Autologa endotelala stamfaderceller Behandling av diabetisk fot

Studiens design Studien var en prospektiv, icke-randomiserad studie som genomfördes vid två centra i östra Kina - tionde folksjukhuset vid Tongji University och Nanjing First Hospital. Den etiska kommittén vid varje center godkände protokollet och alla patienter gav skriftligt informerat samtycke. Alla inskrivna patienter tilldelades CD133+-cellbehandlingsgrupp (CD133+-grupp) och kontrollgrupp av egen vilja. Denna studie är att utvärdera effektiviteten och immunregleringseffekten av intraarteriell infusion av autologa CD133+-celler på diabetiker med PAD.

Patientregistrering och gruppering av diabetiska PAD-patienter i åldern ≥18 år med Rutherford-kategorierna 2 till 5 inkluderades för att bedöma lämpligheten för denna studie. Alla patienter, som gick med på att delta i studien, kunde frivilligt välja om de skulle få autolog CD133+ progenitorcellsbehandling eller inte.

I denna studie användes CD133+-celler för att stimulera angiogenes och rekonstruera effektiv mikrovaskulär blodtillförsel, därför var liknande hemodynamisk status i huvudgrenen väsentlig för att möta homogenitet i båda grupperna innan patienten gick in. Kandidaterna, som misslyckades för intraluminal revaskularisering av infra-aorta (iliac och femoral-popliteal) och 1 infra-popliteal (anterior/posterior tibial, fibular) artär av den drabbade extremiteten, skulle uteslutas från studien.

Andra uteslutningskriterium var följande: ① Hemoglobin < 10 mg/dl, ② kreatininclearance < 30 ml/min, ③ tidigare stam-/progenitorcellsterapi i anamnesen, ④ förlamning på grund av sjukdom i centrala nervsystemet, ⑤ oavsiktlig amputation eller benfraktur av mållem på grund av trauma efter inträde, ⑥ stopp av blodplättsdämpande medicin efter inträde, ⑦ rökning eller omrökning efter inträde, ⑧ malign tumör.

Behandling av infra-aorta och infra-popliteal artär lesion Datortomografisk angiografi (CTA) utfördes för att först analysera tillståndet för vaskulär lesion och sedan utfördes digital subtraktionsangiografi (DSA) för att exakt identifiera lesionerna i infra-aorta och infra-aorta. popliteala artärer före behandling.

Behandlingen av infra-aorta artär lesion utfördes i begränsad omfattning med intraluminal teknik (ballongdilatation och/eller stentimplantation), men skadans grad enligt TASC II klassificering. Den arteriella manteln infördes i den kontralaterala lårbensartären, och sedan åstadkoms revaskulariseringen av målbenet genom antegrad tillvägagångssätt.

Efter det föregående förfarandet utvärderades lesionerna i de infra-popliteala artärerna på nytt av DSA. Genom ballongvidgning uppnådde åtminstone en av de främre/posteriora tibiala och fibulära artärerna en uppenbar direkt blodtillförsel till foten.

Målet med ovanstående procedurer är att fullständigt återställa den normala huvudbålens hemodynamiska status för målbenet.

Insamling och beredning av autologa CD133+-celler Efter framgångsrik revaskularisering av infra-aorta och infra-popliteal procedur samlades 100 ml perifert blod in genom lårbensartären hos patienter och skickades till East China Stem Cell Bank för sortering och berikning av CD133+-celler. Mononukleära celler separeras från helblodet genom densitetsgradientcentrifugering med Ficoll-separerande medium, sedan väljs CD133+-celler med hjälp av magnetiskt aktiverad cellsortering. De utvalda cellerna blandades med 50 ml natriumkloridinjektion, som innehåller humant albumin och heparinnatrium i blodpåsen, och skickades sedan tillbaka till sjukhuset lagrat i 4 ℃. Alla insamlings- och beredningsprocedurer avslutades inom 6 timmar.

De utvalda cellerna måste också göra ett kvalitetstest, annars skulle cellerna kasseras och källpatienten utesluts från studien. Kvalitetsstandarderna är följande: cellantal ≥ 1×107, ingen synlig fällning i cellsuspension, livsduglig cell ≥90 %, endotoxin ≤ 2EU/ml Cellinfusionsprocedur En kateter infördes i poplitealartären i målbenet vid tibialplatån nivå. CD133+-cellsuspensionen drogs in i en 50 ml spruta och infunderades genom katetern med en injektionspump som tog 30 minuter.

För kontrollgruppen infunderades 50 ml cellfri natriumkloridinjektion innehållande humant albumin och heparinnatrium genom katetern som placebo.

Medicinering och livsstilsförändring Båda grupperna ombads att få kontinuerlig medicinering för diabetes, hyperlipidemi och hypertoni enligt råd från specialiserade läkare. Antitrombocytbehandling med 100 mg enterodragerad acetylsalicylsyra och 75 mg klopidogrel dagligen samt administrering av statiner för stabilisering av det arteriella placket krävdes också.

Förutom dessa mediciner ombads alla kandidater att sluta röka efter att ha kommit in.

Uppföljning och slutpunkter Patienterna följdes upp efter 18 månader. De primära effektmåtten definierades som förvärring av sår (utvecklar nya eller större eller djupare sår) och amputationen (över metatarsalnivån). Sårläkning och amputationsstatus observerades varje månad.

Ändringen av Rurtherford-klassificeringen, TcPO2 för dorsum pedis och ABI registrerades för att utvärdera blodperfusionen i extremiteten vid 6 och 18 månader som andra effektmått.

Som bevisat främjar stamcellerna angiogenes genom stimulering av endotelcellsproliferation, migration och överlevnad genom parakrin av höga nivåer av vaskulär endoteltillväxtfaktor (VEGF) [9]. Förutom de regenerativa egenskaperna har stamceller en immunreglerande förmåga och inducerar immunsuppressiva effekter i en rad situationer [10]. Humana stamceller har visat sig undertrycka uttryck av interleukin-6 (IL-6) i aktiverade makrofager, vilket spelar en nyckelroll i inflammatorisk respons vid sårläkning [11]. Sålunda testades serumkoncentrationerna av VEGF och IL-6 före och vid 1, 2, 4 veckor efter CD133+-cellinfusionen för att utvärdera pro-angiogensis och immunreglerande effekt av proceduren och dess varaktighet.