法国大西部地区前列腺癌结构网络 (RESCAP)

相关性和战略方法 前列腺癌 (PCa) 是男性最常见的癌症，也是西方国家癌症死亡的第二大原因。 已知的危险因素是高龄、种族起源和疾病的阳性家族史 (1)。 PCa 风险存在相当大的种族差异，非洲裔美国人 (AA) 男性的发病率比欧裔美国人 (EA) 男性高 60% (2)。 同样，在法属西印度群岛，至少 90% 的居民是非洲人后裔，PCa 的发病率是法国其他地区的两倍 (3)。 许多生活方式、环境和职业相关的风险因素，包括肥胖、饮食、药物和杀虫剂，都与 PCa 病因有关，但它们的作用仍不清楚 (4)。 目前的研究表明，遗传和环境因素之间存在复杂的相互作用，这些因素在 PCa 中起着致病作用。

PCa 还具有高度异质的进化潜力。 虽然一些癌症会以侵袭性方式表现，但其他患者将患有不需要任何治疗的惰性疾病。 几个参数用于预测 PCa 患者的进化风险，无论是在任何治疗之前：临床分期、Gleason 活检评分和血清前列腺特异性抗原 (PSA)，还是在根治性前列腺切除术标本分析之后：病理分期和手术 Gleason得分（5）。 然而，尽管这些预后因素具有价值，但在诊断时仍难以评估侵袭性的可能性，并且分类为中度风险组的患者通常难以管理。发现用于早期治疗操作的新标志物和新靶点是一项挑战。

遗传和环境因素都与侵袭性疾病的风险有关。 种族血统可能发挥了作用，因为据报道，非洲裔美国患者 (35%) 诊断为转移期的病例比例高于欧裔美国患者 (22%)，是欧洲裔美国人患者的 2.4 倍AA 男性的死亡率高于 EA 男性 (2)。与遗传因素一起，环境因素似乎也在 PCa 进展中发挥关键作用。 某些环境因素（例如肥胖）与侵袭性前列腺癌有关 (6)。 然而，关于遗传和环境因素的作用及其在 PCa 侵袭性中的相互作用，还有很多需要研究的地方。 白色脂肪组织 (WAT) 和脂质可能在多个层面参与 PCa 的发展和/或进展。

WAT 是一种代谢活跃的内分泌器官。 脂肪细胞分泌多种激素、生物活性肽和细胞因子，称为脂肪因子 (9)。 几种脂肪因子参与了导致 PCa 进展和侵袭性的机制，包括瘦素、白细胞介素 IL-6 和血管内皮生长因子 (VEGF)。

储存内分泌干扰物。 内分泌干​​扰物 (ED) 被认为与前列腺癌有关 (10)。 然而，环境暴露与 ED 之间正相关的流行病学证据有限。 两项使用血浆或腹部脂肪监测持久性污染物的研究表明与 PCa 风险呈正相关（反式氯丹、β-六氯环己烷、反​​式九氯、狄地尔碱和多氯联苯 153）(11, 12)。 最近在法属西印度群岛进行的一项研究表明，十氯酮是一种具有明确雌激素特性的有机氯农药，它会增加患前列腺癌的风险，并且与具有阳性前列腺癌家族史的受试者的侵袭性疾病有关 (13) .

WAT 成分：Lipidome。 在营养素中，膳食脂质是 WAT 总体脂质组成的主要决定因素，正如在膳食干预研究期间评估的那样 (19-22)。 在脂肪酸中，必需多不饱和脂肪酸 (PUFA) 是生物活性成分的一个子类，分为两组，n-6 和 n-3 脂肪酸。 n-6 系列包括前体亚油酸 (LA, 18:2n-6)。 n-3 系列包括前体 α-亚麻酸 (ALA, 18:3n-3) 和高度不饱和衍生物。 WAT 的脂肪酸组成已被证明可以反映过去的脂肪酸摄入量 (23)。 尽管没有确凿的研究表明总膳食脂肪摄入量与 PCa 风险之间存在关联，但特定类型的膳食脂肪（动物脂肪）似乎在增加 PCa 风险方面更为重要 (6, 28)。 食用鱼类（富含长链 omega-3 多不饱和脂肪酸）与降低前列腺癌风险之间的关联存在争议，但已经描述了前列腺癌特异性死亡率的显着降低 (29)。 先前分析前列腺组织中多不饱和脂肪酸成分的研究导致了相互矛盾的结果。 然而，WAT 的脂肪酸组成从未在 PCa 中与侵袭性和进展相关联进行研究。

