Tratamiento con eritropoyetina y cognición durante la hipoglucemia

Protocolo experimental 6 días antes de que los sujetos con pinza hipoglucémica asistieran a la clínica, y se recopiló información sobre demografía, estilo de vida y características clínicas. Se realizó un examen físico con foco en posible enfermedad tromboembólica. La presión arterial se midió dos veces después de 10 minutos de descanso en una posición sentada. Se evaluaron las medidas de neuropatía periférica y autonómica y se evaluó visualmente un electrocardiograma (ECG) de 12 derivaciones. El estado de conciencia de la hipoglucemia se clasificó según Pedersen-Bjergaard et al [22]. Las frecuencias de los episodios de hipoglucemia leve y grave en la semana anterior se registraron en un cuestionario. Se montó un sensor para monitorización continua de glucosa (MCG) (Guardian® REAL-time, Medtronic Minimed, Northridge, EE. UU.). A continuación, se reintrodujo al sujeto en el protocolo experimental y se entrenaron dos veces las pruebas cognitivas para evitar un efecto de aprendizaje durante los experimentos. Finalmente, la medicación del estudio se inyectó por vía intravenosa durante cuatro minutos. Los sujetos recibieron instrucciones de vivir y comer como solían hacerlo, para evitar cualquier ejercicio riguroso, uso de alcohol y drogas psicoactivas, durante la próxima semana. La calibración del CGM fue realizada por el paciente con el medidor de glucosa en sangre CONTOUR® LINK (Bayer Health Care, Leverkusen, Alemania).

3 días antes del experimento Se insertó un nuevo sensor CGM y se activó una alarma de hipoglucemia. Dado que el valor de glucosa de la MCG se retrasa aproximadamente 10 min en comparación con la glucosa plasmática, el punto de alarma se fijó en 4,5 mmol/l. Se descargaron los perfiles de glucosa de CGM de los últimos tres días para verificar si se deben realizar cambios en la dosis de insulina para disminuir el riesgo de hipoglucemia hasta el experimento 3 días después. Finalmente, los sujetos entrenaron nuevamente las pruebas de función cognitiva.

Día del experimento Los sujetos llegaron a las 8:00 a. m. al laboratorio después de una noche de ayuno. Se descargaron los datos del CGM. Si durante la noche anterior se había producido hipoglucemia, definida por al menos dos valores de CGM consecutivos por debajo de 3,5 mmol/l o un valor de glucosa en sangre autocontrolado por debajo de 3,5 mmol/l, el experimento se posponía durante al menos 14 días. Así fue en una ocasión. CGM advirtió a los participantes sobre la disminución de la glucosa en sangre durante la noche anterior al experimento en tres ocasiones antes de que realmente ocurriera. En estos casos, se instruyó a los participantes para que comieran una comida estandarizada de 10 gramos de glucosa y 35 g de pan negro. Ningún participante tuvo una glucosa CGM > 20 mmol/l durante la noche anterior a los experimentos.

Se introdujo al sujeto en el entorno experimental y se equipó de la siguiente manera: 1) Una vía intravenosa antecubital para la infusión de insulina y glucosa y una vía lo más distal posible para la toma de muestras de sangre. Posteriormente, la mano y el brazo se colocaron sobre y debajo de almohadillas calientes para arterializar la sangre venosa; 2) gorro de EEG (electroencefalografía), dos referencias de lóbulo de la oreja y dos derivaciones de ECG precordiales conectadas a un registrador de EEG digital (Cadwell, Kennewick, Washington, EE. UU.); 3) una unidad de presión arterial automática (UA787, A&D Medical, Abingdon, Reino Unido). Posteriormente, los sujetos entrenaron las pruebas cognitivas.

El experimento se realizó de forma cíclica con un total de tres ciclos idénticos: un ciclo de referencia (euglucemia), un ciclo de hipoglucemia y un ciclo de recuperación (euglucemia). Al inicio de cada ciclo se extrajo sangre venosa arterializada. Posteriormente, se evaluaron los síntomas de hipoglucemia seguido de la medición de la presión arterial y la frecuencia del pulso. De aquí en adelante, la evaluación de la función cognitiva se realizó con el Paquete de Evaluación Cognitiva de California (CALCAP), una prueba de creación de senderos y la prueba de Stroop. Todas las pruebas cognitivas se realizaron en la misma secuencia por la misma persona (PLK). Al final de cada ciclo, se realizaron 5 min de registro de EEG con los ojos cerrados. Finalmente, se volvió a extraer sangre venosa arterializada.

