フランス西部地域における前立腺癌の構造的ネットワーク (RESCAP)

関連性と戦略的アプローチ 前立腺がん (PCa) は、男性に最も多いがんであり、西側諸国ではがんによる死亡原因の第 2 位です。 既知の危険因子は、高齢、民族的起源、およびこの疾患の家族歴です (1)。 PCa リスクにはかなりの民族格差があり、ヨーロッパ系アメリカ人 (EA) の男性と比較して、アフリカ系アメリカ人 (AA) の男性の発生率は 60% 高い (2)。 同様に、住民の少なくとも 90% がアフリカ系であるフランス領西インド諸島では、PCa の発生率はフランスの他の地域の 2 倍です (3)。 肥満、食事、投薬、殺虫剤など、多くのライフスタイル、環境および職業関連の危険因子が PCa の病因に関与していますが、その役割は不明のままです (4)。 現在の研究は、PCa の原因となる役割を持つ遺伝的要因と環境要因の複雑な相互作用があることを示唆しています。

PCa には、非常に異質な進化の可能性もあります。 一部のがんは積極的に行動しますが、他の患者は、治療を必要としない緩慢な形態の疾患を患っています. PCa 患者の進行のリスクを予測するために、いくつかのパラメーターが使用されます。治療前: 臨床病期、生検のグリーソン スコア、および血清前立腺特異抗原 (PSA)、または根治的前立腺摘除標本の分析後: 病理学的病期および外科的グリーソンスコア (5)。 ただし、これらの予後因子の価値にもかかわらず、攻撃性の可能性を診断時に評価することは依然として困難であり、中間リスクグループに分類される患者はしばしば管理が困難です。早期の治療操作のための新しいマーカーと新しいターゲットを発見するという課題があります。

遺伝的要因と環境要因の両方が、攻撃的な疾患のリスクに関連しています。 転移段階で診断された症例の割合は、ヨーロッパ系アメリカ人患者 (22%) よりもアフリカ系アメリカ人患者 (35%) の方が高く、2.4 倍であると報告されているため、民族的起源が役割を果たす可能性があります。 EA男性よりもAA男性の死亡率が高い（2）。遺伝的要因とともに、環境要因もPCaの進行に重要な役割を果たしているようです. 肥満などのいくつかの環境要因は、攻撃的な PCa と関連付けられています (6)。 ただし、PCa攻撃性における遺伝的および環境的要因の役割とそれらの相互作用については、まだ多くの調査が必要です。 白色脂肪組織 (WAT) と脂質は、多くのレベルで PCa の発生および/または進行に関与している可能性があります。

WAT は、代謝的に活性な内分泌器官です。 脂肪細胞は、アディポカインと呼ばれるさまざまなホルモン、生理活性ペプチド、およびサイトカインを分泌します (9)。 レプチン、インターロイキンIL-6、血管内皮増殖因子（VEGF）など、いくつかのアディポカインがPCaの進行と攻撃性につながるメカニズムに関与しています。

内分泌かく乱物質の保管。 内分泌かく乱物質 (ED) は、前立腺癌に関与していると考えられています (10)。 しかし、環境曝露と ED との正の関連性を示す疫学的証拠は限られています。 持続性汚染物質のモニタリングに血漿または腹部脂肪を使用した 2 つの研究では、PCa リスクとの正の関連性が示されています (トランスクロルデン、ベータ-ヘキサクロロシクロヘキサン、トランス-ノナクロア、ディルドリン、およびポリ塩化ビフェニル 153) (11、12)。 フランス領西インド諸島で実施された最近の研究では、エストロゲン特性が明確に定義された有機塩素系農薬であるクロルデコンが PCa のリスクを高め、PCa の家族歴が陽性の被験者では攻撃型の疾患と関連していることが示されました (13)。 .

WAT組成：リピドーム。 栄養素の中で、食事介入研究中に評価されるように、食事脂質は、WAT の全体的な脂質組成の主要な決定要因です (19-22)。 脂肪酸のうち、必須多価不飽和脂肪酸 (PUFA) は、n-6 脂肪酸と n-3 脂肪酸の 2 つのグループに分けられる生物活性成分のサブクラスです。 n-6 シリーズには、前駆体リノール酸 (LA、18:2n-6) が含まれます。 n-3 シリーズには、前駆体の α-リノレン酸 (ALA、18:3n-3)、および高度に不飽和な誘導体が含まれます。 WAT の脂肪酸組成は、過去の脂肪酸摂取を反映することが示されています (23)。 総食事性脂肪摂取量と PCa リスクとの関連を示す決定的な研究はありませんが、特定のタイプの食事性脂肪 (動物性脂肪) が PCa リスクの増加においてより重要であるように思われます (6, 28)。 魚の消費 (長鎖オメガ 3 PUFA が豊富) と前立腺がんのリスク低下との関連性については議論の余地がありますが、前立腺がん特有の死亡率が大幅に低下することが報告されています (29)。 前立腺組織のPUFA組成を分析した以前の研究では、相反する結果が得られました。 ただし、WATの脂肪酸組成は、攻撃性と進行に関連してPCaで研究されたことはありません。