该计划的目标是构建一个网络，将致力于前列腺癌管理和研究的临床医生、病理学家和科学家联系起来。 该网络将生成一个多中心的中央数据库，其中包含接受根治性前列腺切除术治疗的 PCa 患者，并收集标准化的生物资源，包括前列腺和脂肪组织样本。 生物资源的使用将主要针对脂肪组织/脂质与 PCa 侵袭性之间的关系。

该项目旨在描述 PCa 侵袭性和骨盆脂肪组织组成之间的关联。 来自低风险 (n=100) 或侵袭性 (n=100) PCa 患者的脂肪组织样本将被分析 1/ 脂质谱（脂肪酸组成和磷脂比例），2/ 脂肪因子的表达，和 3/ 持久性具有类激素活性的有机污染物。 该分析将考虑已知的攻击性因素，包括肥胖、MetS 成分、民族地理起源和疾病的阳性家族史。

实施的方法和技术 I- 数据库和生物资源收集的构成 在该网络的 7 个临床中心接受根治性前列腺切除术治疗的每位前列腺癌患者将被纳入队列。 考虑到这些中心在过去 3 年中的手术活动，预计 18 个月后至少有 1000 个包涵体，约有 250 名非洲-加勒比患者。标准化的临床、生物学和病理学数据将输入一个通用的集中式 eCRF每个中心 (Clinsight®) 进行中央管理和验证（第 13 队）。 将向临床团队（专门从事临床研究的技术人员）输入数据提供财政支持。

通常与 PCa 相关的数据将被输入数据库：行政项目（姓名、出生日期、地址、医院编号、病理编号）、术前 PSA、临床分期、病理项目（标本的重量和大小、病理分期包括淋巴结状态、格里森评分、4 级或 5 级百分比、主要病灶的大轴、边缘状态）和随访项目（生物学和临床）。还将指定以下项目：BMI、腰围、空腹血糖、血压、循环血脂（甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白胆固醇）、正在进行的治疗（降脂药物、HTA、糖尿病治疗）、人种地理起源和 PCa 家族史手术过程中，3 件盆腔脂肪组织（约 5g、2g 和 2g，分别用于轴 1 的任务 1、2 和 3）将被取样，送到生物资源中心，并立即冷冻在 -80°C。 研究人员选择对内脏 WAT 而非皮下 WAT 进行采样，因为内脏脂肪细胞的代谢活性更高 (8)。 在内脏 WAT 中，研究人员选择对膀胱周围脂肪组织进行取样，因为膀胱周围的脂肪总是非常丰富，并且在手术过程中很容易取出。 前列腺标本将立即送往病理科，并进行规范化处理。

队列中的患者将被要求签署知情同意书（在伦理委员会/IRB 同意后）。 与程序中包含的主题相关的注释生物资源将根据 CNIL 定义的规则进行管理。

从预期在 M18 的 1000 名患者中选择患有侵袭性或低风险疾病的患者，将选择 100 名患有高度侵袭性疾病的患者。 将根据高危疾病的标准进行选择，主要是高级别 PCa（格里森评分 8 或更高）和/或病理分期 pT3。 然后将这 100 名患者中的每名患者（逐中心）与 1 名患有惰性疾病且年龄状况相同（50 岁或以下、51-55、56-60、61-65、66-70、71-75、超过 75 岁）和 BMI（正常、超重和肥胖）。 惰性疾病的标准将包括术前 PSA < 10ng/ml、Gleason 评分 6 分或更低（在手术标本上）和 pT2 分期。 如果几个惰性病例可以匹配一个侵袭性病例，则优先选择肿瘤较小的病例。 将使用从这 200 名患者身上采集的脂肪组织样本。