Procedimiento de pinzamiento hipoglucémico Se infundió insulina humana de acción corta (Actrapid®, Novo Nordisk, Bagsværd, Dinamarca) mezclada con plasma heparinizado del paciente y solución salina isotónica a una velocidad de 1,0 mU x kg de peso corporal-1 x min-1. La glucemia capilar se midió al lado de la cama cada 5 min y se ajustó con una infusión variable de glucosa al 20%. El objetivo de hipoglucemia fue de 2,0 - 2,2 mmol/l. Durante los ciclos euglucémicos el objetivo fue de 5,0 mmol/l.

Puntuación de los síntomas de hipoglucemia Los síntomas de hipoglucemia se evaluaron mediante la Escala de hipoglucemia de Edimburgo, que es un cuestionario desarrollado para la hipoglucemia inducida experimentalmente en el que los sujetos deben indicar la gravedad de 13 síntomas de hipoglucemia predefinidos en una escala del uno al siete [23].

Pruebas de función cognitiva Paquete de Evaluación Cognitiva de California (CALCAP) La versión danesa de la prueba Mini CALCAP (E.N Miller, Paquete de Evaluación Cognitiva de California, Norland Software, Los Ángeles, 1990) se ejecuta en una pantalla de computadora y consta de dos tareas de tiempo de reacción diferentes con diferentes complejidad: 1) una tarea de reacción de elección (RT1) con reacción a un número específico (siete) y 2) una tarea de reacción de elección (RT2) con reacción a dos números idénticos en una secuencia (números cambiantes). La última prueba es una tarea de 1 vuelta e incluye el uso de atención sostenida/memoria de trabajo.

Prueba de creación de senderos La prueba de creación de senderos es una prueba de atención y función ejecutiva [24]. Usamos la ruta 5 de la Prueba Integral de Creación de Rutas (Pro-ed, Austin, Texas, EE. UU.), que está organizada como la prueba original de creación de rutas, parte B, desarrollada en 1949, y agregamos círculos de distracción [24]. En esta prueba, el sujeto debe conectar números y letras dentro de un círculo en secuencia alterna (p. 1-A-2-B-3-C…). El tiempo para terminar la prueba se midió en segundos.

Test de colores y palabras de Stroop Este test mide la atención selectiva y la flexibilidad cognitiva [25]. Se utilizó una versión danesa de la versión estandarizada de Golden [26] de acuerdo con el manual de prueba. La prueba consta de tres páginas, cada una con 100 elementos presentados en 5 columnas. En la primera página, las palabras "rojo", "verde" y "azul" están impresas en negro y dispuestas al azar. En la segunda página, "XXXX" está impreso en rojo, verde o azul y está dispuesto al azar. En la última página, las palabras de la página de palabras se imprimen en colores que no coinciden con los de la página en color. En la primera y segunda página, se supone que el sujeto debe leer en voz alta el color de los elementos. En la palabra-color-página el sujeto debe leer el color de la tinta para cada elemento. Se registra el número de artículos durante un período de 45 segundos. Se presentan puntajes brutos.

Pruebas neurofisiológicas Electroencefalografía (EEG) Un neurofisiólogo especializado en lectura clínica de EEG (TWK) analizó los datos del EEG. Se registró EEG continuo de 20 canales. Los datos se filtraron mediante un filtro de corte bajo de 0,53 Hz de primer orden y un filtro de corte alto de 70 Hz de primer orden. Todos los datos se inspeccionaron visualmente en un montaje de referencia vinculado al lóbulo de la oreja. Para cada sujeto, se eligió el electrodo que brindaba la mejor representación de la actividad dominante para el análisis espectral de potencia, que se realizó mediante la transformación rápida de Fourier (FFT) en épocas de 2,5 segundos (dando una resolución de 0,4 Hz en el espectro de potencia de la FFT). Si se podía identificar un pico en el espectro de potencia en el rango de 4 a 13 Hz, se extraía como representativo de la frecuencia dominante.