Behandling med erytropoietin og kognition under hypoglykæmi

Eksperimentel protokol 6 dage før forsøgspersoner med hypoglykæmisk klemme deltog i klinikken, og information om demografi, livsstil og kliniske karakteristika blev indsamlet. Der blev foretaget en fysisk undersøgelse med fokus på mulig tromboembolisk sygdom. Blodtrykket blev målt to gange efter 10 minutters hvile i siddende stilling. Mål for perifer og autonom neuropati blev vurderet, og et 12-aflednings elektrokardiogram (EKG) blev visuelt vurderet. Bevidstheden om hypoglykæmi blev klassificeret ifølge Pedersen-Bjergaard et al. [22]. Hyppigheden af ​​episoder med mild og svær hypoglykæmi i den foregående uge blev registreret i et spørgeskema. En sensor til kontinuerlig glukoseovervågning (CGM) blev monteret (Guardian® REAL-time, Medtronic Minimed, Northridge, USA). Herefter blev forsøgspersonen genintroduceret til den eksperimentelle protokol, og kognitive tests blev trænet to gange for at undgå en indlæringseffekt under forsøgene. Til sidst blev undersøgelsesmedicin injiceret intravenøst ​​over fire minutter. Forsøgspersonerne blev instrueret i at leve og spise, som de plejede at gøre, for at undgå streng motion, brug af alkohol og psykoaktive stoffer i den næste uge. Kalibrering af CGM blev udført af patienten med blodsukkermåleren CONTOUR® LINK (Bayer Health Care, Leverkusen, Tyskland).

3 dage før forsøg En ny CGM-sensor blev indsat, og en hypoglykæmi-alarm blev aktiveret. Fordi CGM-glukoseværdien er forsinket ca. 10 minutter sammenlignet med plasmaglukose, blev alarmpunktet sat til 4,5 mmol/l. CGM-glukoseprofiler for de sidste tre dage blev downloadet for at kontrollere, om der skulle foretages ændringer i insulindosis for at mindske risikoen for hypoglykæmi indtil eksperimentet 3 dage senere. Til sidst trænede forsøgspersonerne de kognitive funktionstests igen.

Forsøgsdag. Forsøgspersonerne ankom kl. 8.00 til laboratoriet efter en nats faste. Data fra CGM blev downloadet. Hvis hypoglykæmi, defineret ved mindst to på hinanden følgende CGM-værdier under 3,5 mmol/l eller én selvovervåget blodsukkerværdi under 3,5 mmol/l, var opstået i løbet af den foregående nat, blev forsøget udsat i mindst 14 dage. Dette var tilfældet ved en lejlighed. CGM advarede deltagerne om faldende blodsukker i løbet af natten før eksperimentet ved tre lejligheder, før det rent faktisk fandt sted. I disse tilfælde blev deltagerne instrueret i at spise et standardiseret måltid på 10 gram glucose og 35 g mørkt brød. Ingen deltagere havde en CGM-glukose > 20 mmol/l natten før forsøgene.

Individet blev introduceret til forsøgsmiljøet og var udstyret som følger: 1) En antecubital intravenøs slange til infusion af insulin og glucose og en linje så distalt som muligt til blodprøvetagning. Derefter blev hånden og armen anbragt på og under opvarmede puder for at arterialisere venøst ​​blod; 2) EEG-hætte (elektroencefalografi), to øreflipreferencer og to prækordiale EKG-ledninger forbundet til en digital EEG-optager (Cadwell, Kennewick, Washington, USA); 3) en automatisk blodtryksenhed (UA787, A&D Medical, Abingdon, UK). Efterfølgende trænede forsøgspersoner de kognitive tests.

Forsøget blev udført på en cyklisk måde med i alt tre identiske cyklusser: En baseline-cyklus (euglykæmi), en hypoglykæmisk cyklus og en restitutionscyklus (euglykæmi). I starten af ​​hver cyklus blev der udtaget arterialiseret veneblod. Efterfølgende blev hypoglykæmiske symptomer vurderet efterfulgt af måling af blodtryk og puls. Herefter blev evaluering af kognitiv funktion udført med California Cognitive Assessment Package (CALCAP), en sporfremstillingstest og Stroop-testen. Alle kognitive tests blev udført i samme sekvens af den samme person (PLK). Ved afslutningen af ​​hver cyklus blev 5 minutters EEG-optagelse udført med lukkede øjne. Til sidst blev arterialiseret venøst ​​blod udtaget igen.

