Proteombaseret personlig immunterapi af glioblastom

Forsøget vil omfatte 60 tilfælde af uoperabelt recidiverende glioblastoma multiforme (GBM) efter to linjer med standard kemoterapi og komplet strålebehandlingsforløb.

Førstelinjebehandlingen af ​​GBM involverer allogene haploidentiske hæmatopoietiske stamceller (HSC'er), dendritisk vaccine (DV) og cytotoksiske lymfocytter (CTL'er).

HSC'er bruges til at stimulere individualiseret adoptiv immunrespons, til at påvirke tumorceller (TC'er) toksisk og til at regulere tumorstamceller (TSC'er) målrettet for at undertrykke deres reproduktive og proliferative potentiale. For at opnå HSC modtager donoren 8 subkutane administrationer af granulocytkolonistimulerende faktor (G-CSF) med 8-10 timers interval i 4 dage. De første tre dage er en enkelt dosis 2,5 mcg pr. 1 kg vægt, den sidste dag fordobles dosis. Stamcellerne høstes på dag 5. Røde blodlegemer udtages ved centrifugering. Indholdet af cellemarkører vurderes ved flowcytometri. Resultatet vurderes efter cytokoncentratberigelse og fjernelse af modne celler og plasma fra det. Præparatet opbevares i rør pr. 4 ml med kryoprotektor og 10% polyglucinopløsning. Stamcelleandel er ikke mindre end 0,5x106 CD34+, og lymfocytandel er ikke mindre end 0,5x109 pr. administration.

Prøven af ​​hjernetumor opnås gennem stereotaktisk/endoskopisk/åben biopsi fra alle patienter, der er inkluderet i forsøget. TC'erne og TSC'erne er immunkemisk isoleret fra GBM-biopsiprøve. Den ene del af tumorprøven bruges til standard histologisk, cytologisk og immunkemisk testning, mens tumorceller (TC'er) og tumorstamceller (TSC'er) (CD133+) isoleres fra den anden del.

Dendritiske celler isoleres fra mononukleære celler fra perifert blod og dyrkes. Tumorprøve giver tumorspecifikke antigener til fremstilling af DV.

Fremstilling af CTL'er har til formål at øge cytotoksisk effekt på tumor på grund af et stort antal cirkulerende CTL'er. CTL'er isoleres fra ca. 100 ml perifert blod efter 3 DV-administrationer, og af dem dyrkes dendritiske celler (DC'er). Derefter tages perifert blod gentagne gange, og lymfocytter isoleres. CTL'erne dyrkes sammen med DC'er fyldt med tumorantigener (førstelinjebehandling) eller rekombinante proteiner, der er identiske med centrale onkospecifikke proteiner (andenlinjebehandling) i flere gange for at udvide deres antal (108-109). Deres immunfænotype påvises, og CTL'er kryokonserveres. Den første stimulering af CTL'er med DC'er varer 6-8 dage, den anden varer 2-4 dage, næste 2 dage stimuleres lymfocytterne for tredje og fjerde gang. Og derefter stimuleres de modtagne lymfocytter af IL-2 i 2 dage.

Seks måneder efter afslutningen af ​​førstelinjebehandlingen evalueres effektiviteten, og den kohorte, der viser effektivitet, fortsætter terapien, mens kohorte, der ikke udviser nogen effektivitet, vil fortsætte forsøget med andenlinjebehandlingen.

Den anden linjes terapiarm (aktiv komparatorarm) bruger DV med rekombinante proteiner, der er identiske med onkospecifikke nøgleproteiner, autologe CTL'er og autologe HSC'er med modificeret proteom.

Autologe HSC'er modtages fra forsøgsdeltageren som beskrevet tidligere. Cellepræparation af HSC til aktiv komparatorarm opnås af cytokoncentratet af autologe mononukleære celler af perifert blod efter mobilisering som specificeret for eksperimentel arm. Tumorspecifikke antigener for aktiv komparatorgruppe tilvejebringes af patientens tumorvæv.

TC'er og TSC'er samt HSC'er fra patienten gennemgår fuldstændig transkriptomkortlægning og genekspressionsprofilering (CTMGEP) og proteomkortlægning og proteinprofilering (PMPP). Nøgle (3 eller 4 proteiner med maksimal normaliseret intensitet) onkospecifikke proteiner (OSP) bestemmes i henhold til proteomtestning af TC'er, mens proteomprofilering af TSC'er og brug af databaser over protein-protein-relationer tillader påvisning af intracellulære signaltransduktionsveje (ISTP) upåvirket ved carcinogenese og i stand til at regulere. Der detekteres også receptormembranmål til at påvirke disse signalveje (acceptormembranproteiner), såvel som proteiner, der er i stand til at aktivere dem (proteinligander). CTMGEP af TSC'er bekræfter diagnosticeret funktionel ISTP. Matematisk modellering af CTMGEP og sammenligning med Affymetrix GeneChip Humant genom U133A Array-data afslører perturbagens, der er i stand til kemisk at inducere HSC'er og til at modificere deres proteomprofil for at give sekretion af nødvendige proteinligander. Databaseanalysen tillader forståelse af, hvordan ændringer i genekspression induceret af et lavmolekylært middel eller mikro-RNA svarer til ændringerne observeret i den undersøgte profil. Hvis korrespondancen er væsentlig, antages det, at midlet eller lignende midler kan initiere virkningen. Hvis anti-relation er signifikant, formodes midlet at initiere en modsat effekt i genekspressionsmodifikation. Transkriptomet af HSC'er modificeres ved co-dyrkning af mononukleære celler med perturbagener. Deres biologiske effektivitet evalueres in vitro i Homunculus bioreaktor. Derefter opbevares præparatet som beskrevet tidligere.

Individuel DV fremstilles ud fra leukokoncentratet af patientens perifere blod. Lymfocytterne isoleres, dyrkes med G-CSF og interleukin-2, konditioneres af tumorspecifikke antigener, TNF-a og PGE2 i 48 timer og fyldes med rekombinante proteiner, der er identiske med nøgletumorspecifikke antigener påvist ved proteomisk test af TC'er. Grundlæggende mekanisme for individuel DV-immuneffekt er udarbejdelse af tumortoksiske lymfocytter af patientens organisme.

CTL'er opnås som beskrevet tidligere. Indgrebet er beskrevet i det relevante afsnit.

Toksicitet vil blive vurderet i henhold til CTC-NCI kriterier. Effektiviteten vurderes efter følgende kriterier:

1. Fuldstændig effekt - -fuld forsvinden af ​​alle tumorfoci
2. Delvis effekt - -reduktion af tumorstørrelse og/eller metastatiske foci med ikke mindre end 50% og ingen tegn på nye neoplasmer
3. Stabilisering - reduktion af tumorfoci størrelse med mindre end 50% og ingen tegn på nye neoplasmer
4. Fremskridt - vækst af tumorfoci under terapien. I tilfælde af mosaikeffekt, når en del af foci skrider frem og en del er stabil eller reducerende, fortsættes terapien, men tilfældene analyseres uden for konteksten "Respons på terapien"