Эндотоксин-индуцированные воспалительные и поведенческие реакции и предикторы индивидуальных различий

Дизайн исследования

Двадцать пять субъектов будут включены в настоящее исследование, которое будет следовать проспективному, плацебо-контролируемому и перекрестному дизайну. Участники будут ослеплены, как и исследовательский персонал, отвечающий за участников и лабораторию.

Субъекты будут случайным образом распределены в перекрестном дизайне с двумя испытаниями с примерно четырехнедельным перерывом между стимуляциями LPS:

1. Испытание 1: эндотоксин. Субъекты получат внутривенную инъекцию эндотоксина в дозе 2 нг/кг массы тела.
2. Испытание 2: плацебо. Субъекты получат внутривенную инъекцию хлорида натрия в качестве плацебо инъекции эндотоксина.

Десять других здоровых добровольцев будут набраны в пилотном исследовании до начала основного исследования, чтобы проверить поведенческие задачи, которые будут использоваться. Эти предметы будут набираться среди сотрудников университета или среди студентов университета. Они будут выполнять четыре конкретных поведенческих задания и заполнять анкеты, оценивающие психологические и поведенческие переменные, чтобы связать результаты поведенческих заданий с психологическими и субъективными поведенческими оценками. У участников пилотного исследования не будут браться биологические образцы (кровь, моча или образцы футболок).

Уход

LPS предоставляется LGC Promochem AB, Albanoliden 5, 4tr, 506 30 Borås, Швеция. Эндотоксин USP (Фармакопейная конвенция США) (кат. № 1235503) выпускается в виде лиофилизированного (сублимированного) порошка, и каждый флакон содержит 10 000 единиц эндотоксина USP. Каждый флакон содержит примерно 1 микрограмм эндотоксина и смешивается с 5 миллилитрами (мл) стерильной воды.

Процедура исследования

Исследование будет проводиться в отделении клинических наук больницы Дандерюд.

Перед включением и рандомизацией субъекты прибудут в больницу для прохождения медицинского осмотра, включая электрокардиограмму и лабораторные анализы крови. По этому случаю будут оцениваться социально-демографические данные и история болезни, а также параметры тела (вес, рост, состав тела) и физическая активность с использованием шведской версии IPAQ (Международный вопросник физической активности). История большой депрессии будет оцениваться с использованием мини-международного нейропсихиатрического интервью (M.I.N.I.) для большой депрессии. Психологические переменные, которые могут повлиять на поведенческий (или иммунный) ответ на ЛПС и которые, как считается, не меняются между днем ​​​​скрининга и днями испытаний, также будут оцениваться в это время с использованием нескольких веб-анкет для самооценки. Эти показатели будут включать восприятие субъектами тела и риска для здоровья (например, интероцептивное осознание, предполагаемая уязвимость к болезни, тревога по поводу здоровья и реактивность с отвращением, соматосенсорная амплификация, страх перед ощущениями, связанными с тревогой) и психологическое благополучие (например, воспринимаемое стресс, оптимизм, социальная поддержка, когнитивное благополучие). Общее время медицинского осмотра составит 30-45 минут. Время заполнения вопросников оценивается примерно в 45 минут, но это можно сделать из дома. Участники также получат набор с футболкой (с вшитыми ватными дисками) и мылом без запаха. Участникам будет предложено надевать футболку утром (после мытья подмышек) в каждый пробный день и снимать ее по прибытии. Это позволит собрать предварительные (базовые) образцы запаха тела.

Затем участники будут подвергнуты двум испытаниям, проводимым в рандомизированном порядке, по крайней мере, с шестинедельным вымыванием: эндотоксин против плацебо.

