Proteom alapú, személyre szabott glioblasztóma immunterápia

A kísérlet 60 nem reszekálható kiújuló glioblasztóma multiforme (GBM) esetet fog tartalmazni két sor standard kemoterápia és teljes sugárkezelés után.

A GBM első vonalbeli terápiája allogén haploidentikus hematopoietikus őssejteket (HSC), dendritikus vakcinát (DV) és citotoxikus limfocitákat (CTL) foglal magában.

A HSC-ket az egyénre szabott adoptív immunválasz stimulálására, a tumorsejtek (TC-k) toxikus befolyásolására, valamint a célzott daganatos őssejtek (TSC) szabályozására használják, hogy elnyomják szaporodási és proliferációs potenciáljukat. A HSC megszerzéséhez a donor 8 szubkután granulocita telep-stimuláló faktort (G-CSF) kap 8-10 órás időközönként 4 napon keresztül. Az első három napon az egyszeri adag 2,5 mcg/1 kg, az utolsó napon az adag megduplázódik. Az őssejteket az 5. napon begyűjtjük. A vörösvérsejteket centrifugálással eltávolítjuk. A sejtmarkerek tartalmát áramlási citometriával értékeljük. Az eredményt a citokoncentrátum dúsítása és az érett sejtek és a plazma eltávolítása után értékeljük. A készítményt 4 ml-es csövekben tároljuk krioprotektorral és 10%-os poliglucin oldattal. Az őssejtek aránya nem kevesebb, mint 0,5x106 CD34+, és a limfociták aránya nem kevesebb, mint 0,5x109 egy adagolásonként.

Az agydaganat mintáját sztereotaxiás/endoszkópos/nyílt biopsziával nyerjük a vizsgálatba bevont összes betegtől. A TC-ket és a TSC-ket immunkémiailag izoláljuk a GBM biopsziás mintából. A tumorminta egy részét standard szövettani, citológiai és immunkémiai vizsgálatokhoz használjuk, míg a másik részből tumorsejteket (TC-ket) és tumor őssejteket (TSC-ket) (CD133+) izolálunk.

A dendritikus sejteket perifériás vér mononukleáris sejtjeiből izoláljuk és tenyésztjük. A tumorminta tumorspecifikus antigéneket biztosít a DV előállításához.

A CTL-ek előállításának célja a tumorra kifejtett citotoxikus hatás fokozása a keringő CTL-ek nagy száma miatt. A CTL-eket körülbelül 100 ml perifériás vérből izoláljuk 3 DV beadás után, és ezek közül dendritikus sejteket (DC) növesztünk. Ezután ismételten perifériás vért vesznek, és limfocitákat izolálnak. A CTL-eket többszörösen együtt tenyésztjük tumorantigénekkel (első vonalbeli terápia) vagy a kulcsfontosságú onkospecifikus fehérjékkel azonos rekombináns fehérjékkel (másodvonalbeli terápia) töltött DC-kkel, számuk növelése érdekében (108-109). Immunfenotípusukat kimutatják, és a CTL-eket mélyhűtve tartósítják. A CTL-ek első stimulálása DC-kkel 6-8 napig tart, a második 2-4 napig tart, a következő 2 napon a limfocitákat harmadszor és negyedszer stimulálják. Ezután a kapott limfocitákat IL-2 stimulálja 2 napig.

Hat hónappal az első vonalbeli terápia befejezése után a hatékonyságot értékelik, és a hatékonyságot mutató kohorsz folytatja a terápiát, míg a hatástalanságot mutató kohorsz a második vonalbeli terápiával folytatja a kísérletet.

A második vonalbeli terápiás kar (aktív komparátor kar) DV-t használ a kulcsfontosságú onkospecifikus fehérjékkel azonos rekombináns fehérjékkel, autológ CTL-ekkel és autológ HSC-kkel módosított proteomával.