目的是确定侵袭性和显着 PCa 与脂肪组织组成之间的关联。 研究人员假设持久性有机污染物（反映过去累积的暴露）和/或脂质成分（反映过去的摄入）可能与脂肪因子表达一起与疾病侵袭性相关。 将考虑 PCa 攻击性的已知因素（种族起源、家族史和肥胖状况）。

任务 1：脂质组分析 对脂肪组织样本进行的分析将是：i) 甘油三酯脂肪酸组成，以及 ii) 脂肪细胞膜磷脂类相对量。 可以分离和定量脂肪细胞质膜中发现的五种主要磷脂类：磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸和鞘磷脂。 脂肪组织主要由甘油三酯和仅约 1% 的磷脂组成，膜磷脂的研究将需要比甘油三酯脂肪酸成分分析（400-500 毫克）通常所需的样品量更大的样品量（5 克）。

脂肪组织样本将使用氯仿和甲醇（根据 Folch 方法）进行脂质提取。 简而言之，将总提取物真空干燥，然后再溶解在己烷和甲醇的混合物中以分配中性（己烷可溶）和极性（甲醇可溶）脂质。 己烷相中的甘油三酯将通过硅胶板上的薄层色谱法从其他中性或极性脂质中进一步纯化。 纯化的甘油三酯将进行甲醇酯交换以产生甲酯形式的挥发性脂肪酸。 脂肪酸的分离和定量将通过气相色谱法（BPX-70 相毛细管柱、柱上注射、火焰离子化检测器）进行。

任务 2：脂肪因子测量 脂肪组织样本中的总 RNA 将通过 Trizol 技术提取，RNA 质量将通过凝胶琼脂糖电泳和 NanoDrop 定量检查。 将编码 mRNA 逆转录成 cDNA 后，将使用管家基因在低循环数和凝胶琼脂糖新控制下进行逆转录 PCR 扩增的质量控制。 然后将对九个感兴趣的基因（脂肪因子）和三个用于标准化的管家基因（18S、β-肌动蛋白和 SDHA）一式三份进行实时定量 PCR，即生成 10 800 个点。 PCR 将在 384 孔板中进行，反应混合物由机器人分配。脂肪因子列表 (n=9)：凯莫瑞、白细胞介素 6 (IL-6)、纤溶酶原激活物抑制剂 1 (PAI-1)、视黄醇结合蛋白 4 (RBP4)、肿瘤坏死因子-α (TNF α)、内脂素、瘦素、脂联素、apelin。

任务 3：持久性有机污染物（有机氯杀虫剂）的测量 用于测量目标有机氯杀虫剂的分析方法源自先前针对其他类别的亲脂性持久性有机污染物（例如二恶英和多氯联苯化合物）开发、验证和认可的程序。 简而言之，使用加速溶剂萃取 (ASE) 的初步步骤之后将在活性二氧化硅和硅藻土柱上进行连续的纯化阶段。 将使用与高分辨率和/或串联质谱法（GC-HRMS、GC-MS/MS）耦合的气相色谱法进行测量。 将根据同位素稀释法（即使用 13C 标记的类似物作为内部标准）实现量化。 主要目标物质的选择将根据列出约 12 种主要关注农药的斯德哥尔摩公约进行初步选择。

多中心标准化临床和生物学数据库将确定 2 个具有侵袭性或潜在惰性疾病特征的同质 PCa 患者组。 研究人员预计，对盆腔脂肪组织的分析将证明某些类别的 1/ 脂质（反映饮食）、2/ 脂肪因子和 3/ 储存的异生素是否优先与更高或更低的 PCa 侵袭性风险相关。 这样的识别可能会导致预防策略。