苏里南新生儿的感染、败血症和脑膜炎 (InSepSur)

学习规划：

帕拉马里博学术医院 (AZP) 拥有苏里南最大的围产期护理设施。 最近，AZP 开设了该国唯一的新生儿重症监护病房 (NICU)。 本研究旨在包括所有在这里和在高级和中级护理机构就诊的具有感染、败血症或脑膜炎临床体征（年龄：0-1 个月）需要进行感染检查的新生儿。 除了包括这些新生儿外，还对患有传染病的新生儿进行了详细的流行病学描述。 纳入将由 10 名居民中的一名进行，并获得 5 名主治儿科医生之一的批准。 除了用于感染参数（t=0 和 t=48 小时）、血培养（t=0 小时）和 CSF 培养（t=0 小时）的标准抽血之外，血清和 CSF 将被分离用于我们的生物标志物研究. 对于所有新生儿，将遵循当地处理感染、败血症或脑膜炎的常规规程。 这包括在 1) 入院时高度怀疑感染的情况下进行 7 天的抗生素治疗； 2）48小时感染参数异常； 3）血培养阳性。 否则，抗生素治疗会在 48 小时后停止。 进一步的协议包括呼吸支持、循环（液体）支持和喂养方面的必要改变。 药物治疗可以是强心剂和治疗高血糖症和癫痫发作。 根据抗生素治疗过程和培养结果将新生儿分为 5 组：1) 基线对照（无感染迹象）：新生儿在 t=0 和 48 小时因无并发症的高胆红素血症（有黄疸，但没有其他原因）连续抽血入院感染迹象）； 2）有感染迹象，又分为： 2a）无感染：48小时后停用抗生素；负面文化； 2b) 临床感染：7天抗生素；负面文化； 2c) 败血症：细菌血培养阳性； 2d) 脑膜炎：CSF 细菌培养阳性。

样本量和功效：

样本量和功效分析很复杂，因为苏里南围产期和婴儿死亡率调查仅提供感染（以及其他原因）导致的死亡率数据，而没有新生儿感染发生率的数据。 我们估计在 AZP 的 NICU 中，每 1000 名活产婴儿中有 50 人 (5%) 因感染的临床症状入院。 AZP 的年出生率约为每年 3000 例活产，因此我们有 n=150 名有感染迹象的新生儿，分为四组。 基于这些估计，整个人群的推荐样本量为 n=1538（误差范围 1% 和 CI 99%）。 由于适用排除标准的新生儿的发生率和亚组的发生率目前未知，并且为了补偿失访，我们决定纳入超过一年的时间 (n=3000)。 生物标志物研究本质上是探索性的，我们的目标是 n=40 的基线对照组（由于实际限制，可能难以确定更大的 n）。 在我们的分析中，我们将根据孕龄和种族进行调整。 由于缺乏与新生儿感染相关的生物标志物水平的先前数据，我们无法估计功效。 通过对我们 150 个内含物的血清和 CSF 进行分析，我们的目标是为未来的后续生物标志物研究进行分析。

方法：

流行病学：将在入院时（t=0 小时）和期间（t=48 小时）记录以下数据：日期和时间、产妇年龄、性别、产妇 B 组链球菌培养结果、产妇发热、（过早）延长胎膜破裂 ((P)PROM)、胎龄（如果根据 Ballard 未知）、分娩地点和方式、Apgar 评分、出生体重、性别、种族、白细胞计数和分化、血小板计数、CRP、抗生素治疗（类型、持续时间）、败血症（早发/晚发、线）、存活/过期。 新生儿急性生理学 II 评分将在 t=0 和 48 小时进行评分。 .

血清分离：全血将通过静脉穿刺收集在一个血清微量容器 (500 μL) 中。 血清样品将通过以 2500 x g 离心 15 分钟来分离，并保存在冰上直至储存。 所有血清和 CSF 样本将在 AZP 的中央实验室储存在 -80°C。 分批血清和脑脊液样本将被包装在干冰上（最大 24小时;根据国际航空运输协会指南）并运送到格罗宁根的内皮生物医学和血管药物靶向实验室。

Luminex® 技术：我们位于格罗宁根的实验室在使用 Luminex® 阵列一次测量临床患者样本中的多个粘附分子（即多重分析）方面拥有丰富的经验。 目前，该技术已成功应用于基础研究和转化研究，并逐渐进入临床，可以为败血症或癌症等复杂疾病编制诊断性多阵列分子。 有关我们包含在阵列中的特定粘附分子及其相关脱落酶，请参见表 1。 可溶性 L-、E- 和 P-选择素、细胞间粘附分子 (ICAM-1)、血管细胞粘附分子 (VCAM-1)、中性粒细胞弹性蛋白酶 (NE)、基质金属蛋白酶 9 (MMP-9) 的测量，金属蛋白酶 (TIMP-1) 和 ADAM 金属肽酶结构域 17 (ADAM-17) 的组织抑制剂将使用 Luminex® 进行；只要 Luminex® 尚不能用于这些分子，NE 和 ADAM-17 将通过 ELISA 进行分析。 我们还将使用 Luminex® 来测量循环的 Angiopoetin-1 和 -2，以及可溶性 Tie-2 受体作为内皮细胞活化的标志物。 对于 Luminex® 测定（Life Technologies），适当稀释体积的样品将等分到 96 孔板中。 将使用 Luminex® 100 分析仪（Life Technologies）进行同步分析。 ELISA 将根据制造商协议（研发系统）进行。

