基于蛋白质组的胶质母细胞瘤个性化免疫治疗

该试验将包括 60 例经过两线标准化疗和完整疗程放疗后无法切除的复发性多形性胶质母细胞瘤 (GBM)。

GBM 的一线治疗涉及同种异体半相合造血干细胞 (HSC)、树突状疫苗 (DV) 和细胞毒性淋巴细胞 (CTL)。

HSC 用于刺激个体化过继性免疫反应，对肿瘤细胞 (TC) 产生毒性影响，并调节靶向肿瘤干细胞 (TSC) 以抑制其繁殖和增殖潜力。 为了获得 HSC，供体接受 8 次皮下注射粒细胞集落刺激因子 (G-CSF)，间隔 8-10 小时，持续 4 天。 前三天单剂量为每 1 公斤体重 2.5 微克，最后一天剂量加倍。 第 5 天收集干细胞。通过离心分离红细胞。 细胞标志物的含量通过流式细胞术评估。 在细胞浓缩液富集并从中去除成熟细胞和血浆后评估结果。 将制剂储存在每 4 ml 的试管中，其中含有冷冻保护剂和 10% 多聚糖溶液。 每次给药干细胞比例不低于0.5x106 CD34+，淋巴细胞比例不低于0.5x109。

脑肿瘤样本是通过立体定位/内窥镜/开放式活组织检查从包括在试验中的所有患者中获得的。 TC 和 TSC 从 GBM 活检样本中免疫化学分离。 肿瘤样本的一部分用于标准组织学、细胞学和免疫化学检测，而肿瘤细胞 (TC) 和肿瘤干细胞 (TSC) (CD133+) 则与另一部分分离。

从外周血单核细胞中分离树突细胞并进行培养。 肿瘤样品提供肿瘤特异性抗原来制备DV。

由于大量循环CTL，CTL的制备旨在增强对肿瘤的细胞毒作用。 在 3 次 DV 给药后，从约 100 ml 的外周血中分离出 CTL，并在其中生长树突细胞 (DC)。 然后，反复采集末梢血，分离淋巴细胞。 CTL 与载有肿瘤抗原（一线疗法）或与关键肿瘤特异性蛋白相同的重组蛋白（二线疗法）的 DC 共培养数次以扩大其数量 (108-109)。 检测它们的免疫表型并冷冻保存 CTL。 用 DC 对 CTL 的第一次刺激持续 6-8 天，第二次持续 2-4 天，接下来的 2 天，淋巴细胞受到第三次和第四次刺激。 然后接受的淋巴细胞用IL-2刺激2天。

一线治疗完成六个月后，评估效率，证明有效的队列继续治疗，而证明无效的队列将继续进行二线治疗试验。

二线治疗组（活性比较组）使用 DV，其重组蛋白与关键肿瘤特异性蛋白、自体 CTL 和具有修饰蛋白质组的自体 HSC 相同。

如前所述，从试验参与者那里接收自体 HSC。 用于活性比较器臂的 HSC 细胞制备物是从外周血的自体单核细胞的细胞浓缩物中获得的，如实验臂所指定的那样动员后。 活性比较组的肿瘤特异性抗原由患者的肿瘤组织提供。

患者的 TC 和 TSC 以及 HSC 进行完整的转录组作图和基因表达谱分析 (CTMGEP) 以及蛋白质组作图和蛋白质谱分析 (PMPP)。 关键（具有最大归一化强度的 3 种或 4 种蛋白质）肿瘤特异性蛋白质 (OSP) 是根据 TC 的蛋白质组测试确定的，而 TSC 的蛋白质组分析和蛋白质-蛋白质关系数据库的使用允许检测不受影响的细胞内信号转导通路 (ISTP)由致癌作用和调节能力。 此外，还会检测影响这些信号通路的受体膜靶标（受体膜蛋白），以及能够激活它们的蛋白质（蛋白质配体）。 TSC 的 CTMGEP 证实诊断为功能性 ISTP。 CTMGEP 的数学建模以及与 Affymetrix GeneChip 人类基因组 U133A 阵列数据的比较揭示了扰动剂能够化学诱导 HSC 并修改其蛋白质组图谱以提供必需的蛋白质配体的分泌。 数据库分析允许了解低分子试剂或微 RNA 诱导的基因表达变化如何与在检查的配置文件中观察到的变化相对应。 如果对应关系显着，则假定代理人或类似代理人可以启动效果。 如果反相关显着，则该试剂应该会在基因表达修饰中引发相反的效果。 通过将单核细胞与扰动剂共培养来修饰 HSC 的转录组。 它们的生物效率在体外在 Homunculus 生物反应器中进行评估。 然后如前所述储存准备工作。

个体 DV 由患者外周血的白细胞浓缩物制备。 分离淋巴细胞，用 G-CSF 和白细胞介素-2 培养，用肿瘤特异性抗原、TNF-α 和 PGE2 调节 48 小时，并加载与在 TC 的蛋白质组学测试中检测到的关键肿瘤特异性抗原相同的重组蛋白。 个体 DV 免疫作用的基本机制是患者机体产生肿瘤毒性淋巴细胞。

如前所述获得 CTL。 干预在相应的部分中进行了描述。

将根据 CTC-NCI 标准评估毒性。 效率根据以下标准进行评估：

1. 完全效果——所有肿瘤病灶完全消失
2. 部分效果——肿瘤大小和/或转移病灶减少不少于 50%，并且没有新肿瘤的迹象
3. 稳定——肿瘤病灶大小减少不到 50%，并且没有新肿瘤的迹象
4. 进展 - 治疗期间肿瘤病灶的生长。 在马赛克效应的情况下，当部分病灶进展而部分病灶稳定或减少时，继续治疗，但在“对治疗的反应”上下文之外分析病例