл (эугликемия), гипогликемический цикл и восстановительный цикл (эугликемия). В начале каждого цикла забирали артериализованную венозную кровь. Затем оценивали симптомы гипогликемии с последующим измерением артериального давления и частоты пульса. После этого оценка когнитивных функций проводилась с помощью Калифорнийского пакета когнитивной оценки (CALCAP), теста для создания следов и теста Струпа. Все когнитивные тесты проводились в одинаковой последовательности одним и тем же человеком (PLK). В конце каждого цикла проводилась 5-минутная запись ЭЭГ с закрытыми глазами. Наконец, снова брали артериализованную венозную кровь.

Процедура гипогликемического клэмпа Человеческий инсулин короткого действия (Actrapid®, Novo Nordisk, Bagsværd, Дания), смешанный с гепаринизированной плазмой пациента и изотоническим раствором, вводили инфузией со скоростью 1,0 мЕД x кг массы тела-1 x мин-1. Глюкозу капиллярной крови измеряли у постели больного каждые 5 минут и регулировали инфузией 20% глюкозы. Целевой уровень гипогликемии составлял 2,0–2,2 ммоль/л. Во время эугликемических циклов целевым значением было 5,0 ммоль/л.

Оценка симптомов гипогликемии Симптомы гипогликемии оценивались по Эдинбургской шкале гипогликемии, которая представляет собой опросник, разработанный для экспериментально индуцированной гипогликемии, в котором испытуемые должны указать тяжесть 13 заранее определенных симптомов гипогликемии по шкале от одного до семи [23].

Когнитивные функциональные тесты Калифорнийский пакет когнитивной оценки (CALCAP) Датская версия теста Mini CALCAP (Э. Н. Миллер, Калифорнийский пакет когнитивной оценки, Norland Software, Лос-Анджелес, 1990 г.) выполняется на экране компьютера и состоит из двух разных заданий на время реакции с разными сложности: 1) задание на реакцию выбора (РТ1) с реакцией на конкретное число (семь) и 2) задание на реакцию выбора (РТ2) с реакцией на два одинаковых числа в последовательности (сдвигающиеся числа). Последний тест представляет собой задачу с 1 спиной и включает в себя использование устойчивого внимания/рабочей памяти.

Тест следообразования Тест следообразования представляет собой тест на внимание и исполнительную функцию [24]. Мы использовали 5-й след Комплексного теста по созданию следов (Pro-ed, Остин, Техас, США), который организован так же, как и оригинальный тест по созданию следов, часть B, разработанный в 1949 г., с добавлением отвлекающих кругов [24]. В этом тесте испытуемый должен соединить обведенные цифры и буквы в чередующейся последовательности (например, 1-А-2-В-3-В…). Время окончания теста измерялось в секундах.

Цветовой и словесный тест Струпа Этот тест измеряет избирательное внимание и когнитивную гибкость [25]. Датская версия стандартизированной версии Golden [26] использовалась в соответствии с руководством по тестированию. Тест состоит из трех страниц, каждая из которых содержит 100 заданий, представленных в 5 столбцах. На первой странице слова «красный», «зеленый» и «синий» напечатаны черным цветом и расположены в случайном порядке. На второй странице «XXXX» напечатано красным, зеленым или синим цветом и расположено случайным образом. На последней странице слова со страницы слов печатаются не совпадающими цветами с цветной страницы. На первой и второй странице испытуемый должен громко прочитать цвет предметов. На странице слова-цвета испытуемый должен прочитать цвет чернил для каждого элемента. Записывается количество элементов в течение 45-секундного периода. Представлены сырые баллы.

Нейрофизиологические тесты Электроэнцефалография (ЭЭГ) Нейрофизиолог, специализирующийся на клиническом чтении ЭЭГ (ТВК), проанализировал данные ЭЭГ. Регистрировали непрерывную 20-канальную ЭЭГ. Данные были отфильтрованы фильтром нижних частот первого порядка 0,53 Гц и фильтром верхних частот первого порядка 70 Гц. Все данные были визуально проверены в связанном эталонном монтаже мочки уха. Для каждого субъекта электрод, дающий наилучшее представление доминирующей активности, был выбран для спектрального анализа мощности, который выполнялся с использованием быстрого преобразования Фурье (БПФ) на периодах 2,5 с (что дает разрешение 0,4 Гц в спектре мощности БПФ). Если пик в спектре мощности можно было идентифицировать в диапазоне 4-13 Гц, он выделялся как репрезентативный для доминирующей частоты.