このプログラムの目的は、前立腺がんの管理と研究に専念する臨床医、病理学者、および科学者を関連付けるネットワークを構築することです。 このネットワークは、根治的前立腺全摘除術によって治療された PCa 患者の多中心集中型データベースを生成し、前立腺および脂肪組織サンプルを含む標準化されたバイオリソース コレクションを備えています。 生物資源の使用は、主に脂肪組織/脂質と PCa 攻撃性の関係に向けられます。

このプロジェクトは、PCaの攻撃性と骨盤脂肪組織の組成との関連を特徴づけることを目的としています。 低リスク (n=100) または攻撃的 (n=100) PCa の患者からの脂肪組織サンプルは、1/ 脂質プロファイル (脂肪酸組成とリン脂質比率)、2/ アディポカインの発現、および 3/ 持続性について分析されます。ホルモン様活性を持つ有機汚染物質。 分析では、肥満、メッツコンポーネント、民族地理的起源、およびこの疾患の陽性の家族歴など、攻撃性の既知の要因が考慮されます。

実施される方法論と技術 I- データベースの構成とバイオリソース コレクション ネットワークの 7 つの臨床センターで根治的前立腺切除術によって治療された前立腺癌の各患者がコホートに含まれます。 過去 3 年間のこれらのセンターの外科的活動を考えると、18 か月後には、約 250 人のアフリカ系カリブ人の患者で、最低 1000 の包含が予想されます。標準化された臨床、生物学、および病理学的データは、各センター (Clinsight®) と集中管理および検証 (チーム 13)。 データを入力するための臨床チーム (臨床研究を専門とする技術者) には、財政的支援が提供されます。

PCa に一般的に関連付けられるデータは、データベースに入力されます: 管理項目 (名前、生年月日、住所、病院番号、病理学番号)、術前 PSA、臨床段階、病理学的項目 (標本の重量とサイズ、病理学的段階を含む)リンパ節の状態、グリーソンスコア、グレード 4 または 5 の %、主な焦点の大軸、マージンの状態)、およびフォローアップ項目 (生物学的および臨床的両方)。次の項目も指定されます: BMI、胴囲、空腹時血糖、血圧、循環脂質 (トリグリセリド、総コレステロール、LDL および HDL コレステロール)、進行中の治療 (脂質低下薬、HTA、糖尿病治療)、民族地理的起源、および PCa の家族歴 手術中、3 個骨盤脂肪組織 (軸 1 のタスク 1、2、および 3 でそれぞれ約 5g、2g、および 2g) がサンプリングされ、生物資源センターに送られ、-80°C で直ちに凍結されます。 内臓脂肪細胞はより代謝的に活性であるため、研究者は皮下 WAT の代わりに内臓 WAT をサンプリングすることを選択します (8)。 膀胱の周りの脂肪は常に非常に豊富であり、手術中に簡単に採取できるため、内臓ワットの中で、研究者は膀胱周囲の脂肪組織をサンプリングすることを選択します。 前立腺標本は直ちに病理部門に送られ、標準化された方法で管理されます。

コホートに含まれる患者は、インフォームド コンセントに署名するよう求められます (倫理委員会/IRB の合意後)。 プログラムに含まれる主題に関する注釈付きのバイオリソースは、CNIL によって定義された規則に従って管理されます。

M18で予想される1000人の患者からのコホートからの進行性または低リスク疾患のいずれかの患者の選択、高度に進行性疾患の100人の患者が選択されます。 選択は、高リスク疾患、主に高悪性度 PCa (グリーソンスコア 8 以上) および/または病理学的病期 pT3 の基準に基づいて行われます。 次に、これらの 100 人の患者のそれぞれが、緩慢な疾患を持ち、年齢が同一の状態 (50 以下、51 ～ 55、56 ～ 60、61 ～ 65、66 ～ 70、71 ～ 75、 75 歳以上) および BMI (標準、太りすぎ、および肥満)。 無痛性疾患の基準には、術前PSA < 10ng/ml、グリーソンスコア6以下(手術標本上)、およびpT2ステージが含まれます。 いくつかの無痛症の症例が 1 つの進行性の症例と一致する場合、腫瘍サイズが小さい方が優先されます。 これらの 200 人の患者からサンプリングされた脂肪組織が使用されます。