Участникам будет предложено воздержаться от напряженных упражнений и употребления алкоголя за 48 часов до дня испытания, избегать острых специй за 24 часа до дня испытания и съесть легкий завтрак утром в день испытания. Участники прибудут утром (в 7.30). Они сдадут свою утреннюю футболку (см. выше) и переоденутся в новую футболку (с вшитыми ватными дисками в подмышечной впадине) для ношения в течение всего дня. Футболки будут использоваться для оценки поведения и анализа состава запаха тела. Вскоре после их прибытия будут установлены два внутривенных катетера: один для забора крови на одной руке и один на одной руке для инъекции эндотоксина или хлорида натрия, который будет удален после инъекции. На руку будет нанесен анестезирующий крем, чтобы свести к минимуму боль при венепункции. Затем субъекты отдыхают не менее 30 минут.

Инъекция эндотоксина или хлорида натрия будет выполнена после завершения отдыха (около 8:30 утра). Образцы крови (10 мл в пробирках с ЭДТА (этилендиаминтетрауксусной кислотой) и 10 мл в пробирках с цитратом натрия) будут взяты непосредственно перед инъекцией эндотоксина или хлорида натрия и через 1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6 и 7,5 часов после инъекции. инъекция. Кроме того, 2,5 мл в пробирках PAXGene™ будут взяты до и через 2, 4 и 7,5 часов после инъекции. Два дополнительных образца в пробирках с ЭДТА (8 мл крови) будут взяты перед инъекцией и через 3 и 7,5 часов после инъекции. Общее количество взятой крови составит около 200 мл, что соответствует трети количества крови, сдаваемой при сдаче крови. Образцы крови будут использоваться для измерения концентрации про- и противовоспалительных цитокинов и других воспалительных маркеров (например, С-реактивного белка - СРБ) с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), субпопуляций иммунных клеток и концентрации микрочастиц с помощью проточной цитометрии. , генетические маркеры с использованием анализов экспрессии генов Cap-анализа (CAGE), а также подсчета и дифференциала лейкоцитов.

Образцы мочи берут перед инъекцией эндотоксина или хлорида натрия (т. е. до установки катетеров) и как можно позже после инъекции (обычно около четырех часов после инъекции).

Участники будут контролироваться с помощью непрерывной электрокардиограммы. Насыщение кислородом (SO2), кровяное давление и температура тела будут контролироваться каждые 30 минут. Диоксид азота (NO2) будет контролироваться постоянно, метгемоглобин проверяется одновременно с каждым образцом крови.

Анкеты самооценки, оценивающие поведенческие и психологические параметры, будут заполняться участниками непосредственно перед инъекцией эндотоксина или хлорида натрия (в период отдыха), через три часа и через 7,5 часов после инъекции. Участники будут неоднократно заполнять короткую анкету, оценивающую болезненное поведение (SicknessQ), непосредственно перед и через 7,5 часов после инъекции эндотоксина или хлорида натрия. Субъектов будут снимать в постели, и они будут носить социометрический значок, чтобы проанализировать поведенческую реакцию участников на стандартизированную ситуацию социального взаимодействия.

Фотографии будут сделаны до (т. е. до установки катетеров), через два часа после и через 7,5 часов после инъекции для дальнейшей оценки лиц (например, здоровья, привлекательности, усталости). Параллельно цвет кожи будет измеряться одновременно с образцами крови (кроме T1.5), чтобы оценить потенциальный опосредующий эффект оценок здоровья лиц. Анализ походки и движений субъектов будет проводиться через два с половиной часа после инъекции. Короткие компьютеризированные когнитивные тесты будут проводиться после этих тестов, не позднее чем через три часа после инъекции. Субъекты будут выполнять мотивационное задание после заполнения анкет через три часа после инъекции. Кроме того, через три с половиной часа после инъекции будут выполнены два теста, оценивающих поведение в ответ на положительные/отрицательные и здоровые/болезненные стимулы (поведенческий тест приближения-избегания и тест регулирования эмоций).

Участникам будет разрешено перекусить (закуска и напиток из сока) в обеденное время (12:30), и они сдадут свою футболку незадолго до пяти с половиной часов после инъекции.

Последние образцы крови будут взяты через 7,5 часов после инъекции, и участники будут выписаны.

Наблюдение за экспериментом будет осуществляться врачом под наблюдением специалиста по анестезии и интенсивной терапии.