Az autológ HSC-ket a kísérlet résztvevője kapja a korábban leírtak szerint. A HSC sejtpreparációját az aktív komparátor karhoz a perifériás vér autológ mononukleáris sejtjeinek citokoncentrátumából nyerik a kísérleti karra meghatározott mobilizálás után. Az aktív összehasonlító csoport tumorspecifikus antigénjeit a páciens daganatszövete biztosítja.

A páciens TC-i és TSC-jei, valamint HSC-jei teljes transzkriptom-térképezésen és génexpressziós profilozáson (CTMGEP) és proteomtérképezésen és fehérjeprofilozáson (PMPP) esnek át. A kulcsfontosságú (3 vagy 4 maximális normalizált intenzitással rendelkező fehérje) onkospecifikus fehérjéket (OSP) a TC-k proteomvizsgálata alapján határozzák meg, míg a TSC-k proteomprofilja és a fehérje-fehérje kapcsolatok adatbázisainak használata lehetővé teszi az intracelluláris jelátviteli útvonalak (ISTP) érintetlen kimutatását. rákkeltő hatású és szabályozható. Ezen túlmenően a receptormembrán célpontokat, amelyek befolyásolják ezeket a jelutakat (akceptor membránfehérjék), valamint azokat a fehérjéket, amelyek képesek aktiválni ezeket (fehérje ligandumok). A TSC-k CTMGEP-je megerősíti a diagnosztizált funkcionális ISTP-t. A CTMGEP matematikai modellezése és az Affymetrix GeneChip Humán genom U133A-val történő összehasonlítása A Array adatok olyan perturbagéneket tárnak fel, amelyek képesek kémiailag HSC-ket indukálni és módosítani a proteomprofiljukat, hogy biztosítsák a szükséges fehérjeligandumok kiválasztását. Az adatbázis-elemzés lehetővé teszi annak megértését, hogy egy kis molekulatömegű ágens vagy mikro-RNS által kiváltott génexpresszió-változások hogyan felelnek meg a vizsgált profilban megfigyelt változásoknak. Ha jelentős az összefüggés, akkor feltételezhető, hogy a szer vagy hasonló szerek kiválthatják a hatást. Ha az antikorreláció szignifikáns, az ágensnek ellentétes hatást kell kiváltania a génexpresszió módosításában. A HSC-k transzkriptumát úgy módosítják, hogy a mononukleáris sejteket perturbagénekkel együtt tenyésztik. Biológiai hatékonyságukat in vitro Homunculus bioreaktorban értékelik. Ezután a készítményt a korábban leírtak szerint tároljuk.

Az egyéni DV-t a páciens perifériás vérének leukokoncentrátumából készítik. A limfocitákat izoláljuk, G-CSF-fel és interleukin-2-vel tenyésztjük, tumorspecifikus antigénekkel, TNF-α-val és PGE2-vel kondicionáljuk 48 órán át, és feltöltjük a TC-k proteomikus tesztelése során kimutatott kulcsfontosságú tumorspecifikus antigénekkel azonos rekombináns fehérjékkel. Az egyéni DV immunhatás alapmechanizmusa a tumortoxikus limfociták kidolgozása a páciens szervezetében.

A CTL-eket a korábban leírtak szerint kapjuk. A beavatkozás leírása a megfelelő részben található.

A toxicitást a CTC-NCI kritériumok szerint értékelik. A hatékonyságot a következő kritériumok szerint értékelik:

1. Teljes hatás - -az összes tumorgóc teljes eltűnése
2. Részleges hatás - - a daganat méretének és/vagy az áttétes gócoknak legalább 50%-os csökkenése, és nincs új daganat jele
3. Stabilizáció - a tumorgócok méretének csökkenése kevesebb, mint 50% -kal, és nincs új daganat jele
4. Előrehaladás - a daganatos gócok növekedése a terápia során. Mozaikhatás esetén, amikor a gócok egy része előrehalad, egy része pedig stabil vagy redukálódik, a terápia folytatódik, de az esetek elemzése a "Terápiára adott válasz" kontextuson kívül történik.