Hypoglykæmisk klemmeprocedure Korttidsvirkende human insulin (Actrapid®, Novo Nordisk, Bagsværd, Danmark) blandet med hepariniseret plasma fra patienten og isotonisk saltvand blev infunderet med en hastighed på 1,0 mU x kg kropsvægt - 1 x min-1. Kapillært blodsukker blev målt ved sengekanten hvert 5. minut og justeret med en variabel infusion af 20 % glucose. Det hypoglykæmiske mål var 2,0 - 2,2 mmol/l. Under de euglykæmiske cyklusser var målet 5,0 mmol/l.

Scoring af hypoglykæmisymptomer Hypoglykæmiske symptomer blev vurderet af Edinburgh Hypoglykæmi-skalaen, som er et spørgeskema udviklet til eksperimentelt induceret hypoglykæmi, hvor forsøgspersoner skal angive sværhedsgraden af ​​13 foruddefinerede hypoglykæmiske symptomer på en skala fra et til syv [23].

Kognitive funktionstests California Cognitive Assessment Package (CALCAP) Den danske version af Mini CALCAP-testen (E.N Miller, California Cognitive Assessment Package, Norland Software, Los Angeles, 1990) kører på en computerskærm og består af to forskellige reaktionstidsopgaver med forskellige kompleksitet: 1) en valgreaktionsopgave (RT1) med reaktion på et bestemt tal (syv) og 2) en valgreaktionsopgave (RT2) med reaktion på to identiske tal i en sekvens (skiftende tal). Sidstnævnte test er en 1-back opgave og omfatter brug af vedvarende opmærksomhed/arbejdshukommelse.

Trail making test Trail making test er en test opmærksomhed og udøvende funktion [24]. Vi brugte spor 5 af Comprehensive Trail-Making Test (Pro-ed, Austin, Texas, USA), som er organiseret som den originale sporfremstillingstest, del B, udviklet i 1949, og tilføjede distraherende cirkler [24]. I denne test skal forsøgspersonen forbinde indkredsede tal og bogstaver i skiftende rækkefølge (f. 1-A-2-B-3-C...). Tiden til at afslutte testen blev målt i sekunder.

Stroop Color og Word Test Denne test måler selektiv opmærksomhed og kognitiv fleksibilitet [25]. En dansk version af den standardiserede version af Golden [26] blev brugt ifølge testmanualen. Testen består af tre sider, der hver har 100 emner præsenteret i 5 kolonner. På første side er ordene "rød", "grøn" og "blå" trykt i sort og arrangeret tilfældigt. På den anden side er "XXXX" trykt i rød, grøn eller blå og arrangeret tilfældigt. På den sidste side udskrives ord fra ordsiden i ikke-matchende farver fra farvesiden. På første og anden side skal emnet læse farven på emnerne højt. På ord-farve-siden skal emnet læse farven på blækket for hvert emne. Antal genstande i løbet af en 45 sekunders periode registreres. Rå scores præsenteres.

Neurofysiologiske tests Elektroencefalografi (EEG) En neurofysiolog med speciale i klinisk EEG-aflæsning (TWK) analyserede EEG-dataene. Kontinuerlig 20-kanals EEG blev registreret. Data blev filtreret ved hjælp af et første ordens 0,53 Hz low cut filter og et første ordens 70 Hz high cut filter. Alle data blev visuelt inspiceret i en sammenkædet øreflip-referencemontage. For hvert individ blev elektroden, der gav den bedste repræsentation af den dominerende aktivitet, valgt til effektspektralanalyse, som blev udført ved hjælp af hurtig fourier-transformation (FFT) på 2,5 sek epoker (giver 0,4 Hz opløsning i FFT-effektspektret). Hvis en top i effektspektret kunne identificeres i området 4-13 Hz, blev den udtrukket som repræsentativ for den dominerende frekvens.