统计分析：

流行病学决定因素的发病率将在纳入期结束时计算。 分类变量将显示为数字和百分比，连续变量将显示为平均值 +/- SD，或者如果不是正态分布，则显示为中位数 +/- 第 10 个百分位数。 分类数据将与卡方和连续变量与独立 t 检验或双向方差分析进行比较。 为了评估生物标志物组合（cAM/SE 比率）对感染发生的独立影响，将以感染作为依赖变量，以 cAM/SE 比率、胎龄和种族作为自变量进行多变量逻辑回归。 我们将计算 Spearman 等级相关性以评估生物标志物之间的双变量关联。 cAM/SE 比率的诊断准确性将通过使用基于接受者操作特征 (ROC) 的曲线下面积进行评估。 将计算其他测试特征，例如预测值和似然比。 P 值 < 0.05 将被视为具有统计学意义。 将使用 Stata (StataCorp) 进行统计分析。

困难与局限：

首先，从新生儿中分离血清可能导致体积小，但 Luminex® 技术专为评估小体积的大量分子而设计。 根据当地协议，CSF 收集不在基线控制中进行，也不在不怀疑脑膜炎的新生儿中进行。 两个时间点的测量可能不足以检测时间的变化。 我们将无法确定感染的病毒原因，因为苏里南目前没有适当的诊断方法。

苏里南局势的伦理问题：

我们已于 2015 年 3 月 9 日获得苏里南道德委员会的批准。 在新生儿符合资格后，将要求至少一位父母或监护人让他们的孩子参与研究，并将以荷兰语提供书面信息。 如果患者难以辨认或听不懂荷兰语，将以听得懂的语言（英语或 Sranan Tongo）进行口头解释。 从父母或监护人处获得书面知情同意书（带有签名或指纹）以收集所有临床数据、血液和脑脊液。 用于血清分离的抽血和用于 CSF 收集的脊柱穿刺只会根据当地协议与干预措施一起进行（即，不会进行额外的抽血或脊柱穿刺）。 所有样本都将被匿名处理并获得一个样本 ID。

个别科目退学：

如果受试者的父母或监护人愿意，他们可以随时以任何理由提出离开研究而不会产生任何后果。 研究者可以出于医疗原因或当受试者不合作（即拒绝抽血）时决定撤回受试者。

提前终止研究：

没有预期会导致研究提前终止的情况。

安全报告：

不良和严重不良事件人群（基数） 我们预计不会出现与抽血相关的任何（严重）不良事件。

行政方面和出版：

数据和文件的处理和存储：纸质数据将由协调调查员存储在一个独特的文件夹中，协调调查员和参与研究的调查员都可以访问该文件夹。 数据也将以电子方式存储在 Excel 数据库中。 主要研究者将输入数据。 该文件将仅供调查人员访问，并且通过电子邮件进行的数据交换将使用密码进行加密。 每个参与者在签署知情同意书后都会收到一个唯一的参与编号，该编号与血样的样本ID相对应。

修正案：

修正案是在获得认可的伦理委员会给出赞成意见后对研究所做的更改。 所有给出赞成意见的修正案将被通知。 “实质性修正案”被定义为对伦理委员会申请的条款、方案或任何其他支持文件的修正，可能会在很大程度上影响：

• 试验对象的安全或身心健全；
• 试验的科学价值；
• 试验的进行或管理；或者
• 试验中使用的任何干预措施的质量或安全性。

所有实质性修改都将通知伦理委员会和主管当局。 非实质性的修改将不会通知经认可的伦理委员会和主管当局，但将由申办者记录和归档。

年度进展报告：

发起人/研究者将每年向经认可的伦理委员会提交一次研究进展摘要。 将提供有关第一个受试者的纳入日期、纳入的受试者数量和已完成试验的受试者数量、严重不良事件/严重不良反应、其他问题和修正案的信息。

研究报告结束：

研究者将在 8 周内将研究结束通知经认可的伦理委员会。 研究结束定义为最后一位患者的最后一次就诊。 如果研究提前结束，研究者将通知经认可的伦理委员会，包括提前终止的原因。 在研究结束后一年内，研究者/发起人将向经认可的伦理委员会提交一份包含研究结果的最终研究报告，包括研究的任何出版物或摘要。

公开披露和出版政策：

研究结果的最终发表将由研究协调员根据所进行的统计分析撰写。 手稿草稿将提交给所有合著者审阅。 修改后的手稿将被发送到同行评审的科学期刊。 研究协调员必须批准基于研究中患者的任何出版物、摘要或演示文稿。