目的は、攻撃的で有意なPCaと脂肪組織の組成との関連を特定することです。 研究者らは、残留性有機汚染物質 (過去の累積的な暴露を反映する) および/または脂質組成 (過去の摂取を反映する) が、アディポカインの発現とともに、病気の攻撃性に関連している可能性があるという仮説を立てています。 PCa攻撃性の既知の要因（民族的起源、家族歴、および肥満状態）が考慮されます。

タスク 1: リピドーム分析 脂肪組織サンプルに対して実行される分析は、i) トリグリセリド脂肪酸組成、および ii) 脂肪細胞膜リン脂質クラスの相対量です。 脂肪細胞の原形質膜に見られる 5 つの主要なリン脂質クラスを分離して定量化できます: ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、およびスフィンゴミエリン。 脂肪組織は大部分がトリアシルグリセロールと約 1% のリン脂質で構成されているため、膜リン脂質の研究には、通常トリグリセリド脂肪酸組成分析 (400-500 mg) に必要な量よりも多くのサンプル量 (5 g) が必要になります。

脂肪組織サンプルは、クロロホルムとメタノールを使用して脂質抽出を行います (フォルチ法による)。 簡単に言えば、抽出物全体を真空乾燥させ、ヘキサンとメタノールの混合物に再溶解して中性 (ヘキサン可溶) と極性 (メタノール可溶) 脂質に分配します。 ヘキサン相のトリグリセリドは、シリカゲルプレートでの薄層クロマトグラフィーにより、他の中性脂質または極性脂質からさらに精製されます。 精製されたトリグリセリドは、メタノールのエステル交換を受けて、揮発性脂肪酸をメチルエステルとして生成します。 脂肪酸の分離と定量化は、ガスクロマトグラフィー (BPX-70 フェーズキャピラリーカラム、オンカラム注入、水素炎イオン化検出器) によって行われます。

タスク 2: アディポカインの測定 脂肪組織サンプルからの総 RNA は Trizol 技術によって抽出され、RNA の品質はゲル アガロース電気泳動と NanoDrop による定量化によってチェックされます。 エンコーディング mRNA の cDNA への逆転写後、逆転写 PCR 増幅の品質の制御は、ハウスキーピング遺伝子を使用して低サイクル数で行い、ゲル アガロースによる新しい制御を行います。 次いで、関心のある９つの遺伝子（アディポカイン）および正規化のための３つのハウスキーピング遺伝子（１８Ｓ、ベータアクチンおよびＳＤＨＡ）に対して、リアルタイム定量的ＰＣＲを３回行う、すなわち、１０８００ポイントを生成する。 PCRは384ウェルプレートで行われ、反応混合物はロボット配布によって配布されます。アディポカインリスト（n = 9）：ケメリン、インターロイキン-6（IL-6）、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤-1（PAI-1）、レチノール結合タンパク質 4 (RBP4)、腫瘍壊死因子アルファ (TNF アルファ)、ビスファチン、レプチン、アディポネクチン、アペリン。

タスク 3: 残留性有機汚染物質 (有機塩素系農薬) の測定 対象となる有機塩素系農薬の測定に使用される分析手法は、ダイオキシンや PCB 化合物などの他のクラスの親油性残留性有機汚染物質に対して以前に開発、検証、認定された手順に基づいています。 手短に言えば、加速溶媒抽出 (ASE) を使用する予備ステップの後に、活性化シリカおよびセライトカラムでの連続精製段階が続きます。 測定は、高分解能および/またはタンデム質量分析 (GC-HRMS、GC-MS/MS) と組み合わせたガスクロマトグラフィーを使用して実行されます。 定量化は、同位体希釈法に従って達成されます (つまり、13C 標識類似体を内部標準として使用します)。 主な対象物質の選択は、約 12 の主要な懸念農薬をリストするストックホルム条約に基づいて暫定的に行われます。

多施設標準化された臨床および生物学的データベースは、攻撃的または潜在的に緩慢な疾患の特徴を持つ PCa 患者の 2 つの均質なグループを特定します。 研究者らは、骨盤脂肪組織の分析により、1/ 脂質 (食事を反映)、2/ アディポカイン、および 3/ 貯蔵生体異物のいくつかのカテゴリーが、PCa 攻撃性のリスクの高低と優先的に関連しているかどうかが示されると期待しています。 このような識別は、予防戦略につながる可能性があります。